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家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及功能分析

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生物工程学报 2018年第1期34卷 78-89页

作者：何石宝殷娅茹郑茜郭东东辛佳朱勇西南大学生物技术学院重庆400715

家蚕头部是一个神经中枢和感受的器官,其头部含有触角和感觉毛,感受外界的信号,并将外界信号传送到大脑进行反应。保幼激素主要是由咽侧体合成和分泌的,而保幼激素结合蛋白是保幼激素转运和发挥功能的载体,在昆虫体内具有极其重要的功... 详细信息

家蚕头部是一个神经中枢和感受的器官,其头部含有触角和感觉毛,感受外界的信号,并将外界信号传送到大脑进行反应。保幼激素主要是由咽侧体合成和分泌的,而保幼激素结合蛋白是保幼激素转运和发挥功能的载体,在昆虫体内具有极其重要的功能。文中通过Silk DB和NCBI数据库筛选并鉴定到一个新的具有保幼激素结合蛋白家族保守结构的蛋白Bm TOL,其编码基因编号为BGIBMGA003404(Gen Bank登录号:KY681053)。利用原核表达系统成功表达了该蛋白,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了Bm TOL的重组蛋白并制备了多克隆抗体。组织表达分析发现无论是转录水平还是蛋白水平Bm TOL在头部都是高量表达,且Bmtol基因在起蚕时表达量较高,在5龄和蛹期表达量较低,而在化蛾后表达量又开始上调。免疫组化结果显示Bm TOL蛋白定位在头部的皮层、触角和脑中,推测其可能与头部信息传递有关,为家蚕的生长发育和行为调控提供重要的信息来源。

关键词：家蚕保幼激素结合蛋白 BmTOL 免疫组化

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家蚕的性别决定分子机制研究进展

蚕业科学 2015年第5期41卷 951-956页

作者：郭东东何石宝唐文超辛佳朱勇西南大学生物技术学院重庆400716

家蚕属于雌杂合型生物,性别决定于胚胎细胞染色体组中W染色体的有无,凡有W染色体的个体均为雌性,记为ZW型,雄性为ZZ型。深度测序发现位于家蚕W染色体的雌性决定基因Fem通过piRNA途径决定家蚕性别,位于Z染色体的Masc基因调控雄性胚胎的... 详细信息

家蚕属于雌杂合型生物,性别决定于胚胎细胞染色体组中W染色体的有无,凡有W染色体的个体均为雌性,记为ZW型,雄性为ZZ型。深度测序发现位于家蚕W染色体的雌性决定基因Fem通过piRNA途径决定家蚕性别,位于Z染色体的Masc基因调控雄性胚胎的剂量补偿与决定Bmdsx的雄特异性剪切。本文主要介绍家蚕W染色体上Fem基因的发现及作为性别决定初始信号的作用,以及雄性Z染色体存在的剂量补偿机制和几个性别决定基因的级联调控关系等,并简要分析了该领域仍需要深入研究的内容。

关键词：家蚕性染色体性别决定基因初始信号剂量补偿

鼻用糖皮质激素结合鼻腔冲洗对变应性鼻炎的疗效分析

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黑龙江医药 2018年第2期31卷 350-352页

作者：梁维载刘进英何石宝广东省阳江市阳西县人民医院广东省阳江市529800

目的:探析鼻用糖皮质激素结合鼻腔冲洗治疗变应性鼻炎的疗效。方法:选取2015年1月~2017年1月我院收治的159例变应性鼻炎患者为主要研究对象,采用数字随机表达法将其分为1组、2组和3组,53例/组。1组给予单纯鼻用激素治疗,2组患者给予单... 详细信息

目的:探析鼻用糖皮质激素结合鼻腔冲洗治疗变应性鼻炎的疗效。方法:选取2015年1月~2017年1月我院收治的159例变应性鼻炎患者为主要研究对象,采用数字随机表达法将其分为1组、2组和3组,53例/组。1组给予单纯鼻用激素治疗,2组患者给予单用鼻腔冲洗治疗,3组患者接受鼻用糖皮质激素结合鼻腔冲洗治疗,疗程为三个月,对三组患者的临床治疗效果进行对比分析。结果:经治疗后,1组的治疗有效率为81.13%,2组为84.91%,3组为96.23%,3组患者的治疗有效率明显高于2组,且2组高于1组,差异有统计学意义(P<0.05);经治疗后,1组患者的鼻内镜评分明显低于2组和3组(P<0.05),3组患者的鼻内镜评分明显优于2组(P<0.05)。结论:在变应性鼻炎的临床治疗上,单纯鼻腔冲洗的治疗效果显著,但采用鼻用糖皮质激素结合鼻腔冲洗的联合治疗方案可获得更为显著的治疗效果,改善患者的临床症状,提升患者的生活质量,值得在临床上进一步应用推广。

关键词：鼻用糖皮质激素鼻腔冲洗变应性鼻炎临床效果

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果蝇求偶行为分子调控机制的研究进展

中国生物工程杂志 2015年第10期35卷 78-85页

作者：何石宝李冠楠郭东东唐文超隆耀航朱勇西南大学生物技术学院重庆400715 家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715

果蝇(Drosophila)的求偶行为受多个基因调控,例如fruitless(fru)、dissatisfaction(dsf)和retained(retn)等。它们通过不同的剪切方式产生特异性产物,利用这些产物来控制雌雄果蝇的求偶行为,它们的剪切方式是雌雄果蝇求偶行为和性别决... 详细信息

果蝇(Drosophila)的求偶行为受多个基因调控,例如fruitless(fru)、dissatisfaction(dsf)和retained(retn)等。它们通过不同的剪切方式产生特异性产物,利用这些产物来控制雌雄果蝇的求偶行为,它们的剪切方式是雌雄果蝇求偶行为和性别决定所必需的。主要阐述了这些基因在果蝇求偶行为方面的分子调控机制,为进一步研究果蝇的求偶行为和性别决定提供理论依据。

关键词：果蝇剪接方式求偶行为性别决定

家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及表达分析

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中国生物工程杂志 2017年第10期37卷 16-25页

作者：何石宝杨成飞尚杉王凌燕唐文超朱勇西南大学生物技术学院重庆4007715

目的:克隆获得家蚕(Bombyx mori)Bmtol基因序列,并对其蛋白结构进行预测,分析其在组织和JHA处理后头部的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。方法:以家蚕的全组织c DNA为模板利用RT-PCR技术扩增和克隆获得Bmtol基因c DNA全长序列,并... 详细信息

目的:克隆获得家蚕(Bombyx mori)Bmtol基因序列,并对其蛋白结构进行预测,分析其在组织和JHA处理后头部的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。方法:以家蚕的全组织c DNA为模板利用RT-PCR技术扩增和克隆获得Bmtol基因c DNA全长序列,并提交至Gen Bank数据库;利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MREGA5.0软件中的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建Bm TOL及其它昆虫同源TO的进化树;通过q PCR技术分析Bmtol基因在5龄3天家蚕不同组织的表达情况,及JHA处理5龄蚕后在0 h、24 h、48 h、72 h和96 h家蚕头部的表达情况。结果:克隆获得了家蚕Bmtol基因的c DNA序列(Gen Bank登录号KY681053),Bmtol基因的开放阅读框(ORF)长度为759 bp,编码252个氨基酸,预测其蛋白分子量为27.72k Da,理论等电点为6.16,有信号肽,无跨膜结构,且第25~251位氨基酸之间存在一个保幼激素结合蛋白家族JHBP保守结构域;N端为疏水区域,可能与保幼激素结合蛋白的核心部位有关。亚细胞定位分析表明,Bm TOL属于分泌型蛋白,主要集中在内质网-高尔基体-质膜分泌途径上。Bm TOL蛋白具有3个α螺旋,第34位的Cys和第44位Cys形成一个二硫键链接在α1螺旋和N末端,构成Bm TOL蛋白与配体结合的核心部位。序列比对结果显示,家蚕Bm TOL序列与其他昆虫TO的氨基酸序列一致性差别较大。家蚕Bm TOL与果蝇Dm TO的相似性为25.10%,与烟草天蛾的相似性为19.69%,与冈比亚按蚊的相似性为25.78%,与埃及伊蚊的相似性为23.53%,与黑花蝇的相似性为28.17%,与意大利蜜蜂的相似性为23.05%,与苹浅褐卷蛾的相似性为21.18%。系统进化树分析表明,所有选用昆虫TO形成两个大的分支:苹浅褐卷蛾Ep TO1、烟草天蛾Ms TO、意大利蜜蜂Am TOL、果蝇Dm TO和黑花蝇Pr TOL聚为一个分支,埃及伊蚊Aa TO、冈比亚按蚊Ag TOL-2和家蚕Bm TOL聚为另一大分支。q PCR结果显示,Bmtol基因在家蚕头部、表皮和精巢有较高表达,其他组织表达量很低或没有。在JHA处理的5龄家蚕的头部,Bmtol基因在处理后0 h、24 h、48 h、72 h和96 h的表达量差异不明显。结论:Bm TOL蛋白属于JHBP家族,具有JHBP家族的典型结构;组织表达谱和JHA处理结果暗示,Bm TOL属保幼激素结合蛋白(JHBP),在家蚕中除保幼激素结合之外还参与其他多种生理功能。

关键词：家蚕 Bmtol 基因克隆生物信息学分析 JHA

蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响

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中国农业科学 2015年第9期48卷 1845-1853页

作者：李冠楠夏雪娟 SENDEGEYA Parfait 何石宝郭东东朱勇西南大学生物技术学院西南大学食品科学学院

【目的】筛选对家蚕(Bombyx mori)具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶(蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶)及能在肠道定殖为基础,... 详细信息

【目的】筛选对家蚕(Bombyx mori)具有益生作用的芽孢杆菌,改善家蚕肠道微环境,促进蚕业生产的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛;以产胞外消化酶(蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶)及能在肠道定殖为基础,结合溶血试验、抗生素药敏试验和产消化酶能力大小等对芽孢杆菌进行复筛。通过形态、生理生化特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,再利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术检测其在家蚕肠道内定殖情况及其对肠道内微生物菌群多样性的影响。【结果】共从57株细菌中筛选出两株能同时产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶且不产生溶血现象的芽孢杆菌SWL-17和SWL-19。14种抗生素药敏纸片检测结果表明,二者对绝大多数抗生素敏感,且敏感程度基本相同。除SWL-19不能利用蔗糖发酵外,两个株菌的革兰氏染色、芽孢染色、产酸产气、柠檬酸利用、葡萄糖发酵、硝酸盐还原和V-P等生理生化特性均相同。二者生长速度相同,但菌落形态特征差异较大。SWL-17的菌落形态为淡黄色,圆形隆起,表面光滑湿润,边缘整齐,而SWL-19的菌落形态为乳白色不透明,表面扁平干燥,边缘不整齐。SWL-17产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶的能力分别为(1.62±0.04)、(2.12±0.11)、(1.87±0.03)和(1.43±0.03),SWL-19的产酶能力分别为(2.91±0.05)、(2.43±0.04)、(3.24±0.12)和(3.48±0.10)。因此SWL-19具有较高的产消化酶能力,且除脂肪酶外,其产蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的能力均显著性高于SWL-17(P<0.05)。细菌16S r DNA序列比对和系统发育分析表明SWL-17和SWL-19分别为芽孢杆菌(Bacillus sp.)和枯草芽孢杆菌(***),且SWL-19具有更清楚的遗传背景,适于进行后续试验。进一步DGGE试验结果表明,自然条件下家蚕肠道内的优势菌群为肠球菌属(Enterococcus)细菌,而外源性添加菌株SWL-19后能使家蚕肠道内的芽孢杆菌属和肠杆菌属细菌成为优势菌群,说明芽孢杆菌SWL-19能在家蚕肠道内定殖,并且能改变家蚕肠道内微生物菌群的结构和多样性。【结论】家蚕益生芽孢杆菌的筛选为研发蚕用复合微生态制剂提供菌株资源,在蚕业生产上具有重要的应用价值。

关键词：益生菌筛选家蚕肠道菌群芽孢杆菌巢式PCR-DGGE

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家蚕的性别决定分子机制研究进展

家蚕的性别决定分子机制研究进展

第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：郭东东何石宝唐文超辛佳朱勇西南大学生物技术学院

关键词：家蚕性染色体性别决定基因初始信号剂量补偿

来源： cnki会议评论

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果蝇求偶行为分子调控机制的研究进展

果蝇求偶行为分子调控机制的研究进展

蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响

第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：何石宝李冠楠郭东东唐文超隆耀航朱勇

果蝇（Drosophila）的求偶行为受多个基因调控,例如fruitless（fru）、dissatisfaction（dsf）和retained（retn）等。它们通过不同的剪切方式产生特异性产物,利用这些产物来控制雌雄果蝇的求偶行为,它们的剪切方式是雌雄果蝇求偶行为... 详细信息

果蝇（Drosophila）的求偶行为受多个基因调控,例如fruitless（fru）、dissatisfaction（dsf）和retained（retn）等。它们通过不同的剪切方式产生特异性产物,利用这些产物来控制雌雄果蝇的求偶行为,它们的剪切方式是雌雄果蝇求偶行为和性别决定所必需的。主要阐述了这些基因在果蝇求偶行为方面的分子调控机制,为进一步研究果蝇的求偶行为和性别决定提供理论依据。

关键词：果蝇剪接方式求偶行为性别决定

来源： cnki会议评论

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蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响