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作者：何国东广州医科大学

学位级别：硕士

表观遗传学的改变对生物体的基因表达调控起重要作用,而生物体衰老的过程中会伴随着DNA甲基化与去甲基化修饰等表观遗传学的改变。衰老与甲基化修饰两者相互作用影响。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)虽然在体外培养增殖... 详细信息

表观遗传学的改变对生物体的基因表达调控起重要作用,而生物体衰老的过程中会伴随着DNA甲基化与去甲基化修饰等表观遗传学的改变。衰老与甲基化修饰两者相互作用影响。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)虽然在体外培养增殖能力极强,但在有限次数传代后,MSCs出现增殖抑制等衰老特征,其形态、生物学特征以及表观遗传特征产生了不同程度的变化。细胞增殖抑制的出现以及增殖过程表观遗传学的改变这两个因素都为MSCs的临床应用增加了难度和不确定因素。因此本文希望通过检测MSCs在体外增殖过程中细胞的衰老表现以及DNA甲基化与羟甲基化的变化情况,进而了解MSCs衰老过程中DNA表观遗传学的改变,以及衰老对于其DNA甲基化与羟甲基化的影响,为MSCs“永生化”提供表观遗传学的研究基础。本课题将从人骨髓中分离并提取MSCs进行培养传代。在传代过程中观察其衰老表现,并通过建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测5-甲基脱氧胞苷(5mdC)与5-羟甲基脱氧胞苷(5hmdC)的方法观察MSCs在体外增殖过程中细胞的全基因组DNA甲基化与羟甲基化的变化情况,为MSCs衰老研究提供表观遗传学调控依据。第一部分人骨髓中分离MSCs传代培养及生物学特性评估目的:本实验通过探索性研究,建立高效简便易操作的MSCs分离培养方法并评价其生物学特性。为MSCs在临床应用中的标准化分离制备提供一个方法参考和实验基础。方法:结合密度梯度离心法与细胞贴壁法并优化其操作步骤,以达到从骨髓中标准化地分离出MSCs并且可以体外培养的目标。通过流式细胞仪检测其表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CDl05、CD117,同时诱导细胞向成脂、成骨以及成软骨细胞分化,以评价此方法分离和培养所得的MSCs的质量。结果:(1)通过细胞密度梯度离心法使用Ficoll分离液成功分离单个核细胞,再结合细胞附壁法通过人MSCs完全培养基纯化出人骨髓MSCs,成功在体外传代培养。(2)通过成脂、成骨以及成软骨细胞的诱导分化培养基,成功对P3代细胞进行诱导分化,并通过特异性染色对分化效果进行了验证。(3)流式细胞仪检测MSCs表面标志CD29阳性率为(99.41%±0.15%)、CD44阳性率为(93.82%±3.37%)、CD73阳性率为(98.32%±1.25%)、CD90阳性率为(95.22%±0.35%)、CD105阳性率为(91.78%±1.80%),而CD34、CD45、CD117只有少量表达,分别(0.23%±0.06%)、(0.13%±0.04%)和(0.25%±0.05%)。结论:人骨髓MSCs可以通过采用Ficoll-Hypaqu分离液对人骨髓进行密度梯度离心提取单个核细胞后经过专属MSCs培养基贴壁筛选培养而获得。此方法提取的MSCs的满足国际细胞治疗协会提出的鉴定标准。第二部分建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测全基因组DNA中5-甲基脱氧胞苷(5mdC)与5-羟甲基脱氧胞苷(5hmdC)水平的方法目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测全基因组DNA中5-甲基脱氧胞苷(5mdC)与5-羟甲基脱氧胞苷(5hmdC)水平的方法,通过改良样本前处理方法与定量方式,使方法学更具可操作性,为观察不同代数的骨髓MSCs甲基化与去甲基化的水平提供技术基础。方法:通过离心柱法提取MSCs中的基因组DNA,并对其进行酶解反应,使DNA降解为单个脱氧核苷。建立UPLC-MS/MS检测5-甲基脱氧胞嘧啶核苷(5mdC)、5-羟甲基脱氧胞嘧啶核苷(5hmdC)和2’-脱氧鸟苷(dG)的方法。通过使用标准的双链DNA来配置标准定标曲线与质控品样本,对其检测方法进行方法学考察。结果:(1)使用QlAamp DNA Mini Kit QIAGEN试剂盒对骨髓生长融合率达80%-90%的25mL培养瓶(MSCs数量约1-2×10)提取DNA,可以获得5μg-10μgDNA。(2)采用Degradase buffer和DNA Degradase对1μg DNA样本进行酶解1小时,即可将DNA降解完全。(3)UPLC-MS/MS检测5-甲基脱氧胞嘧啶核苷(5mdC)、5-羟甲基脱氧胞嘧啶核苷(5hmdC)和2’-脱氧鸟苷(dG)的方法通过了方法学考察。对1μgDNA最低可以检出5.00×10的甲基化率和羟甲基化率。日内、日间精密度变异系数CV均≤10%。准确度均在98%-104%之间。线性相关系数大于0.995。室温放置2小时、自动进样器4小时、4℃冰箱放置7天和-20℃冰箱放置30天不影响检测结果。结论:本研究建立的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)基因组DNA甲基化与羟甲基化水平的检测方法具有良好的可操作性、准确度以及精密度,可以为分析骨髓MSCs传代过程甲基化与去甲基化的水平提

关键词：骨髓间充质干细胞 DNA甲基化衰老超高效液相色谱串联质谱

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马王黔江特大桥0#段托架设计与施工

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绿色环保建材 2017年第3期 58-59页

作者：何国东中铁科学研究院有限公司

以马王黔江特大桥为背景,介绍了高墩、大跨连续刚构0#段托架的设计、施工,对类似桥梁施工有一定的参考价值。

关键词：连续刚构段托架设计施工

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厄贝沙坦联合美托洛尔治疗慢性充血性心力衰竭的临床价值分析

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心血管病防治知识（学术版） 2020年第32期10卷 31-33页

作者：何国东周志红云南省楚雄州人民医院云南楚雄675000

目的探究对慢性充血性心衰患者施行厄贝沙坦联合美托洛尔治疗的效果。方法随机将2018年5月至2019年10月我院76例慢性充血性心衰患者分为对照组(38例,施行美托洛尔治疗)、观察组(38例,施行厄贝沙坦联合美托洛尔治疗)。对比两组总有效率... 详细信息

目的探究对慢性充血性心衰患者施行厄贝沙坦联合美托洛尔治疗的效果。方法随机将2018年5月至2019年10月我院76例慢性充血性心衰患者分为对照组(38例,施行美托洛尔治疗)、观察组(38例,施行厄贝沙坦联合美托洛尔治疗)。对比两组总有效率、心功能指标[左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)]、NT-ProBNP(血浆氮末端B型利钠肽原)、醛固酮水平及不良反应发生率。结果观察组总有效率(94.74%)高于对照组(78.95%)(P0.05)。结论对慢性充血性心衰患者施行厄贝沙坦联合美托洛尔治疗有助于增强疗效,促进心功能好转,且安全性较好。

关键词：慢性充血性心衰厄贝沙坦美托洛尔心功能

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应用超声波法对围岩松弛带的探测

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中国新技术新产品 2015年第11期 154-155页

作者：何国东核工业西南勘察设计研究院有限公司四川成都610000

本次是针对贵州省乌江构皮滩水电站的右岸3#导流洞围岩松弛带的探测,右岸导流洞长达约800m,开挖断面16×19m2,跨度达20m,高达25m,是洪水期间泻洪主要设施之一,是大坝安全是一个保证。因导流洞所处的地质结构较为复杂,在施工阶段出现多... 详细信息

本次是针对贵州省乌江构皮滩水电站的右岸3#导流洞围岩松弛带的探测,右岸导流洞长达约800m,开挖断面16×19m2,跨度达20m,高达25m,是洪水期间泻洪主要设施之一,是大坝安全是一个保证。因导流洞所处的地质结构较为复杂,在施工阶段出现多次塌方,经衬砌加固和灌浆处理后仍有部分地方出现塌方现象,不但直接造成巨大的经济损失,而且在工程进度上推延了工期,其原因为施工爆破造成的岩石松弛和灌浆效果的不理想。为此,本文对该导流洞用超声波法进行圈定岩石松弛带,并评价灌浆效果,旨在为工程质量提供详实依据。

关键词：超声波法围岩松弛带灌浆评价

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益智护脑方对东莨菪碱诱导小鼠记忆功能障碍模型的保护作用及机制研究

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中药材 2018年第8期41卷 2003-2006页

作者：杜耀民何池忠何国东林秋雄广东省人民医院/广东省医学科学院广东广州510080

目的:探讨益智护脑方对东莨菪碱致小鼠记忆功能障碍的保护作用及作用机制。方法:取SPF级昆明小鼠按体质量随机为正常对照组、模型组、牛磺酸阳性对照组及益智护脑方低、中、高剂量组,各组按设计剂量灌胃给药30 d后,制备东莨菪碱致小鼠... 详细信息

目的:探讨益智护脑方对东莨菪碱致小鼠记忆功能障碍的保护作用及作用机制。方法:取SPF级昆明小鼠按体质量随机为正常对照组、模型组、牛磺酸阳性对照组及益智护脑方低、中、高剂量组,各组按设计剂量灌胃给药30 d后,制备东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍模型,依次进行避暗试验、Morris水迷宫试验的训练及测试,测试结束后取脑组织用试剂盒检测AChE、SOD、GSH-Px活性及MDA含量;取海马组织采用酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-1β含量、Western blot检测NF-κB蛋白表达。结果:益智护脑方可延长小鼠在避暗试验中进入暗室的潜伏期,减少5 min内错误次数;缩短小鼠水迷宫试验中找到平台的潜伏期时间;降低脑组织AChE、MDA含量,升高脑组织SOD、GSH-Px含量;降低海马组织中的TNF-α、IL-1β含量及NF-κB蛋白表达。结论:益智护脑方能改善东莨菪碱诱导小鼠记忆功能障碍,其作用机制可能与抗氧化及调节脑内乙酰胆碱酯酶(AchE)活力水平,影响小鼠海马组织中NF-κB信号转导通路有关。

关键词：益智护脑方东莨菪碱抗氧化记忆功能障碍

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参松养心胶囊联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗老年冠心病心律失常的临床效果

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临床合理用药杂志 2021年第35期14卷 40-42页

作者：凤武云王金萍何国东楚雄彝族自治州人民医院老年病科云南省楚雄市675000

目的观察参松养心胶囊联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗老年冠心病心律失常的临床效果。方法选取2018年1月-2019年12月楚雄彝族自治州人民医院收治的老年冠心病心律失常患者102例,采用抽签法随机分为观察组和对照组,各51例。在常规治疗基础... 详细信息

目的观察参松养心胶囊联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗老年冠心病心律失常的临床效果。方法选取2018年1月-2019年12月楚雄彝族自治州人民医院收治的老年冠心病心律失常患者102例,采用抽签法随机分为观察组和对照组,各51例。在常规治疗基础上,对照组予琥珀酸美托洛尔缓释片治疗,观察组在对照组基础上加用参松养心胶囊治疗。比较2组治疗效果、治疗前后缺血相关指标(缺血总时间、缺血发生次数与缺血总负荷)、血脂(总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白)水平、异常心律(室性期前收缩、房室性期前收缩、交界性期前收缩及短阵心房颤动,异常心率出现次数越少证明治疗效果越好)表现及不良反应。结果治疗4周,观察组总有效率为90.20%,高于对照组的68.63%(χ^(2)=7.256,P=0.007);治疗4周后,2组缺血总时间、缺血发生次数与缺血总负荷等均较治疗前减少,总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平均较治疗前降低,高密度脂蛋白水平较治疗前升高,异常心律表现较治疗前明显改善,且观察组减少、降低、升高和改善幅度均大于对照组(P<0.05或P<0.01);观察组不良反应总发生率为5.88%,低于对照组的23.53%(χ^(2)=6.331,P=0.012)。结论参松养心胶囊联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗老年冠心病心律失常的效果值得肯定,患者各项指标与症状改善显著,且用药安全性高,值得临床推广应用。

关键词：冠心病心律失常参松养心胶囊琥珀酸美托洛尔缓释片临床效果

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佛山地基软土物理力学指标间的相关性研究

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地下空间与工程学报 2018年第S2期14卷 645-653,659页

作者：唐军平何国东付旭李茜中铁二院工程集团有限责任公司成都610031 中铁科学研究院有限公司成都610031 北华航天工业学院建筑工程系河北廊坊065000

基于佛山轨道交通南庄站的岩土工程勘察成果,采用数理统计分析方法对地基典型软土的物理力学指标变异性和相关性进行统计分析,揭示了佛山地区软土的工程特性,建立了各个指标之间的线性拟合关系式。结果表明:(1)佛山软土具有天然含水量... 详细信息

基于佛山轨道交通南庄站的岩土工程勘察成果,采用数理统计分析方法对地基典型软土的物理力学指标变异性和相关性进行统计分析,揭示了佛山地区软土的工程特性,建立了各个指标之间的线性拟合关系式。结果表明:(1)佛山软土具有天然含水量高、压缩性大、天然密度小、孔隙比较大和抗剪强度低的工程特性;(2)天然密度、土粒比重和饱和度的变异系数较小,在设计中可以将这三个物理指标看作常数,其它指标变异性较大;(3)天然含水量w和天然密度ρ这两种物理指标与其它指标之间具有较高的线性相关性,而固结指标和强度指标与其它指标间的线性相关性较低;(4)在塑性图上,佛山软土主要集中在低液限区,拟合曲线斜率为A线的一半,分布规律与我国沿海地区基本一致。研究成果为佛山地区土工参数的取值和工程设计提供了参考和依据。

关键词：软土物理力学指标工程特性变异性相关性

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瞬变电磁法在寻找地下水中的应用研究

瞬变电磁法在寻找地下水中的应用研究

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2014年中国地球科学联合学术年会——专题23：环境与...

作者：王本安王诗东何国东核工业西南勘察设计研究院有限公司检测中心成都理工大学

＜正＞随着人类社会的不断发展和人口的不断增长,水资源的需要量也不断增加,水资源的缺乏已制约了国民经济和社会的发展,因此寻找地下水也成了一个重点问题。传统的地球物理方法在寻找地下水中得到了广泛的应用,主要使用的方法包括电阻...

＜正＞随着人类社会的不断发展和人口的不断增长,水资源的需要量也不断增加,水资源的缺乏已制约了国民经济和社会的发展,因此寻找地下水也成了一个重点问题。传统的地球物理方法在寻找地下水中得到了广泛的应用,主要使用的方法包括电阻率法、渗透电场法、井中充电法,核物探方法等。本文采用瞬变电磁法大致圈定了工区内溶蚀裂隙带或断层破碎带分布范围,了解到测区内富水地段有利部位,推测了工区范围内的地下含水情况,为深水井的位置及深度提供物探依据。

关键词：

来源： cnki会议评论

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背崩雅鲁藏布大桥缆索吊设计与施工

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城市建筑 2017年第2期14卷 264-266页

作者：何国东黄廷方岳涛中铁科学研究院有限公司成都611731 中铁二局第五工程有限公司成都610091

以背崩雅鲁藏布大桥为背景,对采用重力式和锚索式地垄的大跨度缆索吊的设计、施工进行了介绍,对山区大跨度悬索桥采用缆索吊进行吊装施工有一定的借鉴意义.

关键词：悬索桥缆索吊重力式地垄锚索式地垄设计施工

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心脏康复治疗在老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者中的临床效果

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名医 2020年第6期 66-66页

作者：何国东楚雄州人民医院

目的:对老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者采用心脏康复治疗的效果进行观察。方法:选取2018年1月至2019年1月期间84例老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者,根据治疗措施的不同分为对照组(n=42,帕罗西汀片)与观察组(n=42,帕罗西汀片+心脏康复治... 详细信息

目的:对老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者采用心脏康复治疗的效果进行观察。方法:选取2018年1月至2019年1月期间84例老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者,根据治疗措施的不同分为对照组(n=42,帕罗西汀片)与观察组(n=42,帕罗西汀片+心脏康复治疗),观察组用帕罗西汀片联合心脏康复治疗,对比两组治疗效果。结果:治疗后,观察组SAS评分、SDS评分均低于对照组,差异有统计意义,P<0.05。结论:对老年心血管病伴焦虑抑郁情绪患者采用心脏康复治疗,对患者负性情绪有明显缓解效果,值得推广。

关键词：老年心血管病焦虑抑郁心脏康复治疗

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