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广东南瓜细菌性叶枯病及其病原鉴定

植物病理学报 2018年第2期48卷 159-168页

作者：李晓颖佘小漫何自福广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

在广东省雷州市发生一种南瓜(Cucurbita moschata)叶枯病,病株叶片边缘开始出现水渍状病斑,逐步发展成大病斑,后期病斑焦枯;在叶片上也可形成近圆形水渍状病斑,伴有黄色晕圈,后期病斑联合形成不规则大枯斑;叶柄和匍匐茎被侵染后呈水渍... 详细信息

在广东省雷州市发生一种南瓜(Cucurbita moschata)叶枯病,病株叶片边缘开始出现水渍状病斑,逐步发展成大病斑,后期病斑焦枯;在叶片上也可形成近圆形水渍状病斑,伴有黄色晕圈,后期病斑联合形成不规则大枯斑;叶柄和匍匐茎被侵染后呈水渍状腐烂。从病斑上分离到一种细菌,在KB培养基上,菌落为椭圆形,乳白色,半透明,边缘参差不齐,紫外灯照射下产生荧光反应。致病性测定结果表明,该病原细菌可侵染6个南瓜品种引起与田间症状相同的叶枯病。生理生化试验结果表明,该病原细菌与丁香假单胞丁香致病变种(Pseudomonas syringae ***)的特性一致。应用假单胞菌属特异引物Ps-for/Ps-rev和丁香假单胞丁香致病变种组群特异性引物Group III-F/Group III-R,可从该病原细菌中扩增出预期大小分别为1 018 bp和750 bp的目的片段。应用丁香致病变种syr B基因特异性引物B1/B2,可从该病原菌中扩增出预期大小为750 bp的丁香霉素基因片段。基于16S r DNA与gyr B基因序列系统进化分析均表明,南瓜叶枯病菌株与已报道的*** ***菌株HS191(CP006256)亲缘关系最近,二者聚类在一起形成一个小分支。人工接种条件下,该病原细菌还可侵染西葫芦、丝瓜、茄子、番茄、菜豆、扁豆等植物。这些结果表明,引起广东省南瓜叶枯病的病原为丁香假单胞丁香致病变种(Pseudomonas syringae ***)。这是首次在中国发现丁香假单胞丁香致病变种引起南瓜叶枯病。

关键词：南瓜细菌性叶枯病丁香假单胞丁香致病变种病原鉴定生物学特性

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广东茄科青枯病研究进展

广东茄科青枯病研究进展

木尔坦棉花曲叶病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法

第四届中国植物细菌病害学术研讨会

作者：何自福佘小漫虞皓广东省农业科学院植物保护研究所

茄科雷尔氏菌侵染引起植物青枯病是广东最重要的植物细菌病害,目前至少有12种作物受其为害,每年均造成巨大经济损失。本文综述了近10年来广东对该病害的主要研究进展。

关键词：茄科雷尔氏菌青枯病研究进展

来源： cnki会议评论

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华南农业大学学报 2015年第6期36卷 87-90页

作者：赵蕊吕利华陈婷何自福何余容华南农业大学农学院广东广州510642 广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广东广州510640

【目的】木尔坦棉花曲叶病毒Cotton Leaf Curl Multan Virus(CLCuMV)是为害锦葵科植物的重要双生病毒之一,本研究的目的是建立CLCuMV定量检测方法,为进一步研究其在寄主植物内的增殖动态、在介体昆虫内循环和其与寄主、介体间互作机制... 详细信息

【目的】木尔坦棉花曲叶病毒Cotton Leaf Curl Multan Virus(CLCuMV)是为害锦葵科植物的重要双生病毒之一,本研究的目的是建立CLCuMV定量检测方法,为进一步研究其在寄主植物内的增殖动态、在介体昆虫内循环和其与寄主、介体间互作机制提供技术手段.【方法】以纯化的含CLCuMV基因组的质粒为模板,利用SYBR Green I荧光定量PCR对不同浓度的质粒样品进行CLCuMV扩增,制作标准曲线.依照建立的标准曲线,计算烟粉虱Bemisia tabaci及朱槿Hibiscus rosa-sinensis中CLCuMV的含量.【结果和结论】该定量检测法可检测到低浓度(5.2×101μL-1)的CLCuMV,其灵敏度是常规PCR的10倍,可被用于在寄主植物和介体昆虫体内CLCuMV的定量检测.

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒锦葵科 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR 检测方法

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侵染广东甘薯的甘薯曲叶病毒分子检测与鉴定

植物保护 2013年第4期39卷 25-28页

作者：汤亚飞何自福韩利芳罗方芳广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

甘薯曲叶病是广东甘薯的一种新病害,病株表现为叶片皱缩,向上卷曲,叶脉肿大等症状。PCR检测结果显示,所有病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。通过滚环扩增方法获得了3个病毒分离物的全基因组。扩增产物克隆及序列分析结果表明,这3个... 详细信息

甘薯曲叶病是广东甘薯的一种新病害,病株表现为叶片皱缩,向上卷曲,叶脉肿大等症状。PCR检测结果显示,所有病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。通过滚环扩增方法获得了3个病毒分离物的全基因组。扩增产物克隆及序列分析结果表明,这3个病毒分离物基因组均仅含有DNA-A,具有菜豆金色花叶病毒属单组分病毒基因组典型特征;其大小分别为2 829nt(JX286653、JX286654)和2 828nt(JX286655)。三者核苷酸序列同源率为96.0%～98.4%;与已报道的甘薯曲叶病毒19个分离物的同源率均大于89.0%。因此,引起广东甘薯曲叶病的病原被鉴定为甘薯曲叶病毒。本研究是首次在广东发现甘薯曲叶病毒。

关键词：甘薯曲叶病甘薯曲叶病毒分子鉴定

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60%百泰水分散粒剂防治大白菜炭疽病试验

广东农业科学 2011年第16期38卷 74-75页

作者：何自福罗方芳佘小漫虞皓广东省农科院植物保护研究所广东广州510640

60%百泰水分散粒剂防治大白菜炭疽病的田间试验结果表明,2007年秋季用药,第3次施药后7 d,该药剂每667 m2使用40、60、100 g的防效分别为84.12%、88.69%和95.4%;2008年夏季用药,其防效分别为91.42%、94.84%和97.04%,均明显高于对照药剂25... 详细信息

60%百泰水分散粒剂防治大白菜炭疽病的田间试验结果表明,2007年秋季用药,第3次施药后7 d,该药剂每667 m2使用40、60、100 g的防效分别为84.12%、88.69%和95.4%;2008年夏季用药,其防效分别为91.42%、94.84%和97.04%,均明显高于对照药剂25%凯润乳油(每667 m2使用25 g)和70%品润干悬浮剂(每667 m2使用170 g)的防效。因此,60%百泰水分散粒剂对大白菜炭疽病具有良好的防治效果,建议田间防治制剂每667 m2使用40 g(有效成分24 g)。

关键词： 60%百泰水分散粒剂大白菜炭疽病防治效果

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广东茄科雷尔氏菌16SrDNA序列分析

华南农业大学学报 2009年第4期30卷 24-28页

作者：佘小漫何自福虞皓李华平广东省农业科学院植物保护研究所广东广州510640 华南农业大学资源环境学院广东广州510642

应用PCR方法,获得了分离自广东番茄、茄子、辣椒、烟草、空心菜、沙姜、姜、马铃薯、花生、菊花、桑树和藿香共12种作物21个茄科雷尔氏菌菌株的16S rDNA.序列测定及比较结果表明,21个广东茄科雷尔氏菌菌株16SrDNA近全长序列均为1 528 bp... 详细信息

应用PCR方法,获得了分离自广东番茄、茄子、辣椒、烟草、空心菜、沙姜、姜、马铃薯、花生、菊花、桑树和藿香共12种作物21个茄科雷尔氏菌菌株的16S rDNA.序列测定及比较结果表明,21个广东茄科雷尔氏菌菌株16SrDNA近全长序列均为1 528 bp,序列间同源率99.2%-100%;各菌株的16S rDNA序列间只有1-12个不等的碱基差异,其中20个菌株的458-460位及474位的碱基是ACT和T,而菌株HZ-1则是TTC和A,说明广东茄科雷尔氏菌的16S rDNA序列十分保守.系统进化分析结果显示,仅菌株HZ-1聚类于茄科雷尔氏菌2 a亚组中,其余20个菌株均聚类于茄科雷尔氏菌区组1中.

关键词：茄科雷尔氏菌 16SrDNA 序列分析

2009—2014年间广东省菜心炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性

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农药学学报 2018年第2期20卷 249-253页

作者：蓝国兵于琳何自福佘小漫汤亚飞邓铭光广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

为了解广东省菜心炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性差异和变化,于2009—2014年从广东省15个县/市菜心产区分离获得105个菜心炭疽病菌菌株,采用菌丝生长速率法测定了其对咪鲜胺的EC50值,并比较了同一年份不同地区菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏... 详细信息

为了解广东省菜心炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性差异和变化,于2009—2014年从广东省15个县/市菜心产区分离获得105个菜心炭疽病菌菌株,采用菌丝生长速率法测定了其对咪鲜胺的EC50值,并比较了同一年份不同地区菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性差异和不同年份间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性变化。结果显示：同一年份菌株间,采自2009年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最小,敏感性最低地区菌株的平均EC（50）值是最高地区菌株的1.2倍;采自2014年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最大,敏感性最低地区菌株的平均EC50值是最高地区菌株的34.9倍;其余年份间的不同地区最大平均EC（50）值和最小平均EC50值相差9.2~10.4倍。不同年份菌株间,2010年的菌株对咪鲜胺的敏感性最高,平均EC（50）值为0.052 0μg/m L;2012年的菌株对咪鲜胺的敏感性最低,平均EC（50）值为0.259 9μg/m L;2012—2014年的菌株对咪鲜胺的平均EC（50）值范围在0.104 5~0.259 9μg/m L之间,高于2009—2011年的菌株对咪鲜胺的平均EC（50）值（0.052 0~0.074 3μg/m L）。2009—2014年广东省田间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性呈降低趋势,存在潜在抗药性风险。

关键词：菜心炭疽病菌咪鲜胺敏感性

木尔坦棉花曲叶病毒及其伴随的β卫星分子复合侵染引起广东棉花曲叶病

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中国农业科学 2015年第16期48卷 3166-3175页

作者：汤亚飞何自福杜振国佘小漫蓝国兵广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室

【目的】明确引起广东棉花曲叶病的病原,为该病害的防控提供理论依据。【方法】应用PCR、滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)、基因克隆及测序等技术获得病毒分离物GD01基因组及卫星分子的序列,并对序列进行分析;通过构建GD01... 详细信息

【目的】明确引起广东棉花曲叶病的病原,为该病害的防控提供理论依据。【方法】应用PCR、滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)、基因克隆及测序等技术获得病毒分离物GD01基因组及卫星分子的序列,并对序列进行分析;通过构建GD01及其β卫星分子的侵染性克隆p GreenⅡ049-1.6A、p GreenⅡ049-2.0β和利用农杆菌介导的注射接种方法,测定GD01及其β卫星分子对棉花的致病性;进一步通过Southern blot检测对接种植株进行分析与验证。【结果】侵染广东棉花的病毒分离物GD01基因组仅含A组分(DNA-A),其全长为2 737nt,且与在中国发现的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCu Mu V)第一个分离物朱槿分离物G6序列相似性为100%。该病毒分离物也伴随有β卫星分子,其全长为1 345 nt,与G6伴随的β卫星分子(Cotton leaf curl Multan betasatellite isolate G6,CLCu Mu B-[G6])序列相似性为99.9%。构建了GD01 DNA-A及其β卫星分子侵染性克隆p GreenⅡ049-1.6A、p GreenⅡ049-2.0β,农杆菌注射接种本氏烟,接种后15 d,二者混合接种的本氏烟植株新出的叶片表现明显的皱缩、卷曲等症状;随着时间的推移,本氏烟的症状越来越明显。农杆菌注射接种棉花,接种后30 d,二者混合接种的棉花植株新出叶片开始出现叶脉变深绿色,叶片卷曲等症状;接种后90 d,二者混合接种的植株大部分叶片表现为叶片向上卷曲、叶脉深绿色、叶脉肿大等典型棉花曲叶症状,且与田间自然病株症状相同,而二者各自单独接种的棉花植株没有产生明显的症状。Southern blot检测结果显示,表现典型曲叶症状的接种棉花植株均含有GD01 DNA-A及其β卫星分子,进一步支持这些症状是由GD01 DNA-A及其β卫星分子的共同侵染引起。【结论】病毒分离物GD01 DNA-A及其伴随的β卫星分子与入侵中国的CLCu Mu V第一个分离物朱槿分离物G6相同,CLCu Mu V-[GD01]及其伴随的CLCu Mu B-[GD01]复合侵染引起广东棉花曲叶病,利用农杆菌介导的侵染性克隆接种法,完成了CLCu Mu V及其CLCu Mu B复合侵染引起棉花曲叶病的柯赫氏法则(Koch’s Postulates)。

关键词：棉花曲叶病木尔坦棉花曲叶病毒 β卫星分子侵染性克隆致病性

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海南红麻曲叶病的病原检测与鉴定

植物病理学报 2015年第6期45卷 561-568页

作者：汤亚飞何自福杜振国佘小漫蓝国兵广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

红麻曲叶病是2012年在海南省海口市发现的一种新病害,病株表现为叶片向上卷曲、叶脉肿大、叶脉变深绿色等症状。PCR检测结果显示,该病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。基因克隆及序列分析结果表明,该病毒分离物(HN08)基因组仅含A组分... 详细信息

红麻曲叶病是2012年在海南省海口市发现的一种新病害,病株表现为叶片向上卷曲、叶脉肿大、叶脉变深绿色等症状。PCR检测结果显示,该病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。基因克隆及序列分析结果表明,该病毒分离物(HN08)基因组仅含A组分(DNA-A),其全长为2 738 nt,与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMuV)各分离物的相似性均大于89.0%,其中与中国各分离物的相似性均大于99.0%。该病毒分离物也伴随有β卫星分子,其全长为1 346 nt,与CLCuMuV各分离物伴随的β卫星分子(CLCuMuB)序列相似性大于83.0%,其中与分离物Fz1的序列相似性最高,为99.7%。构建了HN08 DNA-A及其β卫星分子侵染性克隆,通过农杆菌注射接种红麻,接种后30 d,HN08 DNA-A及其β卫星分子混合接种的红麻植株新出叶片开始产生曲叶症状;接种后60 d,二者混合接种的植株大部分叶片表现为严重的曲叶症状,且与田间自然病株症状相同,而二者各自单独接种的红麻植株没有产生明显的症状。PCR及Southern blot检测进一步证实这些症状是由HN08 DNA-A及其β卫星分子的共同侵染引起的。因此,海南红麻曲叶病是由CLCuMuV及其伴随的β卫星分子(CLCuMuB)共同侵染引起的。本文首次报道了红麻是CLCuMuV自然新寄主。

关键词：红麻曲叶病木尔坦棉花曲叶病毒卫星分子病原鉴定