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基于纳米荧光探针细胞成像的呕吐毒素毒性评估研究

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基于纳米荧光探针细胞成像的呕吐毒素毒性评估研究

作者：何楚娴江南大学

学位级别：硕士

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)也称为呕吐毒素,是小麦赤霉病病原菌禾谷镰刀菌产生的代谢产物,可污染包括小麦,大麦,燕麦,黑麦和玉米等在内的主要农作物,并出现在面条和啤酒等食品中;发生率高,不易被降解,且具有多种毒性,一旦... 详细信息

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)也称为呕吐毒素,是小麦赤霉病病原菌禾谷镰刀菌产生的代谢产物,可污染包括小麦,大麦,燕麦,黑麦和玉米等在内的主要农作物,并出现在面条和啤酒等食品中;发生率高,不易被降解,且具有多种毒性,一旦产生将通过食物链传递,对人体和动物的健康均产生巨大威胁。通过细胞毒性实验研究细胞在DON刺激下引发的生物标志物变化,对探究其作用机理,评估DON与毒性间的量效关系具有重要意义。荧光成像技术具有高灵敏度,低成本,低放射性等优势,可实现活细胞中生物标志物原位可视化监测。本课题制备了两类新型纳米荧光探针,针对DON诱导细胞凋亡引起的线粒体信号传导通路的激活,以细胞成像的方式对生物标志物进行监控。评估呕吐毒素的细胞毒性,为解析呕吐毒素的毒性机理、实时监测呕吐毒素与其诱导的细胞凋亡间应答关系的研究提供了一定手段。本课题的具体研究内容如下:1.基于荧光分子印迹探针实时原位监测DON诱导的细胞凋亡。以表面分子印迹作为识别基团,Cd Te量子点作为信号基团,制备了具有识别的高选择性和荧光检测的高灵敏度的量子点分子印迹聚合物,Cd Te@MIP探针。当Cd Te@MIP与Cyt c反应后,Cd Te@MIP的荧光由于光诱导电子转移被淬灭,Cd Te@MIP探针的荧光强度与Cyt c的浓度呈良好的线性关系,线性方程为y=0.07165x+0.8923,R=0.9897。激光共聚焦显微镜的成像结果显示,随着DON浓度(0-10μM)和孵育时间(0-7.5 h)的增加,DON诱导产生的Cyt c逐渐增多,胞内分子印迹探针与Cyt c特异性结合后致使荧光逐渐淬灭,成功实现了在DON诱导下对胞内Cyt c释放的实时监测。该细胞成像方法评估DON细胞毒性与传统CCK法和流式细胞术检测结果一致,证明了基于Cd Te@MIP探针的细胞成像技术与先验毒理结果具有一致性,为建立食品中真菌毒素的早期预警体系提供了一定的指导。2.基于ZIF-8基-适配体探针双识别的DON和Cyt c同步细胞成像监测研究。以适配体作为识别基团,有机荧光染料作为信号基团,结合适配体的特异性和ZIF-8基多孔碳可负载大量荧光染料的优点,开发了一种ZIF-8基-适配体探针用于双识别活细胞中的DON和Cyt c。将罗丹明6G(Rh6G)和亚甲基蓝(MB)分别负载进700℃氮气氛围下碳化的ZIF-8(ZIF-NC)的孔道中,并分别用Cyt c和DON的适配体门控封孔,当靶标Cyt c和DON存在时,Cyt c和DON的适配体与相应靶标特异性识别后从多孔碳表面脱离,门控“开启”,Rh6G和MB得以释放,两种有机染料的荧光强度与Cyt c和DON的浓度变化呈良好的线性关系,其中,ZIF-NC@MB@D-Apt荧光强度与DON浓度的线性方程为y=74.22lg C+219.97,R=0.9987;ZIF-NC@Rh6G@C-Apt荧光强度与Cyt c浓度的线性方程为y=58.41lg C+155.75,R=0.9957。激光共聚焦显微镜的成像结果显示,在DON(10μM)的诱导下,装载进细胞的两种探针分别与DON以及DON诱导产生的Cyt c反应,Rh6G和MB染料由此从探针孔道内泄露,荧光迅速增强并于6 h内达到稳定,成功监测了Hep G2细胞凋亡过程中DON的暴露情况以及由DON诱导的凋亡通路激活引发的Cyt c的释放,解析了DON与细胞凋亡过程中生物标志物Cyt c之间的时空特征和应答关系,对全面系统开展真菌毒素的细胞毒理学具有重要意义。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇纳米荧光探针细胞凋亡细胞色素c 毒性评估

miRNA在低剂量γ辐射影响斑马鱼胚胎神经发育中的作用及机制

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miRNA在低剂量γ辐射影响斑马鱼胚胎神经发育中的作用及机制

作者：何楚琦南华大学

学位级别：硕士

目的探索低剂量辐射对斑马鱼神经发育的影响,并探讨mi RNA是否参与其中,为低剂量辐射所致的生物学效应和调控机制提供依据。方法以AB系蓝斑马鱼为模型,用Cs辐射源对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,在不同辐照剂量率和不同辐照时间... 详细信息

目的探索低剂量辐射对斑马鱼神经发育的影响,并探讨mi RNA是否参与其中,为低剂量辐射所致的生物学效应和调控机制提供依据。方法以AB系蓝斑马鱼为模型,用Cs辐射源对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,在不同辐照剂量率和不同辐照时间下,观察γ射线对斑马鱼胚胎的神经发育毒性作用:(1)显微镜观察胚胎大体形态,并分析孵化率、畸形率、死亡率;(2)FM1-43染色观察侧线神经系统发育;(3)HE染色观察脑组织细胞形态学变化;(4)行为学试验分析斑马鱼的游泳速度和反应时间;(5)全转录组测序筛选辐射后斑马鱼脑部差异表达mi RNAs,并进行生物信息学分析;(6)RT-PCR技术检测γ辐射影响斑马鱼胚胎神经发育相关的mi RNAs及Dicer、Drosha基因的时序性表达情况;(7)胚胎整体原位杂交检测γ射线影响斑马鱼胚胎神经发育相关的mi RNAs及Dicer、Drosha基因的空间表达情况;(8)生物信息学分析验证人体中对应mi RNA的靶基因及其与神经发育和辐射效应相关的通路结果1.以0m Gy/h、0.1m Gy/h、0.2m Gy/h、0.4m Gy/h的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至24hpf、48hpf、72hpf、96hpf及120hpf的斑马鱼,在荧光显微镜下进行观察、拍照,并统计120hpf斑马鱼的孵化率、畸形率和死亡率。结果显示:0.4m Gy/h辐照下的斑马鱼胚胎发生较明显且典型的发育畸形,如卵黄囊畸形、心包水肿、尾部弯曲、脊柱扭曲等。相比与对照组,辐照组的孵化率均下降;死亡率在0.2m Gy/h和0.4m Gy/h辐照组上升;畸形率在0.1m Gy/h辐照后下降,0.4m Gy/h辐照后上升。与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。2.以0m Gy/h、0.1m Gy/h、0.2m Gy/h、0.4m Gy/h的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至120hpf的斑马鱼,对各组斑马鱼侧线神经母细胞进行FM1-43染色后,于荧光显微镜下观察、拍照。可见对照组及0.1m Gy/h辐照组胚胎的侧线系统神经丘排列整齐、结构清晰;而0.2m Gy/h和0.4m Gy/h辐照组的侧线系统神经丘出现不同程度的发育异常,神经丘数量减少,且排列紊乱模糊。3.以0m Gy/h、0.1m Gy/h、0.2m Gy/h、0.4m Gy/h的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至72hpf、96hpf及120hpf的斑马鱼,对各组斑马鱼脑部组织进行HE染色后,于荧光显微镜下观察、拍照。切片可见对照组和0.1m Gy/h辐照组显示细胞结构正常,呈均匀致密分布,细胞核大而圆;而0.2m Gy/h和0.4m Gy/h辐照组显示细胞核固缩,细胞体积水肿增大,细胞间间隙增大出现空洞,神经元数量减少,胶质细胞增殖,形成胶质瘢痕。4.以0m Gy/h、0.1m Gy/h、0.2m Gy/h、0.4m Gy/h的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至120hpf的斑马鱼,检测其游泳速度和反应时间。发现0.1 m Gy/h组斑马鱼的平均游泳速度显著增加,0.2 m Gy/h组和0.4 m Gy/h组斑马鱼的平均游泳速度显著降低(P<0.05)。在光刺激实验中,对照组和0.1 m Gy/h组斑马鱼比0.2 m Gy/h组和0.4 m Gy/h组斑马鱼反应迅速。5.以累积剂量为7.5m Gy、15m Gy、30m Gy的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至72hpf、96hpf、120hpf的斑马鱼,通过全转录组测序及ce RNA网络构建,筛选辐射后斑马鱼脑部差异表达mi RNAs,并对目标mi RNA进行生物信息学分析。结果显示,dre-mi R-196a-5p、dre-mi R-210-3p和dre-mi R-338在斑马鱼胚胎每个发育时期均有显著性差异表达(P<0.05)。dre-mi R-196a-5p、dre-mi R-210-3p和dre-mi R-338成熟序列均具有高度保守性。6.以0m Gy/h、0.1m Gy/h、0.2m Gy/h、0.4m Gy/h的γ辐射分别对发育至2小时的斑马鱼胚胎进行持续辐照,收集发育至6hpf、12hpf、24hpf、48hpf、72hpf、96hpf及120hpf的斑马鱼,通过RT-PCR技术检测γ辐射影响斑马鱼胚胎神经发育相关的mi RNAs及Dicer、Drosha基因的时序性表达情况。结果显示,dre-mi R-196a-5p、dre-mi R-210-3p、dre-mi R-338和Dicer、Drosha基因在斑马鱼胚胎每个发育时期均有不同程度的表达。经γ射线辐照后,mi

关键词：低剂量γ辐射阈值效应 miRNA 斑马鱼胚胎神经发育

地方电视台国际新闻如何闯出新路——从香港无线《午间新闻》得出的启示

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中国广播电视学刊 2012年第9期 103-105页

作者：何楚玲广东南方电视台新闻中心

现如今，世界范围内政治多极化、经济的全球化趋势和以互联网为代表的电子媒体跨越国界的迅猛发展使国际传播的作用日益明显，国际新闻作为国际传播的一个重要组成部分也受到了人们的重视。

关键词：国际新闻地方电视台无线香港国际传播政治多极化全球化趋势世界范围

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碧血千秋

作者：何楚[]

来源：南通市图书馆图书评论

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虚拟企业管理模式探析

商业研究 2003年第23期 10-13页

作者：何楚峰国防科技大学人文与管理学院湖南长沙410073

虚拟企业作为市场竞争和信息技术发展的产物,代表着一种新的企业管理模式,具有与传统的实体企业完全不同的特征。在介绍虚拟企业基础理论的前提下,试图从虚拟企业的组织形态和管理策略两方面来剖析虚拟企业的管理模式。有助于人们理解... 详细信息

虚拟企业作为市场竞争和信息技术发展的产物,代表着一种新的企业管理模式,具有与传统的实体企业完全不同的特征。在介绍虚拟企业基础理论的前提下,试图从虚拟企业的组织形态和管理策略两方面来剖析虚拟企业的管理模式。有助于人们理解虚拟企业的实质和管理层面的许多问题,为我国企业的重组和改制提供一点依据。

关键词：虚拟企业管理模式组织形式网络组织管理策略企业文化

CdTe和CdTe/ZnS量子点水相合成及其在光谱分析中的应用

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CdTe和CdTe/ZnS量子点水相合成及其在光谱分析中的应用

作者：何楚华湘潭大学

学位级别：硕士

量子点不仅具有很多优异的光学性能，而且其激发光谱的谱带较宽并且是连续分布的，其发射光谱的谱带窄而对称，同时，具有较高的光化学稳定性和高的荧光量子产率，室温下不易分解，它在生物、医药研究有广泛的用途。本文选用碲化镉量子... 详细信息

量子点不仅具有很多优异的光学性能，而且其激发光谱的谱带较宽并且是连续分布的，其发射光谱的谱带窄而对称，同时，具有较高的光化学稳定性和高的荧光量子产率，室温下不易分解，它在生物、医药研究有广泛的用途。本文选用碲化镉量子点作为研究对象，对其水相合成方法进行改良，并对其分子光谱性质进行了考察。在应用方面，将量子点作为荧光探针测定了培氟沙星和十六烷基三甲溴化铵，并对机理进行了讨论。通过将量子点作为化学发光增敏剂应用于鲁米诺化学发光，对原儿茶酸进行了测定。全文共分为五章。 (1)第一章为论文的绪论。简单介绍了量子点的物理特性和发光机理，量子点的合成方法，以及量子点在荧光和化学发光分析中的应用。最后对量子点的研究前景作了展望，并通过此确定了论文的立题意义。 (2)第二章是水相合成CdTe和CdTe/ZnS量子点的研究。以巯基乙酸为稳定剂，分别合成了CdTe量子点和CdTe/ZnS核壳量子点。对合成条件，如pH值，反应时间，Cd/Te比，温度等进行了优化。运用紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计、透射电镜等手段，对制备的量子点进行了表征，得到了具有较好光学性能的量子点。 (3)第三章的工作是利用CdTe量子点作为荧光探针，基于一定量的培氟沙星对CdTe量子点荧光的猝灭效应，建立了一种简便、高灵敏度的测定微量培氟沙星的新方法。pH为9.5的B-R缓冲液中，量子点的浓度为2.0×10mol/L时，在这种情况下，培氟沙星的浓度在6.40×10.28×10mg/mL范围之内，与CdTe量子点的荧光猝灭强度呈现出良好的线性关系，相关系数为0.9917，检出限(S/N=3)为1.30×10mg/mL。并且文中还详细地研究了它的猝灭机理。用本方法对犬猫倍福康和注射用培氟沙星的含量进行了测定，回收率在94.6%-106%。 (4)第四章是利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对CdTe/ZnS核壳量子点有显著的荧光增敏作用，建立了用CdTe/ZnS量子点检测水中微量CTAB含量的新方法，在pH为6.0的Clark-Lubs缓冲液，量子点的浓度为6.0×10时，CTAB的浓度在0.10μg/mL范围与CdTe/ZnS量子点荧光强度呈良好的线性关系，相关系数为0.9966，检出限(S/N=3)为0.048μg/mL。我们用这种方法来检测水样中CTAB的含量，取得了令人满意的结果。 (5)第五章研究将CdTe量子点与鲁米诺-K[Fe(CN)]发光体系相结合，发现CdTe量子点对该体系具有显著增敏作用，我们根据这一特点设计了一种新的化学发光方法分析痕量原儿茶酸。同时，详细地研究了鲁米诺，K[Fe(CN)]，NaOH以及CdTe量子点浓度等因素对化学发光体系的影响，该方法对原儿茶酸的线性范围在1×10×10g/L之间，并且检出限是1.0×10g/L。

关键词：水相合成量子点光谱分析

跨境电商UGC社群氛围对消费者购买意愿的影响机制研究

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跨境电商UGC社群氛围对消费者购买意愿的影响机制研究

作者：何楚君江西师范大学

学位级别：硕士

从近两年《中国对外贸易形势报告》来看，在面临着全球贸易增长低迷，国际经贸摩擦加大、外贸下行压力增大的严峻形势下,中国跨境电商却呈现了市场成交规模爆发式增长的新型业态。相比于国内商品，消费者在购买进口商品时都必须承受更... 详细信息

从近两年《中国对外贸易形势报告》来看，在面临着全球贸易增长低迷，国际经贸摩擦加大、外贸下行压力增大的严峻形势下,中国跨境电商却呈现了市场成交规模爆发式增长的新型业态。相比于国内商品，消费者在购买进口商品时都必须承受更多的风险。所以，在购买之前，消费者会更加依靠已经购买到的用户的意见和建议，借此，很多国内的跨境电商针对顾客的需求，将目光投向了“社区+内容+电商”模式，并打造自身的UGC社群，发展成跨境社区电商。而跨境电商UGC社区与其他虚拟品牌社区相比，其社群效应存在弱关系性、低参与性的特点，营造良好的社群氛围，给平台进行精准营销提供了有利阵地。因此，本文从跨境电商UGC社群氛围视角出发，以S-O-R理论模型为框架，探究跨境电商UGC社群氛围对消费者购买意愿的影响机制，对于企业了解并有效利用跨境电商UGC社区开展低成本而高效的营销具有重要的意义。　　本文通过问卷调查的方式获取消费者的相关数据，并利用SPSS和AMOS软件开展大数据分析，得出分析结论，以检验模型和研究假设是否成立。本文得出以下结论：（1）跨境电商UGC社群氛围（支持性氛围、控制性氛围、引导性氛围）均对消费者购买意愿有显著正向影响。（2）跨境电商UGC社群支持性、引导性氛围对消费者沉浸体验有显著正向影响，控制性氛围对消费者沉浸体验影响不显著;消费者沉浸体验对其购买意愿具有显著正向影响;沉浸体验在跨境电商UGC支持性氛围、引导性氛围对消费者购买意愿中起中介作用，在控制性氛围对购买意愿的路径中不起中介作用。（3）涉入度在消费者沉浸体验对购买意愿的路径中具有正向调节作用，即当消费者处于沉浸状态时，涉入度越高，消费者沉浸体验对其购买意愿的影响越强。　　本研究围绕跨境电商UGC社群氛围、消费者沉浸体验、购买意愿等热点问题，进一步丰富了跨境电商UGC社群氛围与购买意愿相关的研究成果，为企业如何更好地运用跨境电商平台留存用户，提高用户黏性，增强其购买意愿提供新的参考。

关键词：跨境电子商务社群氛围消费者购买意愿沉浸体验涉入度

漫谈文化差异与文学翻译─—名著译文失当点滴

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外语研究 1994年第1期11卷 39-45页

作者：何楚熙

漫谈文化差异与文学翻译─—名著译文失当点滴何楚熙一个国家或民族的文化凝结着它从古至今的整个文明史。不同国家或民族之间的形形色色的文化差异，乃是翻译工作中涉及理解与表达的一大难题。文化作品往往更为集中地体现着一个国家或... 详细信息

漫谈文化差异与文学翻译─—名著译文失当点滴何楚熙一个国家或民族的文化凝结着它从古至今的整个文明史。不同国家或民族之间的形形色色的文化差异，乃是翻译工作中涉及理解与表达的一大难题。文化作品往往更为集中地体现着一个国家或民族的文化特色，因此，文学作品，特...

关键词：文化差异文学翻译《红楼梦》译文文学作品俄译《药》《死魂灵》文化特色翻译工作者

基于改进BP神经网络的钢坯加热炉温度优化控制的研究

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基于改进BP神经网络的钢坯加热炉温度优化控制的研究

作者：何楚衡南华大学

学位级别：硕士

钢坯加热炉是热轧生产线上的重要设备,也是钢铁工业中的耗能大户。加热炉的主要功能是将钢坯加热到满足轧制要求的温度。如何利用自动控制系统节约加热炉的能耗、保证钢坯的加热质量、确保燃烧系统的最佳燃烧、降低环境污染和延长加热... 详细信息

钢坯加热炉是热轧生产线上的重要设备,也是钢铁工业中的耗能大户。加热炉的主要功能是将钢坯加热到满足轧制要求的温度。如何利用自动控制系统节约加热炉的能耗、保证钢坯的加热质量、确保燃烧系统的最佳燃烧、降低环境污染和延长加热炉寿命一直是加热炉研究领域需要致力解决的问题。常规PID控制方法具有结构简单、鲁棒性好等优点,因此在加热炉控制中得到广泛的应用。但是加热炉具有大滞后、多变量、时变性、强耦合、大惯性、非线性等特点的复杂工业对象,并且受外界扰动因素多、加热过程受多种生产工艺因素的制约,而常规PID控制参数往往不能进行在线调整,难以适应对象的变化,而且加热炉的动态特性随着环境等的变化而变化,PID参数也很难达到最优的状态。神经网络作为一种新型的信息获取、描述和处理方式,正在引起过程控制界的注意。神经网络具有逼近任意非线性函数关系的能力和快速学历能力,是一种应用在复杂工业过程中的新型方法。本文在阐述了神经网络的发展、现状、基本原理以及其在自动控制中的应用的基础上,主要研究了BP神经网络的结构与算法及其在加热炉PID控制系统中的应用。提出利用BP神经网络对加热炉PID温度控制器参数进行在线调整,对BP神经网络的结构与算法进行了研究。通过对几种改进的BP神经网络算法进行仿真,得出基于改进共轭梯度法的BP神经网络法比其他几种改进的BP神经网络算法具有更好的控制效果。因此本文将基于改进共轭梯度法的BP神经网络PID参数控制方法用于加热炉温度控制中,以加热炉的一阶模型和二阶模型进行仿真,与另外四种BP神经网络PID控制方法进行对比。仿真结果表明,基于改进共轭梯度法的BP神经网络PID参数控制方法具有很好的收敛性和稳定性。

关键词：加热炉温度控制 PID BP神经网络共轭梯度法