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RNA干扰对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子基因表达的抑制作用

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中华实验外科杂志 2008年第3期25卷 310-312页

作者：李雯夏金堂汪谦伍兆锋毕熲傅新晖中山大学附属第一医院外科实验中心广州510080 广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆外科

目的观察特异性小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因表达的抑制作用。方法脂质体方法将siRNA转染肝癌细胞PLC、Hep3B。定量RT-PCR、Western blot检测MIF mRNA和蛋白、MAPK信号分子的表达。噻唑蓝（MTT）比色... 详细信息

目的观察特异性小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因表达的抑制作用。方法脂质体方法将siRNA转染肝癌细胞PLC、Hep3B。定量RT-PCR、Western blot检测MIF mRNA和蛋白、MAPK信号分子的表达。噻唑蓝（MTT）比色法、体外细胞侵袭实验检测细胞增殖和对重组基底膜（matrigel）穿透能力。结果100nmol／L的MIF siRNA使MIF mRNA表达下调81．3％和89．1％，蛋白水平降低69．50％、72．31％，与对照组比较其差异有统计学意义（P均〈0．01）。细胞增殖率下降16．79％和47．14％（P均〈0．05）。穿透matrigel的细胞数为51．00±11．27和18．56±4．72，与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。磷酸化MAPK下调。结论MIF siRNA有效抑制MIF表达及肝癌细胞增殖和迁移，可能部分通过抑制MAPK磷酸化起作用。

关键词：小干扰RNA 癌,肝细胞基因表达

肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体表达载体的构建

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第B6期28卷 29-31页

作者：王劭晟徐波夏金堂伍兆锋何绮微广州市第一人民医院急诊科广东广州5101802 广州市荔湾区人民医院广东广州510370

[目的]构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒载体。[方法]首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质... 详细信息

[目的]构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒载体。[方法]首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒:PCR法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况。[结果]成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。[结论]构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为研究TRAIL抗肿瘤细胞效应及临床应用提供先进的载体系统。

关键词：肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL) 腺相关病毒基因治疗

巨噬细胞移动抑制因子小干扰RNA对肝癌细胞表达血管内皮生长因子的抑制效应

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中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 979-982页

作者：夏金堂李瑜元汪谦伍兆锋赵杰王花李雯广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆外科 510180 广州医学院附属广州市第一人民医院消化内科 510180 中山大学附属第一医院外科实验中心

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法Western blot检测MIF和VEGF在肝癌和癌旁组织的表达情况；人工化学合成MIFsiRNA和对照siRNA，将其转染PLC、HepG2肝癌细胞... 详细信息

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法Western blot检测MIF和VEGF在肝癌和癌旁组织的表达情况；人工化学合成MIFsiRNA和对照siRNA，将其转染PLC、HepG2肝癌细胞株，定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测MIF和VEGFmRNA及其蛋白的表达。结果MIF、VEGFmRNA和蛋白在肝癌组织中高表达。MIFsiRNA（50、100nmol／L）转染肝癌细胞株后，PLC细胞MIF和VEGFmRNA水平分别下调（78．8±7．2）％、（90．4±2．9）％和（60．6±2．6）％、（79．8±1．2）％；HepG2细胞MIF和VEGFmRNA水平分别下调（74．3±8．9）％、（88．4±4．6）％和（65．6±4．6）％、（80．7±2．2）％。MIF蛋白分别下调（57．3±3．4）％、（78．7±1．2）％和（54．8±6．8）％、（77．9±2．3）％，并呈剂量依赖关系；伴随MIFmRNA和蛋白的表达下调VEGF蛋白分别下调（52．6±12．9）％、（87．4±2．3）％和（52．4±11．1）％、（68．5±2．8）％，亦呈剂量依赖关系，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），两干预组间的差异也有统计学意义（P〈0．05）。结论MIFsiRNA能特异性阻断PLC及HepG2细胞MIFmRNA和MIF蛋白的表达，并且同时有效下调VEGFmRNA及其蛋白的表达，MIF可能通过调控VEGF基因和蛋白的表达，参与肿瘤血管的生成和促进肿瘤细胞的转移。

关键词：肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子 RNA干扰血管内皮生长因子

小干扰RNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞p27表达的影响

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中华肝脏病杂志 2009年第2期17卷 102-106页

作者：夏金堂李雯伍兆锋赵杰王花李瑜元广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆外科 510180 广州医学院附属广州市第一人民医院消化内科 510180 中山大学附属第一医院外科实验中心广州

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和细胞周期调控因子p27在肝细胞癌中表达的相互关系，探讨小干扰RNA（siRNA）沉默MIF基因对肝癌细胞p27表达的影响。方法免疫组织化学法和荧光定量PCR法检测MIF、p27的蛋白和mRNA在肝癌及其癌旁组... 详细信息

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和细胞周期调控因子p27在肝细胞癌中表达的相互关系，探讨小干扰RNA（siRNA）沉默MIF基因对肝癌细胞p27表达的影响。方法免疫组织化学法和荧光定量PCR法检测MIF、p27的蛋白和mRNA在肝癌及其癌旁组织中的表达情况。化学合成MIF siRNA和对照siRNA，脂质体法转染肝癌细胞PLC和Hep3B，荧光定量PCR法检测MIF和p27 mRNA在实验组及对照组中的表达情况。根据不同资料分别采用x。检验、Logistic回归分析或单因素方差分析。结果MIF蛋白及其mRNA在肝癌组织中过表达，在癌旁组织中低表达；p27蛋白及其mRNA在癌组织中低表达，在癌旁组织中高表达。Logistic回归分析提示MIF为肝癌发生的危险因素，p27为保护因素。MIF mRNA在肝癌细胞株中过表达（F=61．036，P〈0．01），p27 mRNA在正常肝细胞L02中高表达（F=529．853，P〈0．01）。经MIFsiRNA转染后，MIF mRNA在PLC及Hep3B中的表达水平降低，并且呈剂量依赖关系（F值分别为320．1和201．2，尸值均〈0．01）；p27 mRNA伴随MIFmRNA的降低而增加（F值分别为419．4和459．9，P值均〈0．01）。结论MIF在肝细胞癌中过表达，MIF siRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中的表达；MIF可能参与了p27基因表达的调控。

关键词：癌,肝细胞 RNA干扰周期素依赖激酶抑制剂p27 巨噬细胞移动抑制因子

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中华医学杂志 2008年第26期88卷 1846-1850页

作者：夏金堂徐波王劭晟赖越元伍兆锋李书华李雯广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆外科 510180 中山大学附属第一医院普通外科实验室

目的探讨携带可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）基因的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，以及采用超声辐照联合微泡造影剂介导rAAV-sTRAIL转染肝癌细胞的有效性。方法单纯重组腺相关病毒r... 详细信息

目的探讨携带可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）基因的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，以及采用超声辐照联合微泡造影剂介导rAAV-sTRAIL转染肝癌细胞的有效性。方法单纯重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染肝癌细胞株HepG2，以及利用超声辐照联合微泡造影剂介导重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染HepG2细胞，分别以RT-PCR方法和Westen印迹法检测细胞内sTRAIL基因mRNA及蛋白表达量，噻唑蓝法检测细胞的增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL可有效转染HepG2细胞，sTRAIL mRNA表达水平在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可抑制HepG2细胞增殖，其抑制率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可诱导HepG2细胞凋亡，其凋亡率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL在肝癌细胞中能有效表达，sTRAIL基因对肝癌细胞有明显的抑制增殖和促凋亡作用；联合超声微泡造影剂及低强度超声，可有效提高腺相关病毒载体在肝癌细胞中的感染率，从而增强sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。

关键词：肿瘤坏死因子超声微泡造影剂肝细胞癌

携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体重组腺相关病毒的构建及鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第10期11卷 1966-1968,1971页

作者：夏金堂徐波李雯王劭晟赖越元伍兆锋李书华广州市第一人民医院普外科广东省广州市510180 中山大学附属第一医院普通外科实验室广东省广州市510080

目的:构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺相关病毒(recombined adeo-associated virus,rAAV)载体。方法:实验于2005-09/2006-04在中山大学附属第一医院普通外科实验室完成。首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒;聚合酶链反应法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况。结果:成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。结论:构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为组织工程相关细胞转基因构建及临床应用提供先进的载体系统。

关键词：肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体腺相关病毒基因治疗

胆囊结石伴肝硬化给予腹腔镜手术治疗的效果分析

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深圳中西医结合杂志 2019年第2期29卷 163-164页

作者：伍兆锋赖越元朱光辉林帆古维立广州市第一人民医院广东广州510180

目的:探讨腹腔镜手术对胆囊结石伴肝硬化的治疗效果。方法:抽取广州市第一人民医院2015年8月至2017年8月收治的90例胆囊结石伴肝硬化患者为研究对象,根据治疗方式分为对照组和观察组。对照组采用开腹式手术,观察组给予腹腔镜手术,比较... 详细信息

目的:探讨腹腔镜手术对胆囊结石伴肝硬化的治疗效果。方法:抽取广州市第一人民医院2015年8月至2017年8月收治的90例胆囊结石伴肝硬化患者为研究对象,根据治疗方式分为对照组和观察组。对照组采用开腹式手术,观察组给予腹腔镜手术,比较两组临床效果。结果:对照组并发症发生率为26.7%,明显高于观察组的8.9%,差异具有统计学意义(P 0.05),观察组术后对应指标明显优于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:给予胆囊结石伴肝硬化患者腹腔镜手术,安全性高,并发症少,对患者肝功能影响小。

关键词：胆囊结石肝硬化腹腔镜手术肝功能

腹腔镜精准肝切除治疗原发性肝癌的临床效果评价

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泰山医学院学报 2018年第12期39卷 1412-1413页

作者：伍兆锋赖越元朱光辉林帆古维立广州市第一人民医院肝胆胰脾外科广东广州510180

目的评价腹腔镜精准肝切除治疗原发性肝癌的手术效果。方法以原发性肝癌患者90例为研究对象,按照随机数字表法均等分为研究组和对照组,每组45例,研究组实施腹腔镜精准肝切除术,对照组实施常规肝切除术,比较两组患者的手术指标(手术时间... 详细信息

目的评价腹腔镜精准肝切除治疗原发性肝癌的手术效果。方法以原发性肝癌患者90例为研究对象,按照随机数字表法均等分为研究组和对照组,每组45例,研究组实施腹腔镜精准肝切除术,对照组实施常规肝切除术,比较两组患者的手术指标(手术时间、术中出血量及住院时间)、并发症发生率、1年肿瘤复发率。结果研究组手术时间及住院时间均短于对照组,术中出血量少于对照组,并发症发生率(4. 4%)及肿瘤复发率(2. 2%)低于对照组(22. 2%、17. 8%),上述差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论腹腔镜精准肝切除术治疗原发性肝癌,可减少术中出血量,缩短住院时间,降低并发症发生率及肿瘤复发率。

关键词：原发性肝癌精准肝切除术常规肝切除术肿瘤复发率

siRNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

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中华肝脏病杂志 2008年第8期16卷 622-623页

作者：夏金堂伍兆锋李雯傅新晖毕熲陈连周李瑜元广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆外科 510180 广州医学院附属广州市第一人民医院消化内科 510180 中山大学附属第一医院外科实验中心

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）是最早发现的炎症因子之一。近年来的研究结果显示MIF在多种肿瘤细胞中过表达，参与肿瘤的发生及进展。MIF蛋白和mRNA于肝硬化组织和肝细胞癌（HCC）癌细胞的胞质中过表达，重组的MIF可促进肝癌细胞分泌血... 详细信息

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）是最早发现的炎症因子之一。近年来的研究结果显示MIF在多种肿瘤细胞中过表达，参与肿瘤的发生及进展。MIF蛋白和mRNA于肝硬化组织和肝细胞癌（HCC）癌细胞的胞质中过表达，重组的MIF可促进肝癌细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）。本研究比较了10对HCC的癌及癌旁组织中MIF和VEGF的蛋白质和mRNA表达差异，进一步应用化学合成特异性的小干扰RNA，阻断MIF基因在肝癌细胞株PLC、HEN32细胞表达并探讨MIF对VEGF表达的影响。

关键词：癌,肝细胞 RNA干扰巨噬细胞移动抑制因子血管内皮生长因子