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基于抗炎作用研究凉膈散及其清上、泄下拆方的配伍机制

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中药药理与临床 2024年

作者：姜丽邹丽芳郑晓婵郭新邓梁芷晴余林中刘俊珊南方医科大学中医药学院广东省中药制剂重点实验室

目的: 基于网络药理学和斑马鱼炎症模型探讨凉膈散及其清上、泄下拆方的抗炎作用及配伍机制。方法: 通过三种斑马鱼炎症模型、生存曲线分析和组织病理切片实验，验证凉膈散及其清上、泄下拆方的抗炎作用。运用TCMSP数据库筛选出凉膈散... 详细信息

目的: 基于网络药理学和斑马鱼炎症模型探讨凉膈散及其清上、泄下拆方的抗炎作用及配伍机制。方法: 通过三种斑马鱼炎症模型、生存曲线分析和组织病理切片实验，验证凉膈散及其清上、泄下拆方的抗炎作用。运用TCMSP数据库筛选出凉膈散及其清上、泄下拆方的有效化学成分及对应靶点，通过GeneCards、DisGeNET等数据库检索炎症相关靶点，将凉膈散及其清上、泄下拆方的有效化学成分靶点与炎症靶点取交集，运用STRING数据库对交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-Protein Interaction，PPI)网络，采用David数据库对潜在靶点进行基因本体论(Gene Ontology，GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)通路富集分析。采用实时荧光定量PCR检测关键靶点的基因表达情况。结果: 斑马鱼炎症模型实验结果表明，与正常对照组比较，模型对照组斑马鱼中性粒细胞显著向损伤部位迁移聚集，卵黄囊显微注射LPS后存活时间缩短，死亡率显著升高(P＜0.01)；与模型对照组比较，地塞米松、不同浓度凉膈散、清上和泄下方均能显著抑制炎症反应，减少中性粒细胞的迁移，延长卵黄囊显微注射LPS后斑马鱼存活时间，提高其生存率(P＜0.05或P＜0.01)；与凉膈散全方相比，清上、泄下方抑制中性粒细胞迁移的作用减弱(P＜0.05或P＜0.01)，且两拆方表现出协同作用(CI＜1)，清上、泄下方对LPS注射斑马鱼卵黄囊后的生存保护作用减弱(P＜0.01)，凉膈散全方作用最佳。网络药理学分析结果显示，凉膈散全方有176个有效化学成分，如连翘苷、槲皮素、山柰酚、木犀草素等，对应266个靶点；清上方有74个有效化学成分，如栀子苷、槲皮素、汉黄芩素、刺槐素等，对应233个靶点；泄下方有109个有效化学成分，如大黄素、大黄酸、谷甾醇等，对应234个靶点。炎症性疾病相关靶点有10933个。两者交集靶点共168个。通过PPI网络图筛选出核心靶点有蛋白激酶B(AKT1)、肿瘤蛋白p53(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGFA)等。GO功能分析结果表明凉膈散及其清上、泄下拆方中的活性成分与RNA聚合酶Ⅱ转录正调节、调控基因表达和药物反应等生物过程，质膜、胞外区域、胞液等细胞组成，蛋白质结合、酶结合等分子功能密切相关。KEGG通路富集分析发现凉膈散及其清上、泄下拆方可通过癌症通路、AGE-RAGE通路、脂质与动脉粥样硬化、流体剪切应力与动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活等通路发挥抗炎作用。实时荧光定量PCR结果表明，与正常对照组比较，模型对照组炎症因子Tnfα、Il6 mRNA表达显著上调(P＜0.01)，Akt mRNA表达显著下调(P＜0.01)；与模型对照组比较，凉膈散及其清上、泄下拆方均可显著降低炎症因子Tnfα、Il6 mRNA的表达(P＜0.01)，凉膈散能显著上调Akt mRNA表达(P＜0.05)。结论: 凉膈散及其清上、泄下拆方均具有显著抗炎作用且两拆方表现出协同作用，其作用机制与关键靶点TNF、IL-6、AKT相关。

关键词：凉膈散炎症治法网络药理学斑马鱼

连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 594-604页

作者：郭新邓郭卓琳孙冬梅邹丽芳区锦莹余林中卢子滨曹惠慧刘俊珊南方医科大学中医药学院中药药理实验室//广东省中药制剂重点实验室//广东省中药制剂技术工程实验室广东广州510515 广东一方制药有限公司广东佛山528244

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理... 详细信息

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(剂量为400、600、800μg/mL),分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型,采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异,并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组(400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(400、600、800μg/mL),采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型,通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL)和连翘配方颗粒处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL),采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果与模型对照组比较,连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量(P<0.001)和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),升高斑马鱼的存活率(P<0.01或P<0.001);减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集(P<0.05或P<0.01或P<0.001);并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用,两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的mRNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外,其他作用均无明显差异。

关键词：连翘中药配方颗粒药效等效性斑马鱼

负载雷公藤红素的中空介孔聚多巴胺纳米复合物的制备及体外抗肿瘤活性研究

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中南药学 2024年第5期22卷 1119-1124页

作者：潘慕倩蔡义思袁立霞余林中南方医科大学中医药学院广州510515

目的制备负载雷公藤红素的中空介孔聚多巴胺纳米复合物(H-PDA/Cel@HA),并考察其体外抗肿瘤活性研究。方法采用湿化学刻蚀法制备H-PDA/Cel@HA,通过粒径、Zeta电位、透射电镜、紫外吸收光谱等方法对其进行表征,并从细胞毒性、细胞活性... 详细信息

目的制备负载雷公藤红素的中空介孔聚多巴胺纳米复合物(H-PDA/Cel@HA),并考察其体外抗肿瘤活性研究。方法采用湿化学刻蚀法制备H-PDA/Cel@HA,通过粒径、Zeta电位、透射电镜、紫外吸收光谱等方法对其进行表征,并从细胞毒性、细胞活性氧水平测定、活/死细胞染色实验、细胞凋亡等方面评价H-PDA/Cel@HA对乳腺癌4T1细胞的抗肿瘤活性。结果所制备的H-PDA/Cel@HA呈现出中空立方体的形貌,平均粒径为(183.4±12.3)nm,Zeta电位为(-30.4±1.1)mV;载药量为(13.25±1.16)%,包封率为(66.27±5.78)%;H-PDA/Cel@HA显著抑制乳腺癌4T1细胞的生长,相较于游离的Cel,其对正常细胞(L929)具有更好的生物相容性。此外,H-PDA/Cel@HA还通过增加4T1细胞内的活性氧水平,诱导细胞凋亡。结论所制备的H-PDA/Cel@HA具有良好的生物相容性和肿瘤靶向递送能力,可有效抑制肿瘤细胞的生长。

关键词：雷公藤红素中空聚多巴胺活性氧细胞凋亡

中药药理学贯通性实验的设计及应用——以凉膈散为例

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中国中医药现代远程教育 2024年第8期22卷 149-152页

作者：余景滔姜丽方小川卢子滨余林中陈育尧曹惠慧区锦莹刘俊珊南方医科大学中医药学院广东省中药制剂重点实验室广东广州510515

目的中药药理学是以传统中药学与现代药理学为主体的新兴交叉学科,迄今国内尚未有完善的中药药理学贯通性实验教学方案。方法结合现有基础教学条件及中药药理学教学团队的教学改革实践经验,选择凉膈散(LGS)进行实验设计。结果建立了... 详细信息

目的中药药理学是以传统中药学与现代药理学为主体的新兴交叉学科,迄今国内尚未有完善的中药药理学贯通性实验教学方案。方法结合现有基础教学条件及中药药理学教学团队的教学改革实践经验,选择凉膈散(LGS)进行实验设计。结果建立了完善的贯通性实验教学方案,并选取中药学和中药制药2个专业学生进行教学实践。结论此研究为中医药院校及综合性院校的中药学专业进行实验教学改革提供模板及思路。

关键词：中药药理学贯通性实验设计应用凉膈散

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析感冒清热颗粒化学成分

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中药材 2022年第2期45卷 359-367页

作者：夏玉英李菁李楚源覃仁安余林中南方医科大学中医药学院广东广州510515 广州白云山和记黄埔中药有限公司广东广州510515 广州医科大学附属第一医院广东广州510515

目的:运用超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术分析感冒清热颗粒中的化学成分。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(2.1 mm×150 mm, 1.8μm)色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,... 详细信息

目的:运用超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术分析感冒清热颗粒中的化学成分。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(2.1 mm×150 mm, 1.8μm)色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min。采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式分别进行一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据采集,结合对照品碎片裂解规律及文献报道对感冒清热颗粒化学成分进行表征。结果:从感冒清热颗粒中共表征出188个化合物,主要包括酚酸类、黄酮类、香豆素类、生物碱类和皂苷类等,其中,来源于葛根的化学成分数量最多。结论:通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对感冒清热颗粒的化学成分进行表征,为其药效物质基础研究和质量控制研究奠定了基础。

关键词：感冒清热颗粒超高效液相色谱串联四级杆飞行时间高分辨质谱成分分析

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中药药理学贯通式教学实验设计及应用

时珍国医国药 2023年第5期34卷 1229-1230页

作者：郭新邓余林中曹惠慧区锦莹卢子滨刘俊珊南方医科大学中医药学院广东广州510515

为了解决中药药理学实验教学中目前存在的问题,结合实验教学改革趋势,以南方医科大学中药学和中药制药专业为例,采用文献研究法和个案分析法,制定实验教学改革思路,构建贯通式实验教学模式,开展实践贯通式实验的一轮教学,与过往实验教... 详细信息

为了解决中药药理学实验教学中目前存在的问题,结合实验教学改革趋势,以南方医科大学中药学和中药制药专业为例,采用文献研究法和个案分析法,制定实验教学改革思路,构建贯通式实验教学模式,开展实践贯通式实验的一轮教学,与过往实验教学模式相比较,发现贯通式实验可以提高学生的课程掌握效率和自主积极性。中药药理学教学实验的改革旨在培养学生的创新、发现和解决问题的能力,提高实验课程的质量,以满足国家对于高校实验教学现代化的要求。

关键词：中药药理学贯通式实验实验教学教学改革

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的感冒清热颗粒入血成分分析

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中药材 2022年第8期45卷 1889-1893页

作者：夏玉英李菁李楚源王德勤余林中覃仁安广州白云山和记黄埔中药有限公司广东广州510555 南方医科大学中医药学院广东广州510515 广州医科大学附属第一医院广东广州510120

目的:分析大鼠口服给予感冒清热颗粒后的入血成分。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,根据保留时间、精确相对分子量和二级质谱裂解碎片,结合对照品及文献报道比对,对感冒清热颗粒入血成分进行分析。结果:共表征了大鼠血清中的40个化学成... 详细信息

目的:分析大鼠口服给予感冒清热颗粒后的入血成分。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,根据保留时间、精确相对分子量和二级质谱裂解碎片,结合对照品及文献报道比对,对感冒清热颗粒入血成分进行分析。结果:共表征了大鼠血清中的40个化学成分,其中,原型成分31个,代谢产物9个。结论:建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法初步分析了感冒清热颗粒的入血成分,入血成分主要为黄酮类化合物。

关键词：感冒清热颗粒 UPLC-Q-TOF-MS/MS 原型成分代谢产物

斑马鱼——一种可用于中药抗焦虑药研究的模式生物

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中药药理与临床 2011年第1期27卷 104-106页

作者：方芳余林中南方医科大学中医药学院广州510515

斑马鱼作为模式生物在生物学研究中已有一段时间了,尤其是在毒理、发育和遗传方面。最近,斑马鱼正以应激及焦虑新模式生物的姿态出现,其在生理和行为学方面的特点,更适合中药抗焦虑药药理研究和药物筛选。

关键词：斑马鱼抗焦虑模式生物

凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤炎症调控的影响

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中华中医药杂志 2009年第11期24卷 1433-1436页

作者：余林中胡孔友南方医科大学中医药学院广州510515

目的:探讨凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤炎症调控机制。方法:静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型。用凉膈散进行治疗,实验结束后测定大鼠血清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-... 详细信息

目的:探讨凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤炎症调控机制。方法:静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型。用凉膈散进行治疗,实验结束后测定大鼠血清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的含量以及肺湿/干质量比值。结果:与对照组比较,LPS组大鼠TNF-α含量在LPS致伤后1h开始升高,至2h达到最高峰(P<0.01),随后迅速下降;IL-1β含量在LPS致伤后2h显著升高,至8h达到峰值(P<0.05),随后迅速下降;IL-10含量在LPS致伤后2h开始升高(P<0.05)。凉膈散各剂量组及地塞米松组与LPS组比较,TNF-α、IL-1β、大鼠肺湿/干质量比值显著下降,IL-10明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:凉膈散能够减轻肺损伤,其作用机制可能是通过促进抗炎介质的分泌来抑制炎症介质的释放,从而调节炎症和抗炎反应之间的平衡。

关键词：炎症介质抗炎介质急性肺损伤内毒素凉膈散