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广东番茄曲叶病毒是双生病毒科菜豆金色花叶病毒属一个新种

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广东番茄曲叶病毒是双生病毒科菜豆金色花叶病毒属一个新种

中国植物病理学会2004年学术年会

作者：何自福虞皓罗方芳广东省农业科学院植物保护研究所广东省农业科学院植物保护研究所广东省农业科学院植物保护研究所

＜正＞烟粉虱传双生病毒病（whitefly-transmitted geminiviruses）是热带、亚热带地区农作物上重要病害之一,已在北美洲、南美洲、亚洲、澳大利亚等地区的棉花、烟草、番茄、菜豆等作物上造成严重损失,而在我国广西、云南、海南等地的... 详细信息

＜正＞烟粉虱传双生病毒病（whitefly-transmitted geminiviruses）是热带、亚热带地区农作物上重要病害之一,已在北美洲、南美洲、亚洲、澳大利亚等地区的棉花、烟草、番茄、菜豆等作物上造成严重损失,而在我国广西、云南、海南等地的烟草、番茄、南瓜、番木瓜、一品红等作物上也发生了烟粉虱传双生病毒病为害。该病毒是一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA植物病毒,属双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）,其基因组由2个组分（DNA-A和DNA-B）组成,每个组分的大小为2.5～2.8kb

关键词：番茄曲叶病毒烟粉虱传双生病毒病克隆技术

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霸王花褐腐病的病原鉴定

华南农业大学学报 2014年第1期35卷 60-63页

作者：蓝国兵何自福罗方芳汤亚飞佘小漫杜振国广东省农业科学院植物保护研究所广东广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广东广州510640

【目的】明确导致广东省霸王花Hylocereusundatus褐腐病的病原种类．【方法】通过病组织分离、致病性测定、形态学观察及rDNA序列分析等方法对广东省霸王花褐腐病病原进行了种类鉴定．【结果和结论】在PDA培养基上，病原菌的菌落为深灰... 详细信息

【目的】明确导致广东省霸王花Hylocereusundatus褐腐病的病原种类．【方法】通过病组织分离、致病性测定、形态学观察及rDNA序列分析等方法对广东省霸王花褐腐病病原进行了种类鉴定．【结果和结论】在PDA培养基上，病原菌的菌落为深灰色，绒毛状．产生2种类型的节孢子：一种为浅色、薄壁的柱状孢子，大小为（5．00—10．69）μm×（2．61～4．52）μm；另一种为褐色、厚壁、圆形或椭圆形、基部平截、成链的孢子，大小为（5．15～12．39）μm×（3．87～6．07）um．应用真菌通用引物ITSI和ITS4进行PCR，获得该病原菌579bp的18S-28SrDNAITS序列．BLAST结果显示，该序列与Neoscytalidiumdimidiatum火龙果菌株的18S-28SrDNAITS序列相似性最高，为99％-100％．这些研究结果表明，引起广东省霸王花褐腐病的病原菌为***．

关键词：霸王花褐腐病病原鉴定

6个植物核糖体失活蛋白新基因片段的克隆及特征分析

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华中农业大学学报 2008年第1期27卷 7-11页

作者：阮小蕾刘丽芳陈秀何自福李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642 广东省农业科学院植物保护研究所广州510640

通过分析多种不同来源的植物RIPs的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1、P2,对基因组进行PCR扩增,分别从海芋Araceae macrorrhiza、烟草Nicotiana tobaccum、剑麻Agavaccae aga-ve、望江南Cassia occidentalis、那坡指天... 详细信息

通过分析多种不同来源的植物RIPs的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1、P2,对基因组进行PCR扩增,分别从海芋Araceae macrorrhiza、烟草Nicotiana tobaccum、剑麻Agavaccae aga-ve、望江南Cassia occidentalis、那坡指天蕉Musaspp.(BB)、邻水野蕉Musaspp.(AA)中获得1个基因片段。BLAST分析表明:它们推导的氨基酸序列只与多种不同来源的RIPs有相似性。其中,与葫芦科2个代表RIP相应区段的相似性最高,与-βluffin基因的相似性分别为97.2%、98.5%、97.9%、89.4%、97.9%、97.2%,与天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的相似性分别为63.6%、64.5%、64.1%、60.8%、64.8%、和63.6%。多重序列比对发现:6个序列中分别有10、9、11、11、9、10个残基氨基酸与TCS的N-糖苷酶活性位点的残基完全相同,只是残基位置不一致,仅有个别残基发生了变化。所有的N-糖苷酶活性位点都在P1/P2扩增区段内。

关键词：核糖体失活蛋白基因克隆序列分析

芜菁花叶病毒广东分离物的分子特征和序列分析

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植物保护学报 2021年第4期48卷 929-930页

作者：汤亚飞张丽李正刚蓝国兵于琳何自福佘小漫广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV)是一种(+)ssRNA病毒,基因组全长约为10 kb,根据其基因组系统进化关系,可划分为basal-Brassica(basal-B)、basal-Brassica/Raphanus(basal-BR)、Asian-Brassica/Raphanus(Asian-BR)、world-Brassica(world-B)、Iranian和Orchis共6个组(Yasaka et al.,2017)。该病毒寄主范围广、危害大,至少能侵染43科156属300多种植物。目前,TuMV在我国大部分地区均有分布,已成为危害十字花科蔬菜的优势病毒。

关键词：芜菁花叶病毒寄主范围十字花科蔬菜分离物 TuMV 系统进化关系

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入侵广东的木尔坦棉花曲叶病毒侵染克隆构建

入侵广东的木尔坦棉花曲叶病毒侵染克隆构建

植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会201...

作者：何自福董迪佘小漫罗方芳广东省农业科学院植物保护研究所

棉花曲叶病是世界棉花生产上毁灭性病毒病,而木尔坦棉花曲叶病毒（Cottonleaf curl Multan virus,CLCuMV）是引起该病害的主要病原之一。自2006年以来,我们陆续在广东及广西多个地点发现朱槿曲叶病和黄秋葵黄脉曲叶病。病原检测、基因... 详细信息

棉花曲叶病是世界棉花生产上毁灭性病毒病,而木尔坦棉花曲叶病毒（Cottonleaf curl Multan virus,CLCuMV）是引起该病害的主要病原之一。自2006年以来,我们陆续在广东及广西多个地点发现朱槿曲叶病和黄秋葵黄脉曲叶病。病原检测、基因克隆与序列分析结果表明,这些病害是由CLCuMV侵染引起的,并伴随有卫星DNAβ分子;进一步比较显示,华南不同地理区域的分离物DNA-A及DNAβ的同源性分别高达98%～100%和96%～100%。这些结果说明,CLCuMV已入侵我国华南地区,对我国棉花生产构成严重威胁。为了研究入侵我国华南地区的CLCuMV致病性,我们分别构建了CLCuMV广东朱槿分离物G6及广东黄秋葵分离物Okra06的DNA-A（2723nt）及其伴随的卫星DNAβ（1346nt）侵染性克隆,pBinPLUS-1.85A和pBinPLUS-2B。农杆菌注射接种本生烟的结果显示,pBinPLUS-1.85A单独接种的植株不表现明显症状,但PCR可检测到CLCuMVDNA-A的存在,说明该病毒可以系统侵染本生烟但症状不明显;pBinPLUS-2β单独接种植株表现轻微的曲叶症状,但在接种植株中PCR未检测DNAβ分子的存在,说明DNAβ依赖病毒DNA-A才能复制;而两者共同接种的本生烟植株表现严重的叶片卷曲和皱缩症状,且在这些显症植株中均可检测到该病毒DNA-A和DNAβ。这些结果说明:所构建的CLCuMV DNA-A及其卫星β分子的侵染性克隆pBinPLUS-1.85A和pBinPLUS-2β均具有侵染性,同时证明了卫星分子DNAB是DNA-A组分诱导寄主植物产生典型曲叶症状所必需的。本研究为进一步开展该病毒致病性和病毒基因功能等研究奠定了基础。

关键词：棉花曲叶病致病性

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华南地区番茄黄化曲叶病病原的鉴定与监测

华南地区番茄黄化曲叶病病原的鉴定与监测

中国植物病理学会2012年学术年会

作者：汤亚飞何自福杜振国佘小漫广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室

番茄黄化曲叶病是由烟粉虱传双生病毒侵染引起的病毒病,是目前广东及华南地区番茄上主要病害。为了监测华南地区番茄黄化曲叶病的病原病毒种群动态,2009～2012年,分别从广东省广州市番禺、南沙、白云、花都、从化、增城、佛山市三水、... 详细信息

番茄黄化曲叶病是由烟粉虱传双生病毒侵染引起的病毒病,是目前广东及华南地区番茄上主要病害。为了监测华南地区番茄黄化曲叶病的病原病毒种群动态,2009～2012年,分别从广东省广州市番禺、南沙、白云、花都、从化、增城、佛山市三水、茂名市信宜、肇庆市高要、汕头市澄海、广西百色、海南省海口市和三亚市等番茄主产区采集病样85份,应用菜豆金色花叶病毒属病毒通用简并引物AV494/CoPR进行PCR检测,应用滚环扩增（Rolling circle amplification,RCA）及PCR对阳性病样的病原病毒进行克隆与序列分析。结果表明:引起华南地区番茄黄化曲叶病的病毒主要有广东番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl Guangdong virus,TYLCGuV）、广东番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Guangdong virus,ToLCGuV）、台湾番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Taiwan virus,ToLCTWV）、番茄黄化曲叶病毒以色列株系（Tomato yellow leafcurl virus-Israel,TYLCV-Is）、中国番木瓜曲叶病毒（Papaya leaf curl China virus,PaLCuCNV）、胜红蓟黄脉病毒（Ageratum yellow vein virus,AYVV）等,其中,ToLCTWV在广东广州市各番茄产区为害明显上升,且各分离物的序列同源性为98.1%～99.9%;TYLCV-Is仅发生在广东佛山三水区番茄产区,这也是在广东首次检测到该病毒;PaLCuCNV是引起广西百色番茄黄化曲叶病的优势种。因此,引起华南地区番茄黄化曲叶病的病原病毒有多种,且各番茄产区存在优势种;此外,外来入侵种的为害呈上升趋势。

关键词：番茄黄化曲叶病病原鉴定监测

侵染广东连州葫芦的黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子特征及致病性分析

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中国农业科学 2020年第5期53卷 955-964页

作者：李正刚农媛汤亚飞佘小漫于琳蓝国兵邓铭光何自福广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室

【目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是侵染瓜类作物的主要病毒之一,对瓜类产业造成巨大的危害。本研究旨在探明侵染广东省连州市葫芦的CGMMV分离物(CGMMV-GDLZ)分子特征及其在系统进化中的地位,并... 详细信息

【目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是侵染瓜类作物的主要病毒之一,对瓜类产业造成巨大的危害。本研究旨在探明侵染广东省连州市葫芦的CGMMV分离物(CGMMV-GDLZ)分子特征及其在系统进化中的地位,并测定其对黄瓜、葫芦和西瓜的致病性,为CGMMV的防控提供理论依据。【方法】从广东省连州市葫芦种植基地采集2个疑似CGMMV侵染的病样以及1个无症状样品,提取总RNA,根据CGMMV参考序列(GenBank登录号:KX883801)设计引物进行RT-PCR检测,引物序列为F:CCACGAGTTGTTTCCTAATGCTG/R:TTTGCTAGGCGTGATCGGATTGT,退火温度53℃,扩增长度890 bp。将CGMMV全长序列分为前后两段,前半段1—3 511 nt,扩增引物序列为F:AAGTTCATTTCATTTGGAGAGGGTTTTAATTTTTATAA TTAAACAAA/R:AGTTCTGCATTAATTGCTATTTGGTAGGCACAGTGGTAG;后半段3 301—6 423 nt,扩增引物序列为F:GTGCGTGCTACCCCGACTCCAATAGGTTTGATTGCCCGTG/R:GGTGGAGATGCCATGCCGACCCTGGGCCCCTACCCGGGGAAAGG。将前后两段PCR产物通过同源重组的方法克隆到pCB301双元载体上,测序得到CGMMV-GDLZ分离物全长序列。利用CGMMV-GDLZ分离物全长序列在NCBI中进行Blast分析,然后通过MEGA7软件对CGMMV-GDLZ以及其他已经报道的CGMMV分离物进行系统进化树分析。将构建好的pCB301-CGMMV侵染性克隆注射接种本生烟验证其侵染性,然后再注射接种黄瓜、葫芦和西瓜的子叶,测定CGMMV-GDLZ分离物的致病性。【结果】RT-PCR结果证实,广东省连州市葫芦病样感染了CGMMV。CGMMV-GDLZ分离物全长序列为6 423 nt,编码4个蛋白,分别为129K复制酶(61—3 495 nt)、186K复制相关蛋白(61—5 007 nt)、运动蛋白MP(4 994—5 788 nt)和外壳蛋白CP(5 763—6 248 nt)。CGMMV-GDLZ核苷酸序列与CGMMV-eWT分离物(GenBank登录号:KY753928)同源性最高,为99.97%。系统进化树分析结果显示,CGMMV-GDLZ分离物与日本、韩国等东亚CGMMV分离物同属Group 1,在遗传距离上与山东、浙江和河南的CGMMV分离物最接近。pCB301-CGMMV侵染性克隆可以系统侵染本生烟,造成本生烟上部叶片出现皱缩、斑驳、凸起等症状,RT-PCR和Western blot进一步确认了侵染性克隆的侵染性。注射接种CGMMV-GDLZ分离物后15 dpi,葫芦和西瓜即可产生斑驳、花叶、突起、生长迟缓等症状,24 dpi时症状更明显。而15 dpi时,CGMMV-GDLZ分离物在黄瓜上的症状不明显,与未接种对照植株几乎没有区别;将植株从控温接种室移入网室中,30 dpi时,黄瓜植株上部叶片开始出现斑驳和花叶,40 dpi时,症状已经非常明显。RT-PCR和Western blot检测进一步确认了上述结果。【结论】侵染广东省连州市葫芦的CGMMV-GDLZ分离物与山东、浙江和河南的CGMMV分离物很可能具有相同的传染源;CGMMV-GDLZ分离物可以侵染本生烟、黄瓜、葫芦和西瓜等作物,但对这些作物的致病性存在差异。

关键词：葫芦黄瓜绿斑驳花叶病毒分子特征侵染性克隆致病性

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入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒及其为害

生物安全学报 2012年第2期21卷 87-92页

作者：何自福佘小漫汤亚飞广东省农业科学院植物保护研究所广东广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广东广州510640

棉花曲叶病是世界棉花生产上最具毁灭性的病毒病害,已在巴基斯坦、印度、苏丹、埃及和南非等国棉花产区广泛流行,造成巨大经济损失。目前,已克隆了与该病害相关的植物病毒8种,木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)即是其中之一,这些病毒均属双生... 详细信息

棉花曲叶病是世界棉花生产上最具毁灭性的病毒病害,已在巴基斯坦、印度、苏丹、埃及和南非等国棉花产区广泛流行,造成巨大经济损失。目前,已克隆了与该病害相关的植物病毒8种,木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)即是其中之一,这些病毒均属双生病毒科菜豆金色花叶病毒属。CLCuMV是引起巴基斯坦、印度棉花曲叶病大流行的主要病原之一。该病毒由烟粉虱以持久方式传播,也可以嫁接传播,但不能通过机械摩擦接种传播和种子带毒传播;其基因组仅含有DNA-A组分,并伴随卫星β分子。自2006年首次在我国广东朱槿上检测与鉴定到该病毒以来,目前已在我国广东、广西和海南等多个地理区域发现该病毒引起的病害,受侵染寄主植物包括朱槿、黄秋葵、棉花和垂花悬铃花;同时,已入侵我国的CLCuMV及其卫星β分子的各地理区域和不同寄主来源的分离物DNA序列相似性均大于99%,遗传较稳定。基于文献报道及作者近年的研究,本文对棉花曲叶病的分布、病原、CLCuMV特性、已入侵我国的CLCuMV现状进行了较全面的综述,同时对入侵我国的CLCuMV来源及其威胁我国棉花生产的风险进行了讨论。CLCuMV对我国棉花等作物的威胁日益加剧,本研究可为该病毒的防控提供参考。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒入侵朱槿黄秋葵棉花垂花悬铃花

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空心菜青枯病病原菌的鉴定

植物病理学报 2008年第2期38卷 120-125页

作者：何自福佘小漫虞皓罗方芳李华平广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 华南农业大学资源环境学院广州510642

空心菜青枯病是近年来在广东空心菜产区新发生的病害,病株率一般为5%~20%,严重达50%以上。症状初始表现为植株上部1~2片叶萎蔫、下垂,病叶失去光泽呈灰绿色;随着病情的发展,病叶不断增多,最终整株萎蔫,甚至倒伏。经细菌学鉴定、室内致... 详细信息

空心菜青枯病是近年来在广东空心菜产区新发生的病害,病株率一般为5%~20%,严重达50%以上。症状初始表现为植株上部1~2片叶萎蔫、下垂,病叶失去光泽呈灰绿色;随着病情的发展,病叶不断增多,最终整株萎蔫,甚至倒伏。经细菌学鉴定、室内致病性测定、16S rDNA序列比较及系统进化分析,结果表明引起该病害的病原是茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）;致病性和碳水化合物利用试验结果表明,该病原菌属茄科雷尔氏菌1号生理小种,生化变种4。

关键词：空心菜青枯病茄科雷尔氏菌病原鉴定