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IL-17在肺癌发病机制中的作用研究

IL-17在肺癌发病机制中的作用研究

作者：何燕超皖南医学院

学位级别：硕士

目的:(1)观察Th17在不同病理类型和不同分期的肺癌患者体内变化;(2)探索IL-17基因多态性与肺癌发病风险、肺癌类型、分期的关系;(3)探索IL-17A对肺癌的作用机制。方法:(1)第一部分收集60例肺癌患者和30例健康对照,运用流式细胞术检测他... 详细信息

目的:(1)观察Th17在不同病理类型和不同分期的肺癌患者体内变化;(2)探索IL-17基因多态性与肺癌发病风险、肺癌类型、分期的关系;(3)探索IL-17A对肺癌的作用机制。方法:(1)第一部分收集60例肺癌患者和30例健康对照,运用流式细胞术检测他们外周血Th17的表达,分析Th17在不同病理类型和不同分期的肺癌患者体内的变化。(2)第二部分收集350例肺癌患者和350例健康对照,运用连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR)技术检测IL-17A、IL-17F的基因多态性,比较两组之间的基因多态性的差别,并分析与肺癌发病风险、肺癌类型、分期的关系。(3)第三部分传代培养人肺癌细胞株(A549),应用不同浓度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)的重组人IL-17A蛋白(Recombinate human interlukin 17A,rhIL-17A)刺激后,运用MTT法和细胞划痕实验观察IL-17A对A549迁移的影响,通过real-time PCR的方法测定IL-17A对A549 VEGF、TGF-β、PGE2、MMP-9和IL-6 mRNA水平的影响,通过Western blot的方法测定IL-17A对A549 pMAPK、MAPK、NF-kB蛋白水平的影响,探索IL-17A在肺癌中的作用机制。结果:(1)第一部分非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血Th17细胞均相对于健康对照明显增高(分别为3.40%±0.49%与2.16%±0.39%,P0.05;)。虽然SCLC患者Th17细胞水平在局限期和进展期无统计学差异,但NSCLC患者进展期Th17细胞相对于局限期降低(分别为4.08%±0.43%与2.97%±0.63%,P<0.05)。(2)第二部分纳入320例肺癌患者和358例健康对照,研究IL-17A(rs2275913,rs3748067,rs3819025)、IL-17F(rs763780,rs1266828,rs12203582)SNPs与肺癌的关系发现,rs2275913的AA基因型和A等位基因相对于GG基因型和G等位基因肺癌的发病风险均升高,纠正(吸烟、性别、年龄)OR值分别为1.831(1.09-3.09)和1.26(1.01-1.56);rs2275913 AA基因型相对于AG+GG基因型肺癌发病风险进一步升高,纠正OR值为2.082(1.311-3.31)。按吸烟分层后,吸烟肺癌组rs2275913和rs12203582肺癌患者纯合子突变频率明显高于对照组,排除性别和年龄的影响后,OR值分别为2.897(1.34-6.28)和2.57(1.18-5.63)。按病理类型分层后,rs2275913的AA基因型突变使腺癌和其他类肿瘤的发病风险增高,纠正OR值分别为2.327(1.34-4.05)和2.99(1.11-8.06);rs12203582的GG基因型突变也使腺癌的发病风险也增高,纠正OR值为1.84(1.04-3.25)。按分期分层后,晚期肺癌患者rs2275913 AA基因型和等位基因A突变频率高于健康对照,纠正OR值分别为2.35(1.46-3.80)和1.36(1.08-1.70),rs12203582GG基因型突变频率高于健康对照,纠正OR值为1.74(1.06-2.87)。(3)第三部分浓度小于500ng/ml的rhIL-17A刺激均不影响A549细胞活性。rhIL-17A不能影响A549细胞的迁移能力,但rhIL-17A可以上调A549细胞IL-6的水平并上调MAPK蛋白,促进MAPK蛋白磷酸化。结论:Th17细胞在肺癌患者体内表达升高,但是随着肿瘤进展会逐渐被抑制。IL-17A、IL-17F SNPs(rs2275913、rs12203582)增加了肺癌的发病风险,并且在吸烟人群作用更明显。IL-17A、IL-17F SNPs(rs2275913、rs12203582)明显增高腺癌的发病风险,可能与肺癌的进展有关。IL-17A并不能促进肺癌生长,但可能通过激活肺癌细胞MAPK通路上调IL-6,促进肺癌附近血管生成,促进肺癌转移。

关键词：白细胞介素-17A 白细胞介素-17F 肺癌辅助性T细胞17 单核苷酸多态性

非小细胞肺癌患者外周血Th17和Treg表达的意义

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复旦学报（医学版） 2015年第3期42卷 362-367页

作者：何燕超施劲东梅周芳钱凌黄琦慧揭志军皖南医学院附属弋矶山医院呼吸内科芜湖238300 复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科上海200240

目的研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血中辅助性T细胞17（T help cell 17,Th17）与调节性T淋巴细胞（T regular cell,Treg）表达及平衡关系的变化,探讨其在NSCLC发病机制中的作用.方法应用流式细胞术检... 详细信息

目的研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血中辅助性T细胞17（T help cell 17,Th17）与调节性T淋巴细胞（T regular cell,Treg）表达及平衡关系的变化,探讨其在NSCLC发病机制中的作用.方法应用流式细胞术检测60例NSCLC患者和31例健康对照外周血Th17和Treg的表达及平衡关系的变化.结果 NSCLC患者外周血Th17表达明显高于健康对照组[（3.40％±0.49％） vs.（2.16％±0.39％）,P＜0.001],但腺癌与鳞癌组及进展期（Ⅳ期）与局限期（Ⅰ～Ⅲ期）组Th17无明显差异.NSCLC患者外周血Treg表达与健康对照相比也有显著升高[（7.76％±1.58％） vs.（4.40％±1.08％）,P＜0.001],并且进展期较局限期组Treg表达明显升高[（8.16％±1.56％） vs.（6.97％±1.35％）,P=0.005].腺癌组与鳞癌组Treg表达无明显差异.NSCLC组Treg/Th17较健康对照组明显增高[（2.36±0.73） vs.（2.05±0.46）,P=0.038],并且进展期较局限期组进一步升高[（2.53±0.78） vs.（2.03±0.51）,P=0.012].结论 NSCLC患者可能存在Treg/Th17的失衡,而Treg/Th17比值的变化也与NSCLC的预后相关.

关键词：非小细胞肺癌辅助性T细胞17 调节性T淋巴细胞

白细胞介素27对哮喘免疫调控及治疗的研究进展

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医学综述 2015年第23期21卷 4230-4233页

作者：何燕超揭志军皖南医学院安徽芜湖241000 复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科上海200240

CD_4^+T细胞及其效应性细胞因子在支气管哮喘的病理生理机制中起重要作用。近十余年的研究结果显示,白细胞介素27(IL-27)不仅可以促进Th1细胞免疫反应、抑制Th2细胞和Th17细胞免疫反应,还可以促进CD_4^+T细胞分泌IL-10进而起到抑制炎症... 详细信息

CD_4^+T细胞及其效应性细胞因子在支气管哮喘的病理生理机制中起重要作用。近十余年的研究结果显示,白细胞介素27(IL-27)不仅可以促进Th1细胞免疫反应、抑制Th2细胞和Th17细胞免疫反应,还可以促进CD_4^+T细胞分泌IL-10进而起到抑制炎症的作用,并且它还参与了调节性T细胞的分化,提示IL-27可能在哮喘的病理生理机制中扮演着重要角色。

关键词：哮喘白细胞介素27 免疫

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综合医院活动性肺结核的早期筛查策略

结核与肺部疾病杂志 2022年第4期3卷 334-337页

作者：何燕超揭志军复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科上海200240 复旦大学社区健康研究中心上海200240

中国是结核病高负担国家,结核病防控形势不容乐观。综合医院是发现肺结核的“哨点”,对综合医院患者进行活动性肺结核的早期筛查具有重要意义。作者介绍了不同结核病检查方法筛查的优劣性,着重分析了门诊患者和住院患者的筛查策略,以期... 详细信息

中国是结核病高负担国家,结核病防控形势不容乐观。综合医院是发现肺结核的“哨点”,对综合医院患者进行活动性肺结核的早期筛查具有重要意义。作者介绍了不同结核病检查方法筛查的优劣性,着重分析了门诊患者和住院患者的筛查策略,以期能为综合医院结核病防控提供参考。

关键词：结核,肺早期诊断医院,综合卫生措施

成人社区获得性肺炎合并呼吸道病毒感染住院患者病毒谱及临床特征分析

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中国全科医学 2021年第26期24卷 3323-3329页

作者：何燕超张静冯净净梅周芳钱凌黄琦慧揭志军复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科上海市200240

背景成人社区获得性肺炎(CAP)合并呼吸道病毒感染与单纯CAP在临床治疗上是否存在差异尚不清楚。本研究拟从分析CAP合并呼吸道病毒感染病毒谱和临床特征与单纯CAP的差异来探讨此问题。目的分析成人CAP合并呼吸道病毒感染患者的病毒谱特... 详细信息

背景成人社区获得性肺炎(CAP)合并呼吸道病毒感染与单纯CAP在临床治疗上是否存在差异尚不清楚。本研究拟从分析CAP合并呼吸道病毒感染病毒谱和临床特征与单纯CAP的差异来探讨此问题。目的分析成人CAP合并呼吸道病毒感染患者的病毒谱特点及其临床特征。方法选取2017年6月-2019年5月复旦大学附属上海市第五人民医院住院部收治的CAP患者223例,采集CAP患者的咽拭子,应用多重巢式反转录酶-聚合酶链式反应(nested multiplex RT-PCR)检测8种(10型)常见的呼吸道病毒。将CAP患者分为病毒阳性组和病毒阴性组,分析病毒阳性组CAP患者的临床特征。同时,采集病毒阳性、病毒阴性CAP患者及社区健康对照者的血清各24份,采用ELISA检测血清中白介素(IL)-6、IL-8、IL-10、干扰素(INF)-γ、干扰素诱导蛋白(IP)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度。结果223例CAP患者中61例(27.35%)患者病毒检测阳性,其中单病毒感染58例(26.01%),多病毒感染3例。单病毒感染包括22例(9.87%)流感病毒A(Flu A)、14例(6.28%)鼻病毒(RhV)、9例(4.03%)流感病毒B(Flu B)、5例(2.24%)腺病毒(ADV)、2例(0.90%)冠状病毒(CoV)、2例(0.90%)呼吸道合胞病毒A(RSVA)、2例(0.90%)偏肺病毒(MPV)、1例(0.45%)博卡病毒(BoV)、1例(0.45%)呼吸道合胞体病毒B型(RSVB)。根据年龄分为非老年(≤65岁)组和老年(>65岁)组,两组病毒检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CAP患者四季均会有病毒感染,冬季为高发季节,感染病毒主要有Flu A、RhV、Flu B。按照呼吸道病毒检测结果分为病毒阳性组和阴性组,病毒阳性组死亡率高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),其中病毒阳性组死亡患者均为合并流感病毒感染。进一步将呼吸道病毒阳性组分为流感组(包括Flu A和Flu B)和非流感组,发现流感组乳酸脱氢酶水平高于非流感组,流感组死亡率高于病毒阴性组(P<0.05)。影像学特征分析结果显示,病毒阳性组双肺病变、多肺叶病变、斑片状渗出影比例高于病毒阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清细胞因子水平分析结果显示,病毒阳性组IL-10水平高于病毒阴性组。结论上海闵行地区CAP患者合并呼吸道病毒感染较为常见,检出病毒以Flu A、RhV和Flu B为主,其临床特征无明显差异,合并流感病毒感染可能会导致死亡率增加,病毒阳性患者影像学多表现为双肺病变、多肺叶病变、斑片状渗出影,病毒阳性患者IL-10血清浓度明显升高,以上结果对于CAP合并呼吸道病毒感染有一定的参考价值。

关键词：社区获得性肺炎呼吸病毒感染疾病特征流感病毒A型流感病毒B型鼻病毒属

基于静态分析的金融IT系统非功能测试过程质控研究及实践

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中国金融电脑 2019年第2期 48-53页

作者：张爱琦何燕超李冬晓中国建设银行北京开发中心

在中国建设银行(以下简称“建行”)新一代核心系统建设过程中,为确保测试实施全面落地非功能需求的实现,达成业务目标和技术目标,实现系统顺利上线投产,非功能测试团队建立了一套完善有效的测试质量管控体系。管控体系除定义了关键提交... 详细信息

在中国建设银行(以下简称“建行”)新一代核心系统建设过程中,为确保测试实施全面落地非功能需求的实现,达成业务目标和技术目标,实现系统顺利上线投产,非功能测试团队建立了一套完善有效的测试质量管控体系。管控体系除定义了关键提交件的质量评审的常规管控内容,还从覆盖测试任务全生命周期的视角,设立了基于静态分析思想的测试过程质控工作域,提出测试过程监控、投产前比对以及投产后分析的静态检查和分析方法,扩大了测试管控范围,有效提升动态测试实施能力,全面识别投产组件的非功能风险,达到测试参数配置合理、性能问题精准定位、测试优化与生产同步以及生产缺陷预防改进的目的。实践证明,测试过程质控工作在提升应用版本质量和预防生产问题方面成效显著。

关键词：测试过程静态分析 IT系统实践管控体系金融中国建设银行测试质量

乙酰胆碱酯酶和中性粒细胞与淋巴细胞比值对卒中相关性肺炎的预测价值

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实用临床医药杂志 2022年第5期26卷 100-104页

作者：孙伟谢娟何燕超复旦大学附属上海市第五人民医院上海200240 复旦大学社区健康研究中心(筹) 上海200240

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者乙酰胆碱酯酶(AChE)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)及C反应蛋白(CRP)等指标对卒中相关性肺炎(SAP)的预测价值。方法回顾性选取202例ACI患者为研究对象,将发生SAP的105例患者纳入SAP组,将未发生SAP的97例... 详细信息

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者乙酰胆碱酯酶(AChE)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)及C反应蛋白(CRP)等指标对卒中相关性肺炎(SAP)的预测价值。方法回顾性选取202例ACI患者为研究对象,将发生SAP的105例患者纳入SAP组,将未发生SAP的97例患者纳入对照组。入院24 h内采集所有患者静脉血,检测AChE、NLR、CRP等指标水平,并评估患者美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。采用单因素和多因素Logistic回归分析探讨ACI患者发生SAP的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析AChE和NLR对SAP的预测价值,并比较不同AChE、NLR水平患者的病情严重程度和转归情况。结果SAP组年龄、心房颤动者占比、中性粒细胞计数、NLR、AChE、NIHSS评分、病死率均高于对照组,住院时间长于对照组,淋巴细胞计数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,AChE[风险比(HR)=0.99,95%置信区间(CI)为0.98~1.00]、NLR(HR=3.10,95%CI为1.89~5.10)均是SAP发生的独立影响因素。ROC曲线显示,AChE[曲线下面积(AUC)=0.92,截断值5994.00 U/L,敏感度88.60%,特异度87.60%]、NLR(AUC=0.93,截断值4.43,敏感度82.90%,特异度91.80%)均对SAP风险有较高的预测价值,且AChE联合NLR的预测价值更高(AUC=0.98)。低AChE组NIHSS评分、病死率高于高AChE组,住院时间长于高AChE组,差异有统计学意义(P<0.05);高NLR组NIHSS评分高于低NLR组,住院时间长于低NLR组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清AChE、NLR均与ACI患者SAP发病密切相关,二者联合应用对SAP风险具有重要的预测价值,且AChE、NLR水平可影响ACI严重程度和转归。

关键词：胆碱酯酶中性粒细胞与淋巴细胞比值卒中相关性肺炎急性脑梗死预测效能转归

上海闵行地区老年慢性阻塞性肺疾病急性发作患者病毒感染分析

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中华急诊医学杂志 2014年第6期23卷 667-672页

作者：施劲东何静胡芸文何燕超黄琦慧梅周芳钱凌蒋蓉揭志军复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸科上海200240 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心病原体检测与生物安全部

目的：观察上海闵行地区2010-2012年老年慢性阻塞性肺疾病急性发作期（acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease， AECOPD ）患者病毒感染情况，探讨老年AECOPD病毒感染的相关临床特征。方法选择2010年9月至2012... 详细信息

目的：观察上海闵行地区2010-2012年老年慢性阻塞性肺疾病急性发作期（acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease， AECOPD ）患者病毒感染情况，探讨老年AECOPD病毒感染的相关临床特征。方法选择2010年9月至2012年11月复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸科70岁以上老年AECOPD住院患者为研究对象，并排除不能配合肺功能检查的患者。所有患者均采集鼻咽拭子，采用多重巢式PCR检测9种呼吸道病毒及其不同亚型，包括A型流感病毒（FluA）、2009甲型流感病毒（09FluH1）、B型流感病毒（FluB）、呼吸道合胞病毒A型（RSVA）和 B 型（RSVB）、人冠状病毒229E 型（hCOV-229E）、NL-63型（hCOV-NL63）、OC43型（hCOV-OC43）和 HKU1型（hCOV-HKU1）、人副流感病毒1～4型（hPIV1、hPIV2、hPIV3、hPIV4）、腺病毒（hAdV）、博卡病毒（HBoV）、人类偏肺病毒（hMPV）、鼻病毒（hRV）等。根据检测结果将所有病例分为病毒感染组和非病毒感染组，分析病毒感染与AECOPD临床特征的关系。结果入选的60例患者中14例病毒检测阳性，阳性率为23.33％，其中一例为三重感染（FluB、hRV和 hCOV）。检出病毒为9例 hRV （15.00％）、2例 hPIV （3.33％）、2例 hCOV （3.33％）、2例FluB （3.33％）、1例RSV （1.67％）。通过比较两组之间的临床特征，发现病毒感染组病死率高于非病毒感染组，其余一般情况、症状、体征、化验检查和住院时间方面两组之间差异无统计学意义。结论鼻病毒是老年AECOPD患者呼吸道检出最多的病毒。老年AECOPD患者呼吸道病毒感染影响预后，且临床表现缺乏特异性，快速诊断上存在一定困难。

关键词：老年慢性阻塞性肺疾病急性加重鼻咽拭子病毒感染鼻病毒呼吸道合胞病毒流感病毒

流感病毒感染巨噬细胞对缺氧诱导因子-1α诱导炎症反应通路的机制研究

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微生物与感染 2021年第3期16卷 164-170页

作者：何燕超张静冯净净揭志军复旦大学附属上海市第五人民医院呼吸内科上海200240 复旦大学社区健康研究中心(筹) 上海200240

为探索缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α诱导甲型流感病毒毒株感染小鼠巨噬细胞引起炎症反应的具体机制,本研究以甲型H1N1流感病毒(简称H1N1)株A/PR/8感染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,在显微镜下观察其在感染后的表型变化,... 详细信息

为探索缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α诱导甲型流感病毒毒株感染小鼠巨噬细胞引起炎症反应的具体机制,本研究以甲型H1N1流感病毒(简称H1N1)株A/PR/8感染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,在显微镜下观察其在感染后的表型变化,分别在不同时间段收集样本,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HIF-1α、干扰素(interferon,IFN)-γ、白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和M蛋白(M protein,MBP)mRNA的变化,通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测HIF-1α、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、促分裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)以及M蛋白的变化。随后,加入抑制剂2-MeOE-2(10nmol/L)进行抑制试验,采用PCR和WB检测HIF-1α表达被抑制后上述炎症因子mRNA表达水平及炎症蛋白通路的变化。结果显示,H1N1PR8感染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,H1N1PR8复制率在24h达到峰值,HIF-1αmRNA在感染6h后开始升高,12h迅速上升,24h达到峰值。IFN-γ、IL-6、TNF-αmRNA变化趋势基本与HIF-1α一致,但在感染12h并未进入快速上升期。HIF-1α蛋白在感染后6h表达明显增多,24h达到峰值,与mRNA变化水平基本一致。NF-κB通路蛋白在感染12h后明显增多,48h开始减少。加入抑制剂2-MeOE-2后,培养感染细胞24h,抑制剂组IL-6、TNF-αmRNA水平较对照组显著下降(P<0.05),抑制剂组NF-κB通路蛋白较对照组表达下降。本研究结果表明,小鼠巨噬细胞被H1N1感染后,HIF-1α可能通过激活NF-κB通路促进IL-6、TNF-α等炎症因子的分泌参与炎症反应。

关键词：缺氧诱导因子-1α 流感病毒巨噬细胞核转录因子-κB