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作者：余祖玲河南科技大学

学位级别：硕士

本试验旨在分离出一株降解纤维素功能较强的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),研究其生物学特性并通过动物试验验证菌株安全性,优化其发酵工艺,探究发酵后预处理工艺。具体内容如下:1.降解纤维素凝结芽孢杆菌的分离鉴定以采集的土壤样... 详细信息

本试验旨在分离出一株降解纤维素功能较强的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),研究其生物学特性并通过动物试验验证菌株安全性,优化其发酵工艺,探究发酵后预处理工艺。具体内容如下:1.降解纤维素凝结芽孢杆菌的分离鉴定以采集的土壤样品为研究对象,利用羧甲基纤维素钠培养基进行初筛,通过测定滤纸酶活和纤维素酶活进行复筛。结果显示,在羧甲基纤维素钠培养基上共初筛出32株菌株,其中有7株菌株用刚果红染色后产生酶解圈。复筛分离出一株降解纤维素功能较强的菌株,纤维素酶活和滤纸酶活分别为59.68±1.43 U/m L和34.78±0.65 U/m L,命名MRS-913。通过菌株形态观察、生理生化鉴定以及16S r DNA序列测定,菌株MRS-913是凝结芽孢杆菌。2.凝结芽孢杆菌MRS-913的生物学特性分析及安全性试验分别对凝结芽孢杆菌MRS-913的生长曲线和p H曲线、胆盐、酸和人工胃液的耐受能力、药物敏感性等生物学特性以及安全性进行了检测。结果显示:凝结芽孢杆菌MRS-913随着菌株浓度的增加,菌液p H在不断降低,证明其生长过程中产酸,于18 h时菌体浓度达到最大,活菌数趋于稳定为6.2×10CFU/m L。菌株在胆盐质量浓度为0～4%的范围内,随着浓度的增加,菌株的存活率降低。在质量浓度4%的胆盐中,处理4 h存活率为32.8%;在p H为5的酸环境,处理4 h后菌株存活率高达93.4%,p H为1的酸环境处理4 h存活率为55.9%。此外,在菌株对人工胃液的耐受能力检测发现,凝结芽孢杆菌在p H为1.5的模拟胃液中可耐受180 min,存活率为62.8%。在p H为2.5的模拟胃液环境中可耐受180 min,存活率达74.8%。在100℃水浴15 min存活率达54.0%。抗生素敏感性试验表明,菌株除对杆菌肽、奥普托欣、林可霉素不敏感;对阿奇霉素低敏;对多黏菌素B、链霉素中度敏感;对红霉素、卡那霉素高敏外,对其他7种抗生素都极高敏。最后,用菌株发酵液灌喂小鼠14 d,小鼠饮食、精神及活动等临床现象均无异常表现,且无死亡。解剖观察小鼠的脏器,无任何病变等不良现象。3.凝结芽孢杆菌MRS-913发酵培养基及培养条件优化首先通过单因素试验确定了最佳碳源及氮源,结合单因素试验结果,通过Plackett-Burman试验设计得出影响菌体浓度的显著因素,进行对显著因素进行爬坡试验,最后通过Box-Behnken试验设计,得出结果后进行方差分析、等高线图和响应面图分析,得出最佳培养基配方。结果表明,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为豆粕。Plackett-Burman试验得出影响菌体浓度的显著因素:淀粉、豆粕和氯化钠。Box-Behnken试验结果表明,最佳培养基配方淀粉14.179 g/L、豆粕4.092 g/L、氯化钠1.993 g/L、玉米面10 g/L、磷酸二氢钠2 g/L、碳酸氢钠1.5 g/L、硫酸镁0.04 g/L、硫酸锰0.05 g/L、硫酸铵12.5 g/L。在基础培养条件下,理论菌落数为2.01×10CFU/m L。在此基础上对培养条件进性优化,结果表明,初始p H=7.0,培养温度40℃,转速210 r/min,三角瓶装液量30 m L/250 m L,接种量6%。菌株在最佳培养基配方和最佳培养条件下培养24 h后,活菌数为7.86×10CFU/m L,芽孢数为7.61×10CFU/m L,芽孢率为96.8%。4.凝结芽孢杆菌MRS-913制剂工艺研究通过对发酵产物进行一系列处理,初步得到一套发酵后预处理条件及储存温度。首先对麦麸、玉米粉、葡萄糖、碳酸钙和豆粕粉进行了最佳吸附载体的筛选,结果表明,麦麸作为吸附载体时,活菌体数最高,为7.15×10CFU/m L。在此基础上对离心吸附和直接吸附两种方式进行了对比,结果表明,发酵液经离心吸附菌体更易损失,离心吸附活菌数复测结果是直接吸附活菌数的1.98倍。此外,探究了40、45、50、55、60、65℃干燥下的最佳干燥温度,结果表明,在45℃恒温干燥条件下活菌体数最高,菌体数为6.97×10CFU/m L,随着干燥温度的增加活菌体数减少,在65℃干燥温度时活菌体数最低为4.67×10CFU/m L。最后,将初产品置于4℃、-20℃以及室温储存,存放7 d、14 d、30 d、60 d后进行活菌复测。结果表明,随着储存时间的延长,活菌数均呈下降趋势,其中,在-20℃条件下储存初产品的活菌数损失较快,保存60 d后菌体存活率为66.7%,在4℃的条件下储存初产品活菌数最高,60 d存活率达84.2%。

关键词：凝结芽孢杆菌分离鉴定生物学特性发酵制剂安全性

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胆盐水解酶基因的克隆及其在干酪乳杆菌CECT5276中的分泌表达

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动物营养学报 2021年第1期33卷 466-473页

作者：丁轲余祖玲王镨蒂余祖华李旺李元晓何万领曹平华张春杰刘宁河南科技大学宏翔生物饲料实验室洛阳471003 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471003

本试验旨在克隆植物乳杆菌(***)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(***)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆*** DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到***表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至*... 详细信息

本试验旨在克隆植物乳杆菌(***)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(***)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆*** DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到***表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至*** CECT5276中,通过乳糖诱导BSH分泌表达。采用牛磺酸标准曲线法对表达产物的BSH活力进行测定,并采用邻苯二甲醛(OPA)法对其降胆固醇能力进行测定。结果显示:本试验获得了BSH基因的全长序列,为975 bp;同源性比较显示该基因与*** MBUL69的BSH基因的同源性为99.6%;进化树分析显示该基因与*** MBUL69的BSH基因处于同一分支。表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得了1条分子质量约为37 ku的蛋白条带,与推测的BSH蛋白分子质量大小相符。酶活力测定结果表明重组菌株在37℃、0.5%乳糖诱导36 h时,表达产物中BSH活力最高,可达42.57 U/mL。重组菌株在含2%胆固醇的MRS培养基中培养48 h后,胆固醇降解率为94.43%。综上可知,本试验成功克隆了*** DPP8 BSH基因,并实现了其在*** CECT5276中的高效分泌表达。

关键词：胆盐水解酶克隆干酪乳杆菌分泌表达酶活力

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降解纤维素凝结芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

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河南科技大学学报（自然科学版） 2022年第5期43卷 84-91,99,M0007,M0008页

作者：余祖玲余祖华贾艳艳廖成水李旺李元晓何万领丁轲河南科技大学功能微生物与精准营养实验室河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023

为筛选降解纤维素性能优良的芽孢杆菌,探究其生物学特性,采集不同地方的土壤作为样品,将其接种到羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基进行分离。观察菌株是否产生水解圈进行初筛,再通过检测滤纸酶活和纤维素酶活进行复筛。通过形态学观察、生... 详细信息

为筛选降解纤维素性能优良的芽孢杆菌,探究其生物学特性,采集不同地方的土壤作为样品,将其接种到羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基进行分离。观察菌株是否产生水解圈进行初筛,再通过检测滤纸酶活和纤维素酶活进行复筛。通过形态学观察、生理生化及16S rDNA测序对菌株进行鉴定,并对分离菌株进行胆盐、酸、人工胃液、高温的耐受能力测试及药敏试验。筛选获得了1株降解纤维素功能较强的菌株MRS-913,经鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。生物学性能试验表明:该菌株在100℃水浴中15 min存活率达54.0%;在质量分数为4%的胆盐中4 h存活率为32.8%;在pH1.0的酸液中4 h存活率为55.9%;在pH1.5和pH2.5的模拟胃液中3 h存活率分别为62.7%和74.8%。药敏试验结果表明:该菌株对青霉素、氟苯尼考和头孢曲松高度敏感,对杆菌肽、奥普托欣和林可霉素不敏感。因此,凝结芽孢杆菌MRS-913有望成为微生态制剂的候选菌株。

关键词：纤维素凝结芽孢杆菌分离鉴定生物学特性

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鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

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畜牧兽医学报 2020年第10期51卷 2567-2575页

作者：余祖华丁轲贾艳艳郁川何雷廖成水李静张春杰李银聚吴庭才程相朝门凯凯张瑾余祖玲周子誉罗俊河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023 洛阳职业技术学院洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的... 详细信息

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。

关键词： TGFβ1 MDCC-MSB1细胞细胞增殖细胞凋亡迁移侵袭

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人与自然生命共同体理念的实践路径研究

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生态经济 2025年第01期 230-231页

作者：沈甜玲华东理工大学马克思主义学院

人与自然生命共同体理念是新时代生态文明建设的重要理论指导，体现了人类与自然相互依存、和谐共生的根本关系。这一理念不仅是对传统发展观的深刻反思，更是为全球生态治理提供的中国智慧和中国方案。在当前全球生态环境问题日益严峻...

人与自然生命共同体理念是新时代生态文明建设的重要理论指导，体现了人类与自然相互依存、和谐共生的根本关系。这一理念不仅是对传统发展观的深刻反思，更是为全球生态治理提供的中国智慧和中国方案。在当前全球生态环境问题日益严峻的背景下，气候变化、生物多样性减少、资源过度消耗等问题正威胁着地球的可持续发展，迫切需要一种新的发展模式与思维方式来应对。

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基于NLRP3炎症小体探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退模型大鼠卵巢组织铁死亡的作用及机制

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中国实验方剂学杂志 2025年第03期 40-48页

作者：王艺绚李祖昂郑允玲李堉成罗颂平朱玲广州中医药大学第一临床医学院广州中医药大学岭南医学研究中心广州中医药大学第一附属医院

目的：从NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体和铁死亡角度探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退（DOR）大鼠的疗效作用机制。方法：将48只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补冲调经方低、中、高剂量组和MCC950组，每组8只。除正常组外，... 详细信息

目的：从NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体和铁死亡角度探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退（DOR）大鼠的疗效作用机制。方法：将48只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补冲调经方低、中、高剂量组和MCC950组，每组8只。除正常组外，其余各组大鼠均于颈背部皮下注射D-半乳糖制备DOR大鼠模型。从造模第15天起，对补冲调经方低、中、高剂量组大鼠分别以14.4、28.8、57.6 g·kg-1·d-1的剂量灌胃。MCC950组大鼠予腹腔注射MCC950 10 mg·kg-1，隔日1次。各组连续给药4周。阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期；苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢中卵泡和黄体发育情况；生化及酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清性激素及白细胞介素-1β（IL-1β）的水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢NLRP3炎症小体、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）、转铁蛋白受体1（TFR1）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的mRNA和蛋白表达；氧化应激试剂盒检测卵巢超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。结果：实验过程中补冲调经方高剂量组有1只大鼠死亡，最终共有47只大鼠纳入指标检测和统计。与正常组比较，模型组大鼠动情周期明显紊乱，闭锁卵泡数量增多，血清性激素水平明显紊乱。卵巢组织NLRP3炎症小体、ACSL4和TFR1的mRNA和蛋白表达上调，而GPX4的mRNA和蛋白表达显著下调（P<0.01），卵巢SOD活性显著降低，MDA含量升高（P<0.01）。药物干预后，大鼠动情周期基本恢复规律，各级卵泡结构更完整且数量明显增多，血清性激素和IL-1β水平显著改善，卵巢NLRP3炎症小体、ACSL4和TFR1的mRNA和蛋白表达下调，GPX4的mRNA和蛋白表达显著上调，卵巢氧化应激水平明显减轻（P<0.05,P<0.01），其中尤以补冲调经方高剂量组和MCC950组效果明显。结论：DOR大鼠卵巢发生炎性损伤和铁死亡，补冲调经方能够抑制卵巢NLRP3炎症小体，减轻卵巢铁死亡程度，提高卵巢储备。

关键词：卵巢储备功能减退补冲调经方 NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体铁死亡氧化应激

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借用“小三角”，巧解语用效果比较题

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高中生 2025年第02期 57-59页

作者：余树财四川成都市石室成飞中学

语用效果比较题自2022年高考在全国乙卷设题以来，在2023年高考语文全国卷中出现的频次更高（见表1）。2024年高考语文全国卷虽未考到这类题，但并不代表备战2025年高考时就可以忽视对这类题的复习。

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生命周期视角下债务融资成本对制造业企业创新绩效的影响

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江苏商论 2025年第1期 87-90,96页

作者：余领昆明理工大学管理与经济学院云南昆明650504

制造业企业往往会存在“融资难、融资贵”的问题,这无疑会影响企业创新绩效。因此,文章以2011—2021年相关资料研究债务融资成本对制造业企业创新绩效的关系。同时,本文针对不同阶段的制造业企业,所实施的创新行为有所不同,债务融资成... 详细信息

制造业企业往往会存在“融资难、融资贵”的问题,这无疑会影响企业创新绩效。因此,文章以2011—2021年相关资料研究债务融资成本对制造业企业创新绩效的关系。同时,本文针对不同阶段的制造业企业,所实施的创新行为有所不同,债务融资成本对企业创新绩效的作用会有所差异。结果表明:债务融资成本对制造业企业创新绩效产生显著的负向影响,该影响在生命周期不同阶段的制造业企业中有所差异。在成长期和成熟期的制造业企业中更为显著,在衰退期的制造业企业中影响较弱。

关键词：债务融资成本制造业企业创新绩效生命周期

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班主任应对青少年非自杀性自伤行为的多维干预策略

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中小学心理健康教育 2025年第1期 67-69页

作者：戴佳玲南京航空航天大学苏州附属中学苏州215122

青少年非自杀性自伤(Non-Suicidal Self-Injury,NSSI)是一种常见、高发且高度复杂的行为,这种自伤被部分青少年作为处理情绪、进行社会性求助的途径。班主任因为工作性质,平日里与学生接触多,和学生关系较亲密,是学校心理健康防护系统... 详细信息

青少年非自杀性自伤(Non-Suicidal Self-Injury,NSSI)是一种常见、高发且高度复杂的行为,这种自伤被部分青少年作为处理情绪、进行社会性求助的途径。班主任因为工作性质,平日里与学生接触多,和学生关系较亲密,是学校心理健康防护系统中的骨干力量,科学认知青少年非自杀性自伤的原因,有效识别学生非自杀性自伤行为的表现,了解校园非自杀性自伤行为的处理程序和应对策略,对早期发现和预防校园危机事件有重要意义。

关键词：班主任青少年非自杀性自伤应对策略

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“三路径三维度”作业设计模式研析

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小学科学 2025年第2期 65-67页

作者：廖晓玲广州市增城区正果镇水围小学广东

核心素养是本次课程标准修订的重要基础,从这个意义上说,素养导向的教学将成为教师今后追求的发展方向。“三路径三维度”作业设计模式是依据核心素养,探讨从前置学习—课内提质—课后拓展三个路径设计基础型、提高型和实践拓展型作业... 详细信息

核心素养是本次课程标准修订的重要基础,从这个意义上说,素养导向的教学将成为教师今后追求的发展方向。“三路径三维度”作业设计模式是依据核心素养,探讨从前置学习—课内提质—课后拓展三个路径设计基础型、提高型和实践拓展型作业的具体实施策略,同时将学生作业的完成情况作为科学学业评价的关键组成部分。旨在通过合理的作业设计与实施,有效减轻学生的学习负担,激发并保持他们对科学的好奇心和求知欲,提高其核心素养水平。

关键词：小学科学作业设计 “三路径三维度” 核心素养

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