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SIRT1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响

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重庆医科大学学报 2013年第5期38卷 474-477页

作者：陶颖陈可宋春丽任吉华陈娟重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨慢病毒介导沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因的shRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计、合成2对针对SIRT1基因shRNA的寡核苷酸序列,与pLentilox3.7-GFP载体连接产生重组慢病毒质粒ps... 详细信息

目的:探讨慢病毒介导沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因的shRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计、合成2对针对SIRT1基因shRNA的寡核苷酸序列,与pLentilox3.7-GFP载体连接产生重组慢病毒质粒pshSIRT1-1、pshSIRT1-2,同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照pshCont。将表达shRNA的载体plentilox3.7与pLP1、pLP2和pLP/VSVG 3种质粒共转染293FT细胞,包装产生慢病毒并测定病毒滴度。将慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7,行real time-PCR和Western blot验证SIRT1基因的沉默效果,台盼蓝排斥实验和流式细胞仪分别检测其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。结果:成功构建靶向SIRT1基因shRNA慢病毒载体并获得了相应的慢病毒。2个靶向SIRT1的shRNA均能有效抑制SIRT1基因的表达(P=0.000 2),并使MCF-7细胞增殖明显减慢,凋亡明显增加(P=0.006 0)。结论:靶向SIRT1基因RNA干扰能显著抑制MCF-7细胞的生长并促进其凋亡。

关键词：慢病毒沉默信息调节因子1(SIRT1) 乳腺癌细胞 RNA干扰

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电刷镀的设备、镀液配方及应用

电镀与涂饰 2017年第12期36卷 632-642页

作者：王宗雄鲍新华任吉华宁波市电镀行业协会浙江宁波315199 淮北市钰涛工贸有限公司安嶶淮北235000

描述了电刷镀所需设备,给出了常用的电净、活化、镀镍、镀铜、镀硬铬以及镀镍-铬、镍-钴、镍-铁合金的溶液配方,指出了电刷镀过程中的注意事项,介绍了电刷镀在铜、铝排局部镀锡以及修补电容器导电接头电镀锡层中的应用。

关键词：电刷镀镀笔镀液配方金属合金前处理

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热休克蛋白B1抑制HBV复制的研究

第三军医大学学报 2016年第23期38卷 2492-2498页

作者：程胜桃任吉华刘波陈娟重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法采用Western blot检测正常肝细胞系(Hep RG)和HBV稳定复制细胞系(Hep AD38和Hep G2.2.15)中HSPB1的蛋白水平。在HBV稳定复制细胞系(Hep AD38和Hep G2.2.15)中转染p CMV6-HSPB1质粒及对照质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对HBV复制中间体表达的影响;q RT-PCR检测HSPB1过表达对HBV3.5 kb m RNA表达的影响;ELISA检测HSPB1过表达对HBV s抗原(HBs Ag)和e抗原(HBe Ag)分泌的影响。在肝癌细胞系Huh-7中共转染p CH9/3091和p CMV6-HSPB1质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对瞬时转染的HBV复制中间体表达的影响。结果 HSBP1在Hep AD38和Hep G2.2.15中的表达明显低于Hep RG。HSPB1在Hep AD38和Hep G2.2.15细胞中成功过表达,在过表达HSPB1的Hep AD38和Hep G2.2.15细胞中HBV复制中间体水平以及3.5 kb m RNA水平均降低,细胞培养上清中HBs Ag和HBe Ag的分泌水平也降低。HSPB1在转染p CH9/3091的Huh-7细胞中成功过表达,HSPB1过表达抑制了瞬时表达的HBV的复制水平。结论 HSPB1可以抑制HBV复制。

关键词：乙型肝炎病毒热休克蛋白B1 病毒复制

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雌三醇对乙型肝炎病毒转录和复制水平的影响

中国病理生理杂志 2020年第7期36卷 1281-1286页

作者：姚方龙任放徐红艳姜慧任吉华重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:研究雌三醇对乙型肝炎病毒(HBV)转录和复制水平的影响。方法:采用不同浓度(从640μmol/L到5μmol/L倍比稀释)的雌三醇作用于体外培养的HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞,MTS法检测雌三醇的细胞毒性。用10、20和40μmol/L雌三醇处理HepG2... 详细信息

目的:研究雌三醇对乙型肝炎病毒(HBV)转录和复制水平的影响。方法:采用不同浓度(从640μmol/L到5μmol/L倍比稀释)的雌三醇作用于体外培养的HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞,MTS法检测雌三醇的细胞毒性。用10、20和40μmol/L雌三醇处理HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞,以恩替卡韦(25 nmol/L)作为阳性对照,6 d后采用RT-qPCR法检测细胞中HBV DNA和RNA水平,ELISA法检测上清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。对雄性HBV转基因小鼠腹腔注射雌三醇(5 mg/kg),以恩替卡韦(0.02 mg/kg)作为阳性对照,28 d后取小鼠血清和肝脏,采用ELISA法检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、HBsAg和HBeAg水平,RT-qPCR法检测血清和肝脏中HBV DNA水平及肝脏中HBV RNA水平。结果:与对照组相比,10、20和40μmol/L雌三醇可以显著降低HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞分泌的HBsAg和HBeAg水平及细胞中HBV DNA和RNA水平(P<0.05)。此外,雌三醇也可以显著降低HBV转基因小鼠血清中HBsAg、HBeAg和HBV DNA水平,以及肝组织中HBV DNA和RNA水平(P<0.05)。结论:在HepG2.2.15细胞、HepG2-NTCP细胞和HBV转基因小鼠模型中雌三醇均具有较强的抑制HBV转录和复制水平的作用。

关键词：雌三醇乙型肝炎病毒转录复制

SIRT2沉默对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响

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第三军医大学学报 2013年第24期35卷 2634-2638页

作者：宋春丽任吉华冉龙宽李宛蔚陈娟重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子2(silent information regulator2,SIRT2)基因沉默对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法 Western blot分析SIRT2在多个肝癌细胞系和永生化肝细胞中的表达,通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉... 详细信息

目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子2(silent information regulator2,SIRT2)基因沉默对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法 Western blot分析SIRT2在多个肝癌细胞系和永生化肝细胞中的表达,通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT2的表达,并通过Real-time PCR和Western blot验证SIRT2基因的沉默效果。细胞迁移及侵袭实验检测SIRT2基因沉默对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,Western blot检测上皮细胞间充质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)指标蛋白(E-cadherin、α-catenin、α-SMA、N-cadherin)的表达。结果 SIRT2在多个肝癌细胞系中蛋白表达水平明显上调;慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT2的表达水平(P<0.05)。SIRT2基因沉默能抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),并使上皮属性蛋白E-cadherin、α-catenin表达水平升高,使间质属性蛋白α-SMA、N-cadherin表达水平降低。结论 SIRT2基因沉默可以通过抑制肝癌细胞上皮细胞间充质转化从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

关键词： SIRT2 肝癌迁移侵袭

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“四大支柱”的德育内涵

教育艺术 2002年第7期 11-12页

作者：任吉华

由雅克·德洛尔任主席的国际21世纪教育委员会向联合国教科文组织提交的报告-是一部最新、最重要的教育经典文献.

关键词：学知学习能力创新能力合作精神德育内涵

润物细无声——对“赏识”与“自尊”的一点思考

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教育艺术 2000年第11期 5-6页

作者：任吉华

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中国外语教学面临的机遇与挑战

基础教育外语教学研究 2004年第2期 55-56页

作者：任吉华 BanjingMiddleSchoolRugaoCountyJiangsuProvince

Some events such as Beijing's successful bid for the 2008 Olympic Games and China's entry to WTO have plunged the whole nation into great excitement and also brought about their ideal thinking. China is developing in a particular period with the combination of agriculture, industry and information technology. “Knowledge economy”,

关键词：中国外语教学英语教学高校

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插入角钢锚固件计算方法的探讨

四川建筑 2017年第3期37卷 194-196页

作者：任吉华贾素红潍坊五洲鼎益铁塔有限公司山东安丘262100 四川电力设计咨询有限责任公司四川成都610000

文章通过对插入角钢混凝土基础抗拔试验结果的分析研究以及工程实际应用中发现的问题,指出现有DL/T 5154-2012《架空输电线路杆塔结构设计技术规定》中插入角钢锚固件的计算方法存在的问题,进而提出一种更合理的锚固计算方法。

关键词：插入角钢锚固件计算方法