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L929细胞检测nm-TiO2、nm-CuTiO2、nm-Betaine和nm-HA细胞毒性的研究

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L929细胞检测nm-TiO2、nm-CuTiO2、nm-Betaine和nm-HA细胞毒性的...

作者：何志昂深圳大学

学位级别：硕士

纳米材料广泛应用于医药、化工、能源、日常生活用品等各个领域,纳米材料产品有防晒霜、载药剂、涂料、食品添加剂等。纳米材料颗粒可流入空气、水、土壤环境中,人们对纳米材料的使用使得纳米材料易于进入人体。有研究表明纳米材料可引... 详细信息

纳米材料广泛应用于医药、化工、能源、日常生活用品等各个领域,纳米材料产品有防晒霜、载药剂、涂料、食品添加剂等。纳米材料颗粒可流入空气、水、土壤环境中,人们对纳米材料的使用使得纳米材料易于进入人体。有研究表明纳米材料可引起空气粒度污染、土壤重金属污染、水体有机质污染,也可引起机体氧化应激、炎症反应、DNA损伤、细胞凋亡等不良反应。纳米材料的毒性评估尚未有统一的标准,纳米材料的毒性评估体系有个体水平、器官水平、细胞水平、蛋白水平、基因水平等,本课题从细胞水平与基因水平研究几种纳米材料的细胞毒性,期望找到鉴定纳米材料细胞毒性的关键基因。本课题用原子力显微镜检测nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine、nm-HA四种纳米材料的粒径,以不同浓度的nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine、nm-HA胁迫L929细胞作为实验组,以不同浓度过氧化氢处理L929细胞作为阳性对照组。倒置显微镜观察细胞的形态变化,MTT法检测了L929细胞三天的细胞活力变化。endosome的标志蛋白Rab5的免疫荧光抗体标记endosome,通过荧光显微镜检测了四种纳米材料胁迫L929细胞48小时后的荧光分布与荧光强度。DCFH-DA荧光探针标记细胞的ROS,通过荧光显微镜与流式细胞术检测细胞的ROS水平。重组质粒COX4-PEGFP-N2转染L929细胞,G418筛选稳定遗传的细胞株后,以荧光显微镜检测各组细胞的线粒体形态的变化与细胞色素C的分布。免疫荧光抗体标记转录因子NF-Кb,通过荧光显微镜观察NF-Кb的荧光分布与荧光强度。ELISA试剂盒检测各组细胞炎症因子TNF-α的浓度变化。DNA损伤试剂盒检测DNA的氧化损伤程度。QPCR验证各相关基因的表达水平。本课题以nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine胁迫多头绒泡菌后测转录组,通过转录组数据分析找到鉴定纳米材料细胞毒性的关键基因,并通过QPCR进行验证,为进一步验证这些关键基因,用同样纳米材料胁迫L929细胞后,用QPCR检测相应基因的表达水平。实验发现四种纳米材料的直径主要分布在40到60nm。随着纳米材料浓度的升高,细胞的形态逐渐由规则的梭形变为圆形,且细胞周围吸附的纳米颗粒逐渐增多。在低浓度纳米材料的胁迫下,随着时间的延长细胞密度仍在增加;在高浓度纳米材料的胁迫下,随着时间的延长细胞密度逐渐变低。随着纳米材料浓度的增加,细胞活力逐渐下降,细胞的endosome数量逐渐增多,细胞ROS水平逐渐升高,细胞线粒体形态变圆,细胞色素C逐渐释放到线粒体外,细胞转录因子NF-Кb逐渐由细胞质转移到细胞核,炎症因子TNF-α细胞内含量逐渐增多。细胞DNA的氧化损伤程度增加,各相应基因的表达量变化明显。根据以上现象可以推断nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine、nm-HA吸附细胞表面以纳米材料的表面电荷效应干扰细胞的贴壁而影响细胞的形态,同时纳米材料被细胞内吞后并能引起细胞ROS水平的明显升高。过高的ROS则会引起细胞膜蛋白的损伤而影响细胞形态。过高的ROS会损伤线粒体,造成细胞色素C释放到细胞质,从而引起细胞炎症反应。炎症反应表现为转录因子NF-Кb逐渐由细胞质转移到细胞核,诱导炎症因子TNF-α等的表达量上升,过高的ROS会引起线粒体DNA氧化损伤与各相应基因表达量的变化。上述一系列不良反应则会引起细胞活力的下降。当细胞受到外界刺激时,其某些基因的表达量就会相应的有所调整。本课题以nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine胁迫多头绒泡菌后测转录组,通过转录组数据分析发现,与低剂量纳米材料胁迫相比高剂量的胁迫引起细胞明显上调的基因是:Q0WVW7、P33144、O43663、Q54I43、Q9UNS1;引起细胞明显下调的基因是:Q8CMN2、Q54N49、Q3BAI2、Q54QQ0、Q7RTR2。并通过QPCR验证了上述结果。本课题为了进一步验证上述基因,以L929细胞作为模型,以同样纳米材料胁迫L929细胞后通过QPCR进一步验证上述基因的相对表达量,其结果为,高剂量的胁迫引起细胞明显上调的基因是:Q0WVW7、O43663、Q54I43、Q9UNS1;高剂量的胁迫引起细胞明显下调的基因是:Q54N49、Q54QQ0、Q7RTR2。综上所述,可以初步推断,鉴定纳米材料细胞毒性的关键基因是Q0WVW7、O43663、Q54I43、Q9UNS1、Q54N49、Q54QQ0、Q7RTR2七个基因。本课题研究结果希望能为纳米材料细胞毒性的评估提供一定的参考。

关键词： nm-TiO2 L929细胞 ROS 细胞色素C 基因

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中国人寿收购广发银行案例分析

中国人寿收购广发银行案例分析

作者：何志昂河北经贸大学

学位级别：硕士

从全球看,混业经营是大势所趋。随着生活和科技水平的提高,越来越多的人参与到金融活动当中,并且对金融产品和金融服务需求越来越多样化,互联网科技的发展促进了金融业的发展。我国监管层面逐渐从分业监管到混业监管过渡,金融机构纷纷... 详细信息

从全球看,混业经营是大势所趋。随着生活和科技水平的提高,越来越多的人参与到金融活动当中,并且对金融产品和金融服务需求越来越多样化,互联网科技的发展促进了金融业的发展。我国监管层面逐渐从分业监管到混业监管过渡,金融机构纷纷开始尝试开展综合经营,保险公司和银行之间的入股现象逐渐增多,金融业混业经营的呼声越来越高。随着中国整体经济下行,银行业的利润率下滑,不良贷款率的上升,外资纷纷开始出售中国银行股,这就给中国保险公司收购银行股提供有利时机。近几年随着我国政府政策的放宽,金融企业之间的相互收购案例也逐渐增多,本次的案例分析可以为将来类似的收购案例提供一些宝贵的经验教训。本文以中国人寿收购广发银行为例,简要介绍收购双方的现状和中国人寿的收购动机,同时介绍了收购的具体过程,包括收购背景和收购价格的确定,最后分析了此次收购后出现的问题。通过对收购后协同效应的分析,我们发现这次收购在经营、财务、管理、文化方面有一定的协同效应,尤其是在经营方面。文章最后根据中国人寿收购广发银行案例提出了一些启示和建议:收购企业应该选择合适的时机并且在收购后加强资源整合;政府应该在收购方面制定政策,规范和引导收购行为,防范收购后风险扩大;企业应当加强内部管理和文化建设。

关键词：混业经营银保收购动机协同效应

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创造企业竞争优势之路——价值链管理

企业经济 2003年第8期22卷 113-114页

作者：齐振彪何志昂华中科技大学暨南大学

一、波特的价值链理论

关键词：企业竞争优势价值链管理核心能力战略成本分析组织结构

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云浮石材加工业发展战略思考

云浮石材加工业发展战略思考

作者：何志昂暨南大学

学位级别：硕士

云浮石材工业经过二十多年的发展，从小到大，从弱到强，取得了辉煌的成就。但是，面对环境的变化，市场竞争的加剧，加入WTO后带来的机遇和挑战，何去何从，企业正面临着艰难的抉择。本文将云浮石材工业作为研究对向，从对国内外石材... 详细信息

云浮石材工业经过二十多年的发展，从小到大，从弱到强，取得了辉煌的成就。但是，面对环境的变化，市场竞争的加剧，加入WTO后带来的机遇和挑战，何去何从，企业正面临着艰难的抉择。本文将云浮石材工业作为研究对向，从对国内外石材工业发展和竞争的现状及问题调查入手，借鉴波特的国家竞争优势理论，运用价值链分析理论和企业核心竞争力理论对云浮石材工业进行分析研究，分析了云浮石材工业的竞争力，提出培植和提高石材工业企业的核心竞争力，取得长远竞争优势的战略思考。本文运用战略管理的理论，对云浮石材工业进行了较为全面的分析比较，其分析研究的结果对了解石材行业竞争的现状、存在的问题有一定的帮助。通过分析提出的云浮石材工业企业和云浮石材业总体发展的战略思考，对石材工业和企业制定未来的发展战略，构建核心能力和培植长久的竞争优势，有着一定的参考意义。

关键词：石材工业,战略,价值链,核心竞争力

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论中小型企业品牌建设

中国商贸 2009年第11S期 56-57页

作者：赵柳村何志昂罗定职业技术学院

在分析中小型企业品牌建设存在问题的基础上,提出中小型企业品牌建设的对策,即对内:面向员工,提高对品牌建设的认可度;对外:面向市场,精心打造"三度"(即品牌的满意度、知名度、忠诚度)。

关键词：中小型企业品牌对策