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MBL对LPS刺激的不同分化和活化状态THP1/CD14细胞产生TNF-α和IL-12的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第5期26卷 458-462页

作者：陈月余新沛卢晓陈政良南方医科大学免疫学教研室

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（MBL）对脂多糖（LPS）刺激的不同分化和活化状态THP1/CD14细胞产生TNF-α和IL-12的影响.方法用PMA和/或IFN-γ诱导不同分化和活化状态的THP1/CD14细胞,以不同浓度人MBL预处理2 h后再用光滑型LPS刺激24h.收... 详细信息

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（MBL）对脂多糖（LPS）刺激的不同分化和活化状态THP1/CD14细胞产生TNF-α和IL-12的影响.方法用PMA和/或IFN-γ诱导不同分化和活化状态的THP1/CD14细胞,以不同浓度人MBL预处理2 h后再用光滑型LPS刺激24h.收集培养上清,以ELISA从蛋白水平分析其TNF-α和IL-12 p40＋p70的产生.收集细胞提取总RNA,以RT-PCR从转录水平评估TNF-α和IL-12的表达.结果ELISA检测发现,LPS可刺激各组细胞分泌TNF-α和IL-12 p40＋p70;IFN-γ活化的THP1/CD14细胞产生IL-12 p40＋p70最高,PMA分化的THP1/CD14细胞最低;PMA分化＋IFN-γ活化的THP1/CD14细胞分泌TNF-α最高,未用PMA或IFN-γ预刺激的THP1/CD14细胞最低.高浓度MBL（50～100 mg/L）可抑制LPS诱导细胞分泌TNF-α和IL-12 p40＋ p70的作用,低浓度MBL（1～10 mg/L）则几无影响.RT-PCR分析亦显示,与相应只用LPS刺激的实验组相比,高浓度MBL（50 mg/L）对不同实验组LPS诱导的TNF-α、IL-12 p35和p40的mRNA表达均有不同程度的抑制作用.结论MBL可抑制LPS诱导的不同分化和活化状态THP1/CD14细胞产生TNF-α和IL-12,THP1/CD14细胞可用做进一步剖析MBL在免疫应答与细胞因子网络调控中的作用及其机理的模型.

关键词：甘露聚糖结合凝集素天然免疫脂多糖 THP1/CD14细胞细胞因子

Balb/c小鼠甘露聚糖结合凝集素-C基因的克隆与鉴定

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第一军医大学学报 2003年第3期23卷 236-238,241页

作者：王宏伟陈政良左大明卢晓余新沛第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Bal... 详细信息

目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因cDNA全长735 bp,编码245个氨基酸残基,包含了完整的编码区基因序列。经核苷酸序列比较分析发现,扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因与Genbank中发表的序列具有100%的同源性,与人的MBL基因的同源性为71.4%。结论成功地克隆到完整的Balb/c小鼠MBL-C编码区基因,为进一步在整体水平研究MBL分子的天然免疫功能提供了必要的条件。

关键词：甘露糖结合凝集素-C RT-PCR cDNA克隆小鼠

MBL对LPS诱导树突状细胞成熟的调节作用

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 366-369,373页

作者：陈月余新沛刘莹陈政良南方医科大学免疫学教研室

目的探讨甘露聚糖结合凝集素对细菌脂多糖诱导的人外周血单核细胞来源树突状细胞(MoDC)成熟的影响。方法从健康成人外周血分离能黏附塑料的单核细胞,在rhGMCSF和rhIL4条件下培养5d,然后在有或无LPS和不同质量浓度(10～100mgL)天然人MBL... 详细信息

目的探讨甘露聚糖结合凝集素对细菌脂多糖诱导的人外周血单核细胞来源树突状细胞(MoDC)成熟的影响。方法从健康成人外周血分离能黏附塑料的单核细胞,在rhGMCSF和rhIL4条件下培养5d,然后在有或无LPS和不同质量浓度(10～100mgL)天然人MBL条件下继续培养2d。用倒置显微镜观察DC的形态,以FACS分析DC的表型,用MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力,以酵母多糖颗粒吞噬试验评估DC的抗原摄取能力,用ELISA检测DC培养上清液中TNFα和IL12p40+p70的含量。结果MBL以剂量依赖方式下调LPS诱导人MoDC表面分子CD83和CD86表达,增强其摄取酵母多糖颗粒的能力,降低其激发初始T细胞增殖的能力,并抑制其LPS诱导的TNFα和IL12p40+p70分泌,但MBL质量浓度低至10mgL时对LPS诱导DC成熟作用几无影响。结论高质量浓度MBL能抑制LPS诱导的DC成熟过程,提示其可能在LPS引发疾病包括败血症或感染性休克中具有调节作用,亦提供了分析DC分化成熟有关信号途径的新手段。

关键词：甘露聚糖结合凝集素树突状细胞成熟脂多糖

中国佤族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第11期25卷 917-918页

作者：余新沛吕成伟葛争鸣李江川马丽陈政良南方医科大学免疫学教研室广州510515 云南省计划生育研究所免疫室

甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)通过激活补体凝集素途径和调理吞噬作用清除病原体及受感染细胞,在机体天然免疫中起关键作用[1].已发现MBL基因上存在至少20个单核苷酸多态性(SNP)位点,仅其中6个SNP位点对MBL血清水平... 详细信息

甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)通过激活补体凝集素途径和调理吞噬作用清除病原体及受感染细胞,在机体天然免疫中起关键作用[1].已发现MBL基因上存在至少20个单核苷酸多态性(SNP)位点,仅其中6个SNP位点对MBL血清水平有较大的影响,他们分别是启动子区-550(G/C)、-221(C/G)、+4(C/T)3个位点(分别称H/L、X/Y和P/Q等位基因)和结构基因第一外显子CGT52TGT、GGC54GAC、GGA57GAA 3个密码子点突变(分别称为D、B、C等位基因,即A野生型).按照排列组合的规律这6个SNP可随机组合成26种单倍型,但由于结构基因3个SNP位点与不同的启动子单倍型连锁不平衡,至今只检测到7种常见的单倍型。

关键词：单核苷酸多态性(SNP) MBL基因基因型单倍型甘露聚糖结合凝集素 SNP位点人群佤族中国凝集素途径

中国维吾尔族人群MBL基因CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变基因频率的研究

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南方医科大学学报 2006年第12期26卷 1764-1767页

作者：钟成全余新沛王方勇库热西江.托呼提陈政良南方医科大学免疫学教研室广东广州510515 新疆维吾尔自治区和田地区墨玉县医院新疆墨玉848100

目的了解我国维吾尔族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54和57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)的情况。方法收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段并应... 详细信息

目的了解我国维吾尔族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54和57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)的情况。方法收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段并应用荧光探针杂交可视技术检测点突变。结果95例维吾尔族样本中,检出54位密码点突变纯合子2例和杂合子28例,未发现CGT52TGT和GGA57GAA点突变。结论维吾尔族人群MBL结构基因CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的频率分别为0、0.168和0。

关键词：甘露聚糖结合凝集素点突变聚合酶链反应分子杂交

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七种常见MBL基因单倍型标准质粒的构建

第一军医大学学报 2005年第11期25卷 1379-1383页

作者：余新沛陈月张丽芸卢晓陈政良南方医科大学免疫学教研室广东广州510515

目的构建7种常见的MBL基因单倍型标准质粒。方法以已确认MBL基因单倍型及基因型的DNA样本为模板,利用SSP-PCR技术扩增出包含MBL基因启动子区及第一外显子的单倍型片段并将其克隆入T载体;用定点突变技术分别将其第一外显子52和57位密码... 详细信息

目的构建7种常见的MBL基因单倍型标准质粒。方法以已确认MBL基因单倍型及基因型的DNA样本为模板,利用SSP-PCR技术扩增出包含MBL基因启动子区及第一外显子的单倍型片段并将其克隆入T载体;用定点突变技术分别将其第一外显子52和57位密码相应的碱基突变;采用PCR和测序进行鉴定。结果以单倍型及基因型已确认的DNA样本为模板,采用SSP-PCR和分子克隆技术获得单倍型HYPA、LXPA、LYQA、LYPA和LYPB重组质粒;以单倍型HYPA及LYQA重组质粒为模板,采用定点突变技术获得单倍型HYPD及LYQC标准质粒。结论构建成功常见的7种MBL基因单倍型标准质粒,为采用SSP-PCR、Real-timePCR等技术分析MBL基因相应的SNP及其单倍型与基因型提供了标准对照。

关键词：甘露聚糖结合凝集素单核苷酸多态性单倍型标准质粒

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广东地区汉族人MBL基因点突变的研究

细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 751-752,754页

作者：钟成全王方勇吕成伟余新沛卢晓张丽芸陈政良南方医科大学免疫学教研室广东广州510515

目的:研究我国汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54、57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)。方法:收集广东地区汉族普通人群的血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视... 详细信息

目的:研究我国汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54、57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)。方法:收集广东地区汉族普通人群的血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其MBL基因的点突变。结果:从202份样本中,检出GGC54GAC点突变纯合子6例和杂合子44例(等位基因频率为0.139),GGA57GAA点突变杂合子1例(频率为0.002),未发现CGT52TGT点突变(频率为0)。结论:广东地区汉族人群MBL基因点突变的频率较高,为防治MBL缺损病提供了一定的实验依据。

关键词：甘露聚糖结合凝集素点突变聚合酶链反应杂交探针基因点突变 MBL基因汉族人群广东地区 GGC54GAC点突变等位基因频率

中国维吾尔族人群MBL基因启动子及第一外显子区SNP及其单倍型与基因型研究

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现代免疫学 2007年第2期27卷 99-103页

作者：苏黎余新沛张丽芸库热西江.托呼提陈政良南方医科大学免疫学教研室新疆维吾尔自治区和田地区墨玉县医院墨玉848100

收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以序列特异性引物-多聚酶链反应技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性位点-550G/C(称H/L等位基因)、-221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)和结构基因第... 详细信息

收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以序列特异性引物-多聚酶链反应技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性位点-550G/C(称H/L等位基因)、-221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)和结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA(分别称为D、B、C等位基因,野生型即A等位基因),并分析其单倍型与基因型。发现MBL基因启动子区等位基因主要为L、Y、P,第一外显子等位基因只发现B,未检出C和D;检出5种单倍型,其频率分别是HYPA 0.282、LYPA 0.268、LXPA 0.260、LYPB 0.120、LYQA 0.070。检出12种基因型,其频率分别为HYPA/HYPA 0.183、LXPA/LXPA 0.141、LYPA/LYQA 0.113、LYPA/LYPA 0.112、LYPA/LXPA 0.085、HYPA/LYPA 0.085、LXPA/LYPB 0.085、HYPA/LXPA 0.070、HYPA/LYPB 0.042、LYPA/LYPB 0.028、LYPB/LYQA 0.028、YPB/LYPB 0.028。

关键词：甘露聚糖结合凝集素单核苷酸多态性序列特异性引物-多聚酶链反应

丁苯酞软胶囊与尼莫地平对卒中后血管性痴呆患者的疗效

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解放军预防医学杂志 2016年第4期34卷 516-518页

作者：程文姚杨健余新沛广州军区广州总医院医务部保健科广州510515 广州军区广州总医院干部病房二科

目的探讨丁苯酞软胶囊(NBP)及尼莫地平(NMD)治疗卒中后血管性痴呆(VD)的有效性和安全性。方法选择2013年5月至2015年8月在广州军区广州总医院治疗的VD患者96例,按随机数字法分为NBP组和NMD组,各48例。NBP组口服丁苯酞软胶囊治疗,NMD组... 详细信息

目的探讨丁苯酞软胶囊(NBP)及尼莫地平(NMD)治疗卒中后血管性痴呆(VD)的有效性和安全性。方法选择2013年5月至2015年8月在广州军区广州总医院治疗的VD患者96例,按随机数字法分为NBP组和NMD组,各48例。NBP组口服丁苯酞软胶囊治疗,NMD组口服尼莫地平治疗,治疗周期6个月。治疗前及治疗后3个月和6个月随访,利用认知功能量表(MMSE、MOCA)和日常生活能力量表(ADL)对疗效进行评价,并比较2组不良反应发生情况。结果 2组治疗前,MMSE、MOCA和ADL评分相比差异不具有统计学意义(P>0.05);治疗后3个月及6个月,NBP组MMSE、MOCA评分均明显高于NMD组,而ADL评分明显低于NMD组(P<0.01);NBP组不良反应发生率为10.4%,明显低于NMD组(22.9%)(P<0.05)。结论 NBP与NMD均能明显改善卒中后血管性痴呆患者的认知功能和日常生活能力,但NBP效果更显著,且安全性更高。

关键词：丁苯酞软胶囊尼莫地平血管性痴呆