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细胞致死性膨胀毒素损伤宿主防御机制研究进展

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微生物学报 2023年第4期63卷 1404-1410页

作者：宗萱李晓飞任方哲焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009

细胞致死性膨胀毒素(cytolethal distending toxin,CDT)属于AB_(2)毒素,由多种革兰氏阴性菌产生。CDT是第一种被描述的细菌基因毒素,编码3种多肽:CDTA、CDTB和CDTC。CdtB是活性部分,有损伤多种细胞类型的能力。CDT具有一种新的分子作用... 详细信息

细胞致死性膨胀毒素(cytolethal distending toxin,CDT)属于AB_(2)毒素,由多种革兰氏阴性菌产生。CDT是第一种被描述的细菌基因毒素,编码3种多肽:CDTA、CDTB和CDTC。CdtB是活性部分,有损伤多种细胞类型的能力。CDT具有一种新的分子作用模式,会干扰真核细胞周期的进展,从而导致G2/M停滞和细胞凋亡,该作用机制针对细胞,而且现阶段对于CDT的研究更多也是细胞层面,但是CDT作为毒力因子最终作用是损伤宿主造成疾病。但目前对CDT与宿主相互作用的分子机制了解尚不清晰。本文对细胞致死性膨胀毒素作为毒力因子从损伤上皮屏障、适应性免疫以及促进炎症反应三方面来综合阐述其对宿主防御机制途径的损伤,以期了解其致病机制以及为其临床治疗提供理论依据和新思路。

关键词：细胞致死性膨胀毒素细胞膨胀毒力因子损伤机制

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鞭毛介导的空肠弯曲菌氧应激机制研究进展

微生物学通报 2022年第5期49卷 1846-1852页

作者：张颖李晓飞任方哲焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围流行的食源性人兽共患病原菌,是革兰氏阴性微需氧菌。其对氧气、温度、pH和胆汁酸盐等环境条件极其敏感,在环境传播和宿主定殖过程中会遭受许多不利条件,包括致命的活性氧自由基(reactive ox... 详细信息

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围流行的食源性人兽共患病原菌,是革兰氏阴性微需氧菌。其对氧气、温度、pH和胆汁酸盐等环境条件极其敏感,在环境传播和宿主定殖过程中会遭受许多不利条件,包括致命的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),因此,抵抗活性氧自由基是空肠弯曲菌进化的一种重要策略。空肠弯曲菌为抵抗氧应激进化出了多种响应机制,其中,鞭毛及其介导的运动力也参与氧应激。本文对国内外有关空肠弯曲菌氧应激研究进展及鞭毛介导的氧应激机制进行综合阐述,以期为进一步完善空肠弯曲菌氧应激调控系统奠定基础,并为弯曲菌源头防控提供思路。

关键词：空肠弯曲菌氧应激机制鞭毛

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牛奶中弯曲菌流行现状与防控研究进展

食品安全质量检测学报 2022年第21期13卷 6870-6875页

作者：任方哲胡娟娟唐苑悦黄金林扬州大学生物科学与技术学院扬州225000 江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225000 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室扬州225000

弯曲菌是世界范围内普遍流行的食源性病原菌,牛奶营养成分丰富且作为日常膳食的主要成分,是弯曲菌重要的传播媒介。弯曲菌感染人后主要引起以腹泻为主的急性胃肠炎症状,同时可伴发包括免疫损伤性疾病在内的严重并发症;近年来因饮用牛奶... 详细信息

弯曲菌是世界范围内普遍流行的食源性病原菌,牛奶营养成分丰富且作为日常膳食的主要成分,是弯曲菌重要的传播媒介。弯曲菌感染人后主要引起以腹泻为主的急性胃肠炎症状,同时可伴发包括免疫损伤性疾病在内的严重并发症;近年来因饮用牛奶导致的弯曲菌感染病例呈逐年上升趋势,给公共卫生和食品安全带来了巨大威胁。本文结合国内外关于牛奶中弯曲菌的研究报道,对牛奶源弯曲菌的污染情况及流行分布特征进行了综述,分析了牛奶中弯曲菌的主要污染途径,同时针对牛奶环境中弯曲菌的污染特点,对该菌检测方法以及防控手段和策略进行了介绍分析,并对未来研究方向进行了展望,以期为降低牛奶源弯曲菌感染风险,保障食品安全和消费者健康提供借鉴。

关键词：弯曲菌牛奶流行分布检测与防控

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厨房内弯曲菌分子流行病学研究进展

食品安全质量检测学报 2023年第4期14卷 206-212页

作者：赖宏刚唐苑悦任方哲焦新安黄金林扬州大学旅游烹饪学院扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病重点实验室扬州225009 江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室扬州225009

微生物性因素已经成为世界各国食源性疾病暴发的主要原因。弯曲菌在厨房加工阶段的流行传播及溯源分析对疾病的预防控制至关重要。目前,我国对厨房内加工过程中弯曲菌的流行性监测很少,特别是在新兴的中央厨房等集中加工和配送的模式下... 详细信息

微生物性因素已经成为世界各国食源性疾病暴发的主要原因。弯曲菌在厨房加工阶段的流行传播及溯源分析对疾病的预防控制至关重要。目前,我国对厨房内加工过程中弯曲菌的流行性监测很少,特别是在新兴的中央厨房等集中加工和配送的模式下,相关的研究都有待于开展。因此,应更多地致力于厨房内禽肉加工过程中弯曲菌的流行监测研究,从而建立起从农场到餐桌完整的弯曲菌监测体系。本文以弯曲菌为例,阐述了其在国内外厨房中的流行状况,进一步明确了弯曲菌在厨房内的主要传播途径为交叉污染;详细综述了用于弯曲菌交叉传播的主要溯源技术如多位点序列分析,脉冲场凝胶电泳分型和全基因组测序分型,为建立起完善的弯曲菌风险评估体系及预防控制奠定基础和提供参考。

关键词：弯曲菌厨房流行情况交叉污染溯源技术

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空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1294-1298页

作者：任方哲王楠商宇伟焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

目的原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间... 详细信息

目的原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-flhF和pGEX-6p-1-flhF,并融合表达rHis-FlhF和rGST-FlhF蛋白。筛选获得2株稳定分泌抗FlhF的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2C12和7A9,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1×109和2×107,Western blot法分析表明2株mAb均能与纯化蛋白rHis-FlhF有良好的反应性,Dot-ELISA试验表明2株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应。结论成功制备了具有较高特异性的空肠弯曲菌FlhF蛋白的mAb。

关键词： FlhF蛋白空肠弯曲菌单克隆抗体

空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素单克隆抗体的制备与鉴定

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微生物学报 2014年第8期54卷 950-955页

作者：陆磊商宇伟任方哲王楠焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

【目的】原核表达空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素B蛋白(CdtB),制备其单克隆抗体(mAb),并研究mAb抗毒性作用。【方法】扩增空肠弯曲菌cdtB基因并将其构建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,以原核表达的GST-CdtB蛋白为免疫原,应用杂交瘤技... 详细信息

【目的】原核表达空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素B蛋白(CdtB),制备其单克隆抗体(mAb),并研究mAb抗毒性作用。【方法】扩增空肠弯曲菌cdtB基因并将其构建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,以原核表达的GST-CdtB蛋白为免疫原,应用杂交瘤技术进行细胞融合;采用间接ELISA方法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性,并以CaCo-2和HD-11细胞为模型,鉴定mAb抗毒性能力。【结果】成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-cdtB和pGEX-6p-1-cdtB,并融合表达rHis-CdtB和rGST-CdtB蛋白。获得5株稳定分泌CdtB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F3,1F5,2E4,2E11,2F2。抗体Ig类和亚类检测显示2E11 Ig亚类为IgG2b,其他4株均为IgG1。抗体效价高达1:(1×108)。Dot-ELISA试验表明5株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应,与非空肠弯曲菌呈阴性反应;Western blot法分析表明5株mAb均能与纯化蛋白rGST-CdtB有良好的反应性。基于CaCo-2细胞的黏附和侵袭实验表明mAb能显著降低细菌的黏附和侵袭能力(P<0.01)。【结论】成功制备了针对空肠弯曲菌CdtB蛋白的mAb。为进一步研究空肠弯曲菌致病机制,以及为研制治疗性类药物奠定了基础。

关键词： CdtB蛋白空肠弯曲菌单克隆抗体

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空肠弯曲菌鞭毛研究进展

中国人兽共患病学报 2013年第8期29卷 812-816页

作者：任方哲王楠商宇伟焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

空肠弯曲菌是世界范围内广泛流行的一种食源性病原菌,鞭毛是其主要的毒力因子,在其致病过程中发挥重要作用。本文对空肠弯曲菌鞭毛结构,合成机制及其作用进行综述,以期为了解空肠弯曲菌鞭毛的基本信息及其致病机理提供参考。

关键词：空肠弯曲菌鞭毛毒力

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空肠弯曲菌Ⅵ型分泌系统研究进展

微生物学通报 2021年第3期48卷 932-937页

作者：汪闻妍任方哲李凤鸣臧筱琦焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009

Ⅵ型分泌系统(TypeⅥSecretion System,T6SS)是一种倒置于细胞膜上的类噬菌体样结构,能够输送效应蛋白并在定殖和生态位建立中发挥作用。近年来,在空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)中发现了T6SS同源基因且能够表达组装成结构完整的T6SS... 详细信息

Ⅵ型分泌系统(TypeⅥSecretion System,T6SS)是一种倒置于细胞膜上的类噬菌体样结构,能够输送效应蛋白并在定殖和生态位建立中发挥作用。近年来,在空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)中发现了T6SS同源基因且能够表达组装成结构完整的T6SS,但T6SS对空肠弯曲菌的毒力影响尚不清楚。本文就空肠弯曲菌T6SS结构组成、分布特征及效应功能等方面的研究进展进行综述,以期为进一步解析空肠弯曲菌毒力因子的调控机制提供新思路。

关键词：空肠弯曲菌 Ⅵ型分泌系统毒力

应用GST pull-down鉴定空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlhF和FlhG的相互作用

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2015年第2期36卷 1-4,13页

作者：王楠任方哲宋召军杨文彬焦新安黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

通过构建原核表达载体pCold I-flhG,并在大肠埃希菌(***)BL21中诱导表达带His标签的FlhG和带GST标签的FlhF融合蛋白,应用GST pull-down技术鉴定FlhF和FlhG在体外的结合作用。结果表明:成功构建重组质粒pCold I-flhG,诱导表达获得可溶性... 详细信息

通过构建原核表达载体pCold I-flhG,并在大肠埃希菌(***)BL21中诱导表达带His标签的FlhG和带GST标签的FlhF融合蛋白,应用GST pull-down技术鉴定FlhF和FlhG在体外的结合作用。结果表明:成功构建重组质粒pCold I-flhG,诱导表达获得可溶性的rHis-FlhG和rGST-FlhF蛋白,GST pull-down试验证实FlhF和FlhG之间存在特异性的相互作用,为空肠弯曲菌鞭毛的生物合成以及致病机制研究奠定基础。

关键词： GST pull-down试验空肠弯曲菌鞭毛相关蛋白蛋白间相互作用