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侵染广东辣椒的辣椒脉斑驳病毒的分子特征

园艺学报 2018年第11期45卷 2209-2216页

作者：汤亚飞裴凡于琳何自福佘小漫蓝国兵邓铭光广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是引起广东辣椒病毒病的主要病原之一,为了明确侵染为害广东辣椒的ChiVMV分子特征,采用分段RT-PCR和RACE扩增方法克隆了ChiVMV广东分离物(ChiVMV-GD)的基因组全序列,结果表明,除poly... 详细信息

辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是引起广东辣椒病毒病的主要病原之一,为了明确侵染为害广东辣椒的ChiVMV分子特征,采用分段RT-PCR和RACE扩增方法克隆了ChiVMV广东分离物(ChiVMV-GD)的基因组全序列,结果表明,除poly(A)尾外,ChiVMV-GD基因组大小为9 721 nt,编码一个大小350.44 kD多聚蛋白(位于167～9 436 nt),5′–非编码区(5′-UTR)和3′–非编码区(3′-UTR)分别含有166和285 nt,5′–末端结合病毒基因组连接蛋白(VPg),3′–末端含有poly(A)尾。序列同源性分析结果表明:Chi VMV-GD与Chi VMV其他分离物的基因组序列同源率为79.1%～96.9%,其中与来自中国海南分离物(登录号:GQ981316.1)的同源率最高(96.9%)。系统进化分析结果显示,ChiVMV-GD与海南分离物聚集在一个小分支,说明与海南分离物亲缘关系最近。

关键词：辣椒辣椒脉斑驳病毒广东分离物分子特征

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溶菌酶基因合成及其原核表达

华南农业大学学报 2007年第1期28卷 55-57页

作者：刘兴敏何自福李华平虞皓广东省农业科学院植物保护研究所广东广州510640 华南农业大学资源环境学院广东广州510642

根据T4噬菌体溶菌酶的氨基酸序列,选用植物偏爱的密码子设计并人工合成了溶菌酶基因,并在N-端加上23个氨基酸残基的α-淀粉酶信号肽序列和信号肽酶切位点HQP;用苷氨酸残基替代C-端的酰胺;新基因全长为576 bp,共编码190个氨基酸.为了检... 详细信息

根据T4噬菌体溶菌酶的氨基酸序列,选用植物偏爱的密码子设计并人工合成了溶菌酶基因,并在N-端加上23个氨基酸残基的α-淀粉酶信号肽序列和信号肽酶切位点HQP;用苷氨酸残基替代C-端的酰胺;新基因全长为576 bp,共编码190个氨基酸.为了检测该基因生物活性,将其克隆到原核表达载体pET28b(+)中,导入宿主细菌***21(DE3)pLysS,经IPTG诱导后,宿主细菌在2 h内全部被溶菌酶基因的表达产物裂解,说明该溶菌酶基因对细菌具有很强的抗性.

关键词：溶菌酶基因合成原核表达

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节瓜枯萎病防治药剂田间筛选试验

广东农业科学 2012年第13期39卷 105-106页

作者：何自福蓝国兵罗方芳虞皓广东省农科院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广东广州510640

8种根部淋施杀菌剂对节瓜枯萎病的防治试验结果表明,第3次施药后10 d,50%多菌灵可湿性粉剂1 000倍、68%精甲霜.锰锌水分散粒剂1 000倍、62.5 g/L精甲.咯菌腈种衣剂1 500倍和99%恶霉灵可湿性粉剂3 000倍对节瓜枯萎病的平均防效分别为86.0... 详细信息

8种根部淋施杀菌剂对节瓜枯萎病的防治试验结果表明,第3次施药后10 d,50%多菌灵可湿性粉剂1 000倍、68%精甲霜.锰锌水分散粒剂1 000倍、62.5 g/L精甲.咯菌腈种衣剂1 500倍和99%恶霉灵可湿性粉剂3 000倍对节瓜枯萎病的平均防效分别为86.0%、50.5%、18.3%和8.2%,而50%咯菌腈可湿性粉剂1 700倍、50%腐霉利可湿性粉剂1 000倍、20%噻菌铜悬浮剂800倍和240 g/L噻呋酰胺悬浮剂1 500倍对节瓜枯萎病没有表现出防效。因此,对节瓜枯萎病有较好防治效果的药剂为50%多菌灵可湿性粉剂,其次为68%精甲霜.锰锌水分散粒剂。

关键词：节瓜枯萎病药剂防治效果

木尔坦棉花曲叶病毒已对我国棉花生产构成严重威胁

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植物保护 2010年第2期36卷 147-149页

作者：何自福董迪李世访佘小漫罗方芳广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 中国农业科学院植物保护研究所北京100193

木尔坦棉花曲叶病毒是引起巴基斯坦和印度棉花曲叶病流行的主要病原之一,是由烟粉虱以持久方式传播。近年来,在广东和广西分别发现了严重侵染朱槿和黄秋葵的木尔坦棉花曲叶病毒。虽然广东和广西不种植棉花,但该病毒传播介体烟粉虱在广... 详细信息

木尔坦棉花曲叶病毒是引起巴基斯坦和印度棉花曲叶病流行的主要病原之一,是由烟粉虱以持久方式传播。近年来,在广东和广西分别发现了严重侵染朱槿和黄秋葵的木尔坦棉花曲叶病毒。虽然广东和广西不种植棉花,但该病毒传播介体烟粉虱在广东、广西及我国棉花产区都有分布。因此该病毒的入侵,对我国棉花生产构成严重威胁。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒棉花曲叶病威胁

基于小RNA深度测序技术鉴定侵染广东辣椒的病毒种类

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中国农业科学 2019年第13期52卷 2256-2267页

作者：汤亚飞裴凡李正刚佘小漫于琳蓝国兵邓铭光何自福广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室

【目的】病毒病是广东省辣椒生产上主要病害之一,田间病株率一般为5%—30%,严重时可达100%。本研究旨在探明危害广东辣椒的病毒种类,为辣椒病毒病的防控提供理论依据。【方法】2013—2016年,从广东省广州、佛山、惠州、江门、梅州、湛... 详细信息

【目的】病毒病是广东省辣椒生产上主要病害之一,田间病株率一般为5%—30%,严重时可达100%。本研究旨在探明危害广东辣椒的病毒种类,为辣椒病毒病的防控提供理论依据。【方法】2013—2016年,从广东省广州、佛山、惠州、江门、梅州、湛江、茂名和韶关8市辣椒主要种植区采集疑似病毒病辣椒样品125份,分别提取每份辣椒病样总RNA,对从茂名、梅州、韶关3市采集的病样按地点和症状混合成7份混合病样进行小RNA深度测序分析,根据小RNA深度测序分析结果,对每种病毒分别根据小RNA深度测序拼接的基因片段序列和GenBank数据库中与该拼接序列同源性最高的病毒基因组序列保守区设计2对特异性引物,以小RNA深度测序的病样RNA为模板进行RT-PCR扩增,根据扩增效果对引物进行筛选,进一步应用筛选出的引物,对采集于广东省的125份辣椒病样分别进行RT-PCR检测,根据检测结果明确危害广东辣椒的病毒种类。【结果】从采集于广东省8市的辣椒主要种植区的125份病样中检测到14种病毒,按照检出率从高到低依次为辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)(44.0%)、甜椒内源RNA病毒(Bell pepper endornavirus,BPEV)(32.8%)、烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)(31.2%)、辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)(29.6%)、辣椒黄脉病毒1(Pepper vein yellow virus 1,PeVYV-1)(26.4%)、甜椒斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)(25.6%)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)(18.4%)、辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)(16.8%)、辣椒黄脉病毒6(Pepper vein yellow virus 6,PeVYV-6)(16.8%)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)(15.2%)、辣椒褪绿病毒(Capsicum chlorosis virus,Ca CV)(14.4%)、蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)(9.6%)、辣椒隐症病毒1(Pepper cryptic virus 1,PCV1)(8.8%)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)(4.0%)。其中,PMMoV、BPEV、TMGMV、ChiVMV、PeVYV-1和PVMV 6种病毒的检出率在25%以上,但PMMo V、Chi VMV和PVMV分布广泛,PMMo V除了茂名外,Chi VMV除了韶关外,其他7市辣椒产区均有分布;PVMV广泛分布于8市辣椒产区,根据检出率和分布范围,得出PMMo V、Chi VMV和PVMV是危害广东辣椒的优势病毒。同时发现,广东辣椒上多种病毒复合侵染现象普遍,在本研究125份病样中病毒复合侵染率达到88.0%,其中2种、3种、4种、5种、6种、7种和8种病毒复合侵染检出率分别为28.0%、25.6%、12.0%、9.6%、6.4%、1.6%和2.4%,由此可知,2种和3种病毒复合侵染是主要侵染形式。【结论】危害广东辣椒的病毒有14种,其中PMMo V、Chi VMV和PVMV为优势病毒,且复合侵染普遍,2种和3种病毒复合侵染是主要侵染形式。

关键词：辣椒病毒病种类鉴定小RNA深度测序 RT-PCR 广东省

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马铃薯块茎软腐病病原初步鉴定

马铃薯块茎软腐病病原初步鉴定

中国植物保护学会2016年学术年会

作者：佘小漫何自福汤亚飞蓝国兵广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)属于芽孢杆菌科,芽孢杆菌属。该细菌呈杆状,革兰氏染色为阳性,具有运动性。短小芽孢杆菌菌落具有不透明和半透明两种形态。不透明状菌落为乳白色,有黏性,半透明菌落为乳黄色,光滑。短小芽孢杆菌不仅能够... 详细信息

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)属于芽孢杆菌科,芽孢杆菌属。该细菌呈杆状,革兰氏染色为阳性,具有运动性。短小芽孢杆菌菌落具有不透明和半透明两种形态。不透明状菌落为乳白色,有黏性,半透明菌落为乳黄色,光滑。短小芽孢杆菌不仅能够分泌有利于降解大分子物质且活性较强的纤维素酶、木聚糖酶、果胶裂解酶和脂肪酶等,还产生抗菌素及抗菌蛋白等颉颃性物质,抑菌范围广,因此,短小芽孢杆菌作为生防细菌用于环境、工业及农业有害生物治理。但是,短小芽孢杆菌亦能引起白菜、甘蓝、大蒜以及马铃薯等作物采后储藏软腐病。2015年12月,本团队在广东省惠州市博罗县马铃薯种植区调查时发现,种薯发病率为3%。种薯表面发软,纵切薯块,薯肉为黑色水渍状。取病薯块病健交接处薯肉进行病原菌分离,纯化获得10个菌株,10个菌株分别接种健康薯块,其中4个菌株(BP-hd-1,BP-hd-2,BP-hd-3,BP-hd-4)接种的薯块发病症状与种薯的发病症状一致,其余6个菌株未引起明显症状。利用细菌16S rDNA通用引物27f和1941r对4个菌株的总DNA进行PCR扩增,获得大小约1500bp的条带。序列测定及Blast结果表明,4个菌株间16S rDNA序列同源率为99.6%9.9%,4个序列与短小芽孢杆菌菌株UBT3 16S rDNA序列(KR780583)同源率为99%00%。从接种发病的薯块再分离获得菌落形态一致的菌株10株,随机选取4个菌株进行16S rDNA扩增并进行测序比对,这4个菌株的16S rDNA序列与接种菌株16S rDNA序列的同源率为100%,与短小芽孢杆菌菌株UBT3 16S rDNA序列的同源率为99%。这些结果初步证明,短小芽孢杆菌是引起马铃薯薯块软腐病的新病原。

关键词：短小芽孢杆菌 16S rDNA

3种双生病毒复合侵染寄主番茄时重组突变体的鉴定

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3种双生病毒复合侵染寄主番茄时重组突变体的鉴定

中国植物保护学会2016年学术年会

作者：汤亚飞何自福佘小漫蓝国兵广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室

番茄黄化曲叶病是由烟粉虱传双生病毒侵染引起的病毒病,是目前广东地区番茄上的主要病毒病。本实验室的检测与监测的结果显示,引起广东省番茄黄化曲叶病的病毒主要有4种,广东番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellowleafcurl Guangdongvirus,TYLC... 详细信息

番茄黄化曲叶病是由烟粉虱传双生病毒侵染引起的病毒病,是目前广东地区番茄上的主要病毒病。本实验室的检测与监测的结果显示,引起广东省番茄黄化曲叶病的病毒主要有4种,广东番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellowleafcurl Guangdongvirus,TYLCGuV)、广东番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Guangdong virus,ToLCGuV)、台湾番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Taiwan virus,ToLCTWV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV),且田间混合发生或复合侵染。双生病毒复合侵染后极易发生重组变异,产生致病力更强的新株系或新病毒。为了了解为害番茄的双生病毒复合侵染后重组突变与演变趋向,通过室内人工混合接种ToLCTWV、TYLCV和ToLCGuV 3种病毒的侵染性克隆,成功得到3种病毒复合侵染的番茄植株。以复合侵染的番茄植株总DNA为模板,通过滚环扩增(RCA),用3种病毒共有的单一酶切位点BamhⅠ进行酶切,然后进行克隆,通过对大量克隆测序与序列比对分析,已获得TYLCV突变体1个(12454nt位缺失了31碱基)、ToLCGuV突变体1个(11038nt位缺失了28碱基)、ToLCTWV突变体4个(分别在1 185 870,241 708,550 895,520 892位点缺失)等6个缺失突变体,进一步筛选更多的重组突变体及其致病力研究还在进行中。

关键词：番茄黄化曲叶病毒复合侵染突变体

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为害广东冬种辣椒主要病毒种类的鉴定

为害广东冬种辣椒主要病毒种类的鉴定

中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会

作者：汤亚飞佘小漫何自福蓝国兵广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室

辣椒是广东主要冬种蔬菜之一,年种植面积达100万亩以上。病毒病是为害冬种辣椒的主要病害之一,每年均造成不同程度损失。为了弄清广东冬种辣椒病毒病为害情况及病原病毒种类,2013—2015年,本团队在茂名和湛江等冬种蔬菜产区进行调查,发... 详细信息

辣椒是广东主要冬种蔬菜之一,年种植面积达100万亩以上。病毒病是为害冬种辣椒的主要病害之一,每年均造成不同程度损失。为了弄清广东冬种辣椒病毒病为害情况及病原病毒种类,2013—2015年,本团队在茂名和湛江等冬种蔬菜产区进行调查,发现辣椒病毒病发生较严重,田间病株率10%0%,严重时达到100%;田间症状主要表现为花叶、黄化、蕨叶、畸形、脉斑驳等症状,以花叶和脉斑驳为主。利用sRNA深度测序技术,对广东省茂名市等冬种辣椒主要产区病样进行了病毒种类鉴定,进一步根据sRNA测序结果设计每种病毒的特异引物,进行RT-PCR验证。初步结果表明为害广东冬种辣椒的病毒种类多达12种,分别为辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus)、灯笼椒内源病毒(Bell pepper endornavirus)、黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus)、辣椒黄脉病毒(Peppervein yellows virus)、红辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus)、辣椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus)、辣椒黄化曲叶病毒(Pepper yellow leaf curl virus)、辣椒褪绿病毒(Capsicum chlorosis virus)、烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus)、辣椒潜隐病毒(Pepper cryptic virus)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y)。

关键词：冬种辣椒病毒种类 sRNA深度测序技术

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香蕉束顶病毒分子生物学的研究进展

仲恺农业技术学院学报 2000年第3期13卷 58-66页

作者：何自福李华平肖火根范怀忠华南农业大学植物病毒研究室广东广州510642

对香蕉束顶病毒核酸的性质、基因组的结构及其功能、病毒在寄主体内的复制机理、病毒的分类地位以及基因的体外表达等方面进行了较为全面的综述。

关键词：香蕉束顶病毒分子生物学研究