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ETHE1调节结直肠癌血管生成的作用及机制研究

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ETHE1调节结直肠癌血管生成的作用及机制研究

作者：佘晓伟华中科技大学

学位级别：硕士

目的:1.探明硫双加氧酶(ETHE1)在结直肠癌中表达水平的变化及其对预后的影响。2.探究ETHE1在体内和体外实验中对结直肠癌血管生成能力的影响。3.探索ETHE1调控结直肠癌血管生成的分子机理。方法:1.通过生物数据库、临床新鲜样本分析ETHE... 详细信息

目的:1.探明硫双加氧酶(ETHE1)在结直肠癌中表达水平的变化及其对预后的影响。2.探究ETHE1在体内和体外实验中对结直肠癌血管生成能力的影响。3.探索ETHE1调控结直肠癌血管生成的分子机理。方法:1.通过生物数据库、临床新鲜样本分析ETHE1在结直肠癌中的表达及预后情况。利用GEO数据库进行GSEA富集分析,寻找ETHE1富集的信号通路。利用慢病毒包装技术构建ETHE1稳定低表达结直肠癌细胞系SW48、HCT116和稳定高表达结直肠癌细胞系SW48、SW480,通过Western blot技术验证通路富集结果。2.利用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行小管形成实验、Transwell迁移实验、CCK-8增殖实验明确ETHE1在体外对结直肠癌血管生成的影响。进一步采用裸鼠皮下成瘤实验以及对肿瘤组织免疫组化染色在体内验证ETHE1对血管生成的作用。3.通过GSEA富集分析寻找ETHE1影响血管生成可能的通路,并在稳定细胞系中通过Western blot、免疫共沉淀技术、免疫荧光实验、胞浆胞核蛋白分离实验验证ETHE1对可能信号通路的影响。利用信号通路抑制剂抑制信号传递后,通过Western blot、小管形成实验、Transwell迁移实验、CCK-8增殖实验在体外验证ETHE1影响血管生成依赖于这一信号通路,并在体内实验中重复验证。结果:1.在生物数据库、临床标本中,ETHE1在结直肠癌中呈现低表达状态,并且ETHE1低表达组相比高表达组患者预后更好。通过GSEA富集分析发现,ETHE1低表达与肿瘤血管生成有关,并且与VEGF-A上调有关。通过在稳定细胞系中利用Western blot技术进行验证发现,ETHE1与VEGF-A呈现负相关。2.通过HUVEC小管形成实验、Transwell迁移实验、CCK-8增殖实验发现,ETHE1高表达后小管形成数目减少,HUVEC迁移数目减少、增殖生长减慢。皮下成瘤实验发现ETHE1高表达后肿瘤生长速率下降,并且肿瘤内VEGF-A、CD31表达量减低。3.通过GSEA富集分析发现,ETHE1可能参与STAT3信号通路。通过蛋白水平检测发现,ETHE1影响STAT3的磷酸化水平,并且通过免疫共沉淀技术和免疫荧光实验发现ETHE1能够和STAT3结合。通过胞浆胞核分离实验发现,ETHE1影响STAT3的入核进而影响STAT3对下游的影响。利用STAT3特异性抑制剂STATTIC在体外及体内验证了ETHE1影响血管生成依赖于STAT3/VEGF-A信号通路。通过定量免疫共沉淀技术,发现ETHE1促进TC45与STAT3的结合,并通过沉默TC45的表达,发现ETHE1对STAT3磷酸化水平的影响依赖于TC45。结论:***1在结直肠癌中低表达,并且ETHE1低表达与结直肠癌患者预后不良相关。***1在体外和体内影响结直肠癌血管生成,并且依赖于STAT3/VEGF-A信号轴。***1通过促进TC45与STAT3的结合调节STAT3的去磷酸化。

关键词：结直肠癌血管生成 ETHE1 STAT3 VEGF-A TC45

利用CRISPR/Cas9技术构建人MCT1基因敲除结肠癌RKO稳定细胞系及其生物学功能检测

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华中科技大学学报（医学版） 2022年第1期51卷 1-6页

作者：佘晓伟孙黎胡俊波徐丰华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科武汉430030

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能。方法将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western b... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能。方法将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路。结果 CRISPRv2-MCT1-KO质粒成功构建;Western blot和DNA测序结果显示稳定敲除MCT1基因的人结肠癌RKO细胞构建成功;与对照组相比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低(P<0.01);MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);GSEA分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展。结论通过CRISPR/Cas9技术成功构建MCT1基因稳定敲除的结肠癌RKO细胞系,可能成为研究MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具。

关键词： CRISPR/Cas9 MCT1 乳酸细胞增殖

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浅谈彝族小闷笛的进一步改良

民族音乐 2014年第4期 50-51页

作者：佘晓伟楚雄州民族艺术剧院民族乐团

小闷笛是世界上最为细小的袖珍型乐器,也是彝族人民中广为流传的一种民间竹管吹奏乐器,管身长不过7厘米,且有4个音孔,哨子采用比较独特的蓑蛾虫茧制作,音色优美、清脆、高昂、明亮,吹出的曲调如泣如诉,婉转而动听,被彝家人誉为会说话的... 详细信息

小闷笛是世界上最为细小的袖珍型乐器,也是彝族人民中广为流传的一种民间竹管吹奏乐器,管身长不过7厘米,且有4个音孔,哨子采用比较独特的蓑蛾虫茧制作,音色优美、清脆、高昂、明亮,吹出的曲调如泣如诉,婉转而动听,被彝家人誉为会说话的乐器。

关键词：彝族改良吹奏乐器袖珍型

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大鼠腹腔异位心脏移植模型的制作

南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第4期30卷 458-459页

作者：佘晓伟沈振亚于曙东胡雁秋滕小梅苏州大学附属第一医院心血管外科江苏苏州215006

目的:探讨建立大鼠腹腔异位心脏移植模型手术操作技巧。方法:应用传统Ono术式建立Wistar至SD大鼠的腹部异位心脏移植模型,并对其相应环节适当改进。结果:共实施大鼠腹部异位心脏移植50例,成功45例,手术成功率90%。结论:模型建立成功的... 详细信息

目的:探讨建立大鼠腹腔异位心脏移植模型手术操作技巧。方法:应用传统Ono术式建立Wistar至SD大鼠的腹部异位心脏移植模型,并对其相应环节适当改进。结果:共实施大鼠腹部异位心脏移植50例,成功45例,手术成功率90%。结论:模型建立成功的关键为:①使用合理的麻醉剂量;②良好的心肌灌注和供心冷缺血时间的缩短;③腹主动脉阻断时间的减少及血管吻合的质量及速度的提高。

关键词：心脏移植大鼠模型动物

风湿性心脏瓣膜病合并心源性恶液质36例外科治疗分析

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中国误诊学杂志 2009年第33期9卷 8231-8232页

作者：佘晓伟沈振亚于曙东苏州大学附属第一医院心血管外科江苏苏州215006

目的:探讨合并有心源性恶液质的风湿性心脏瓣膜病的手术治疗经验。方法:分析2005-02/2008-08苏州大学附属第一医院所进行的36例风湿性心脏瓣膜病合并心源性恶液质的瓣膜置换术。结果:36例患者中,术后早期死亡2例(5.6%),14例术后出现并发... 详细信息

目的:探讨合并有心源性恶液质的风湿性心脏瓣膜病的手术治疗经验。方法:分析2005-02/2008-08苏州大学附属第一医院所进行的36例风湿性心脏瓣膜病合并心源性恶液质的瓣膜置换术。结果:36例患者中,术后早期死亡2例(5.6%),14例术后出现并发症,出院34例患者的心功能明显提高,全身情况明显改善。结论:术前予以充分准备,术中良好的心肌保护,彻底纠正三尖瓣反流及巨大左心房的适当迭折,术后积极处理相关并发症及围术期的营养支持对提高手术的整体疗效十分重要。

关键词：风湿性心脏病/外科学/并发症心脏瓣膜疾病/外科学/并发症心脏病/外科学/并发症

3D-CTBA及3D-VATS单操作孔行解剖性肺段切除治疗非小细胞肺癌

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中国肺癌杂志 2017年第9期20卷 598-602页

作者：佘晓伟顾云斌徐春宋心雨李畅丁成陈俊龚永生赵军苏州大学附属第一人民医院胸外科苏州215006 南京医科大学附属苏州市立医院北区胸外科苏州215008 苏州大学附属第一人民医院放射科苏州215006

背景与目的中国是肺癌高发地区,其发病率及死亡率在恶性肿瘤中均占首位。目前低剂量CT检查的普及使早期肺癌检出率显著提高,解剖性肺段切除目前广泛应用于Ia期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及不能耐受肺叶切除肺癌患... 详细信息

背景与目的中国是肺癌高发地区,其发病率及死亡率在恶性肿瘤中均占首位。目前低剂量CT检查的普及使早期肺癌检出率显著提高,解剖性肺段切除目前广泛应用于Ia期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及不能耐受肺叶切除肺癌患者。但因肺段解剖结构及手术操作相对复杂,使得其具有较高的手术风险与难度。我们应用三维计算机断层扫描支气管血管成像(three-dimensional computed tomography bronchography and angiography,3D-CTBA)及三维电视辅助胸部外科技术(three-dimensional video-assisted thoracic surgery,3D-VATS)单操作孔行解剖性肺段切除微创手术技术治疗NSCLC,以探讨其临床效果,为其临床应用提供相关可行性及理论依据。方法回顾性分析苏州大学附属第一人民医院胸外科2015年10月-2017年04月共施行57例术前对肺部病灶予以3D-CTBA重建以及术中应用3D-VATS单操作孔进行解剖性肺段切除治疗NSCLC病例。结果全组均全腔镜下顺利完成,无中转开胸。手术时间平均(142.2±28.3)min,术中出血量平均(93.8±46.5)m L。平均淋巴结清扫数目(9.1±2.2)个,术后胸腔引流量平均(429.8±181.2)m L。术后留置胸管时间(2.8±1.1)d。平均住院时间(5.2±1.3)d。术后病理示良性病变9例,约占15.7%,恶性病变48例,约占84.2%。术后并发症:肺部感染3例(5.2%),肺不张1例(1.7%),少量咯血1例(1.7%),肺漏气2例(>3 d,3.5%),心律失常4例(7.0%)。术后平均随访10个月,无支气管胸膜瘘、乳糜胸、包裹性胸腔积液等并发症,随访患者中无复发及远处转移病例。结论应用3D-CTBA及3D-VATS单操作孔行解剖性肺段切除治疗NSCLC的安全有效,适用于早期NSCLC以及不能耐受肺叶切除患者。

关键词： 3D-CT 支气管血管成像三维胸腔镜肺段切除术肺肿瘤

胸腹腔镜联合与传统开胸术治疗高龄食管癌患者(≥70岁)的临床比较

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肿瘤防治研究 2017年第11期44卷 740-744页

作者：佘晓伟赵军徐春李畅丁成陈俊龚永生苏州大学附属第一人民医院胸外科苏州215006 南京医科大学附属苏州市立医院北区胸外科苏州215008

目的探讨胸腹腔镜联合微创食管癌根治术(minimally invasive esophagectomy,MIE)对比传统开胸术(open esophagectomy,OE)治疗高龄食管癌(≥70岁)的临床效果,为临床应用微创手术治疗高龄食管癌提供理论依据。方法随机挑选实施MIE及OE手... 详细信息

目的探讨胸腹腔镜联合微创食管癌根治术(minimally invasive esophagectomy,MIE)对比传统开胸术(open esophagectomy,OE)治疗高龄食管癌(≥70岁)的临床效果,为临床应用微创手术治疗高龄食管癌提供理论依据。方法随机挑选实施MIE及OE手术的高龄患者各52例进行回顾性分析及总结。结果 MIE全组均胸腹腔镜下顺利完成,无中转开胸,其手术时间平均(261.4±35.2)min与OE组(249.0±37.0)min相比差异无统计学意义(P>0.05)。两组术中出血分别为约(190.1±86.8)ml、(391.35±118.5)ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。MIE组术后WBC、CRP指标及术后疼痛评估均优于OE组(P<0.05)。两组吻合口瘘、喉返神经损伤及乳糜胸差异无统计学意义,但肺部感染、呼吸衰竭及心律失常发生率MIE组低于OE组(P<0.05)。MIE组住院时间少于OE组(P<0.05)。术后平均随访(22.1±11.1)月,两者生存时间差异无统计学意义(P=0.979)。结论 MIE可显著减轻高龄患者术后疼痛以及全身炎性反应,降低心肺系统等相关并发症的发生率,缩短住院时间。

关键词：高龄食管癌根治术微创开胸术食管癌

3D-CTBA结合3D-VATS行单孔肺叶切除治疗非小细胞肺癌的临床应用

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癌症 2024年第5期43卷 253-259页

作者：陈腾飞潘六英梁志磐佘晓伟南京医科大学附属苏州医院心胸外科苏州市立医院姑苏学院苏州215031

背景与目的相比亚肺叶切除,肺叶切除的切除范围广,处理肺血管相对粗大,术中大出血的几率增加。本研究分析术前进行三维计算机断层扫描支气管血管成像术(three dimensional-computed tomography bronchography and angiography,3D-CTBA)... 详细信息

背景与目的相比亚肺叶切除,肺叶切除的切除范围广,处理肺血管相对粗大,术中大出血的几率增加。本研究分析术前进行三维计算机断层扫描支气管血管成像术(three dimensional-computed tomography bronchography and angiography,3D-CTBA)对手术路径进行规划,术中应用三维电视胸腔镜手术(three dimensional video-assisted thoracic surgery,3D-VATS)进行单孔手术操作,相比单独应用3D-VATS是否可减少术中大出血、缩短手术时间,以实现患者术后快速康复。方法回顾性分析2020年1月至2024年6月苏州市立医院胸外科收治的行单孔胸腔镜行肺叶切除的患者情况,将患者分为两组,术前进行3D-CTBA重建并术中应用3D-VATS患者(3D-CTBA-VATS组)有69例,未进行3D-CTBA重建患者(3D-VATS组)有61例,分析两组在手术时间、术中出血量以及一般临床指标的差异。结果3D-CTBA-VATS组的术中平均出血量[(111.7±35.3)mLvs(137.4±40.8)mL]和平均手术时间[(51.6±10.7)minvs(68.6±11.9)min]均显著少于3D-VATS组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论对于需行肺叶切除的患者,术前对靶肺叶进行3D-CTBA重建与术中应用3D-VATS结合,便于在术前规划好手术流程与方案,能够缩短手术时间,减少术中出血,值得在临床中推广与应用。

关键词：三维重建三维胸腔镜单孔胸腔镜肺叶切除

一次性包皮环切缝合器在包皮环切术的应用体会

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江苏医药 2015年第5期41卷 595-596页

作者：李向利关海英沈鹤清杨建伟陈晨朱晓峰滕士兵佘晓伟苏州市相城人民医院泌尿外科江苏省215131

2012年7月-2014年6月,我院泌尿外科应用一次性包皮环切缝合器门诊行包皮环切术62例,取得较好临床效果,报道如下。

关键词：包皮环切术缝合器一次性应用泌尿外科临床效果