检索结果-南通市图书馆

作者：任伟绮广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:利用纸材料易获得、价格低廉、一次性使用和简便的特点,初步建立一种人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)DNA纸基快速提取方法,结合重组聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)和电化学发光(Electrochemiluminescence,ECL)检测技术,实现临床宫颈脱落细胞样本中HPV DNA快速、灵敏、特异的检测。方法:1.以含HPV 16型基因片段的质粒为对象,初步建立一种HPV DNA纸基快速提取方法,并与常规煮沸法进行比较。对6种不同纸材料HPV DNA的提取效率和扩增效果进行比较,选择一种最适合HPV DNA提取和扩增的纸材料;研究不同纸片数量、提取时间对核酸提取检测的影响;探讨HPV DNA纸基快速提取方法的灵敏度和重复性。2.设计不同核酸结合区面积的浸蜡试纸条,提取HPV 16型阳性质粒DNA,结合实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR),比较纸基法与煮沸法提取的HPV DNA的扩增效果,选择最适合扩增的核酸结合区面积;研究不同样本添加量对核酸扩增结果的影响;用浸蜡试纸条对临床宫颈脱落细胞样本进行HPV DNA提取,初步分析纸基法临床样本核酸提取检测的准确性和适用能力。3.以含HPV 16型基因的质粒为对象,进行RPA-ECL检测方法研究。设计RPA引物,验证试纸条提取的HPV DNA进行RPA的可行性。进行三联吡啶钌标记引物的方法研究,用试纸条-RPA-ECL方法检测临床HPV宫颈脱落细胞样本,探讨试纸条-RPA-ECL方法的特异性和重复性,分析该方法临床应用的准确性和适用能力。结果:1.1张直径为6 mm的定性滤纸圆片在结合时间、洗涤时间和洗脱时间均为10 s的条件下,可实现HPV 16型阳性质粒DNA的提取,经过实时荧光定量PCR扩增得到与常规煮沸法相同的结果。HPV DNA纸基快速提取-qPCR方法的检出限为8×102 copies/mL,纸基法提取4×103 copies/mL 和 5×105 copies/mL HPV 16 阳性质粒的相对标准偏差分别为1.15%和1.38%,提示该方法有良好的灵敏度和重复性。2.用1张核酸结合区面积为2 mm×10 mm的浸蜡定性滤纸条对临床宫颈脱落细胞样本进行HPV DNA提取,经过实时荧光定量PCR扩增,18例HPV临床样本中13例高危型HPV 阳性样本均能成功检出,与常规煮沸法结果一致,表明HPV DNA纸基快速提取方法有临床应用潜力,并且每个样本提取时间<1 min。3.酯化钌与氨基修饰引物摩尔比为20:1时,三联吡啶钌标记引物标记率较高,标记率为87.21%,钌标引物稀释1000倍后电化学发光峰面积为197432,足以满足后续电化学发光检测的需要。4.试纸条-RPA-ECL方法检出限为50 copies/mmL,比qPCR的灵敏度高16倍;5×102 copies/mL和5×105copies/mL的HPV 16阳性质粒ECL相对标准偏差分别为1.82%和2.28%,有较好的特异性、灵敏度和重复性。试纸条-RPA-ECL方法对临床HPV宫颈脱落细胞样本检测分析,HPV 16型阳性样本的电化学发光信号强度与阴性样本和其他型阳性样本有显著差异,与qPCR结果一致,说明试纸条-RPA-ECL方法适用于临床宫颈脱落细胞样本HPV检测,每个样本从核酸提取到得到扩增结果所需时间<1 h。结论:利用试纸条进行宫颈脱落细胞样本HPV DNA提取,将DNA模板直接洗脱到扩增反应液中,省略了传统核酸提取过程中加热、离心和移液等步骤,简化了操作过程、减少了交叉污染。RPA-ECL核酸检测方法具有检测快速、灵敏、特异、操作简单等优点。因此,本研究建立的HPV DNA纸基快速提取方法,结合重组聚合酶扩增和纸基电化学发光检测技术,有望为病原体即时检测(point-of-care testing,POCT)技术研发提供实验依据。

关键词：人乳头瘤病毒纸基核酸提取重组酶聚合酶扩增电化学发光

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基于试纸条核酸提取和重组聚合酶扩增技术的HPV 16型DNA纸基电化学发光快速检测方法

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中国实验诊断学 2023年第9期27卷 1009-1015页

作者：陈钰任伟绮刘仲明王捷中国人民解放军南部战区总医院、基础医学实验室广东广州510010 广东省第二人民医院检验医学部广东广州510317

目的建立一种人乳头瘤病毒(HPV)高危16亚型快速、灵敏、特异的检测方法。方法采用前期构建的试纸条法提取样本HPV DNA,并以其为模板,使用电化学发光试剂(酯化钌)标记上游引物,生物素标记下游引物,进行重组聚合酶恒温扩增,通过亲和素化... 详细信息

目的建立一种人乳头瘤病毒(HPV)高危16亚型快速、灵敏、特异的检测方法。方法采用前期构建的试纸条法提取样本HPV DNA,并以其为模板,使用电化学发光试剂(酯化钌)标记上游引物,生物素标记下游引物,进行重组聚合酶恒温扩增,通过亲和素化的磁微球将生物素标记的扩增产物,在磁场的作用下富集,通过纸基电极-电化学发光检测技术,获得有酯化钌标记的待测物的浓度信息。结果酯化钌与上游引物以20∶1的摩尔比可以获得更高的标记效率和发光强度,该法最低检出限为50copies/mL,比实时荧光PCR的灵敏度高16倍;批内检测相对标准偏差低于5%,单个样本从核酸提取到获得扩增结果所需时间小于1h,具有较好的特异性、灵敏度和重复性。结论该法检测快速、灵敏、特异、操作简单,具有一定的临床应用价值。

关键词：人乳头瘤病毒纸基核酸提取重组聚合酶扩增电化学发光

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HPV DNA纸基快速提取方法的建立与初步评价

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第三军医大学学报 2021年第19期43卷 1925-1931页

作者：任伟绮陈钰刘仲明王捷广州中医药大学研究生院广州510006 中国人民解放军南部战区总医院基础医学实验室广州510010

目的建立一种简便快速的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA纸基提取方法并对其进行初步评价。方法以含HPV 16型基因片段的质粒为对象,结合紫外分光光度法和实时荧光定量PCR检测,对6种不同的纸材料进行选择,最终设计成方便拿取... 详细信息

目的建立一种简便快速的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA纸基提取方法并对其进行初步评价。方法以含HPV 16型基因片段的质粒为对象,结合紫外分光光度法和实时荧光定量PCR检测,对6种不同的纸材料进行选择,最终设计成方便拿取的浸蜡试纸条,对18例临床宫颈脱落细胞样本(阳性样本13例,阴性样本5例)进行HPV DNA提取检测,与常规煮沸法进行比较。结果1张核酸结合区面积为2 mm×10 mm的浸蜡定性滤纸条所提取的临床宫颈脱落细胞样本中的HPV DNA,经实时荧光定量PCR扩增,18例临床宫颈脱落细胞样本中的13例高危型HPV阳性样本均能成功检出,与常规煮沸法结果一致。每个样本提取时间<1 min,检出限为8×10^(2) copies/mL,相对标准偏差为1.15%。结论建立的HPV DNA纸基快速提取方法无需移液、加热和离心等操作,洗脱液可直接作为PCR扩增反应的模板,极大简化了临床宫颈脱落细胞样本中HPV DNA的提取步骤。

关键词：核酸提取纸基人乳头瘤病毒

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传染病病原体生物传感即时检测技术与设备综述

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医疗卫生装备 2020年第7期41卷 93-98页

作者：任伟绮陈钰刘仲明王捷南部战区总医院基础医学实验室广州510010

回顾了基于光学、电化学、磁学的生物传感技术与设备在传染病病原体即时检测(point-of-care testing,POCT)中的研究进展,总结了3种检测方法在POCT应用中的优劣。分析了生物传感POCT技术与设备在传染病病原体检测中面临的问题,指出了传... 详细信息

回顾了基于光学、电化学、磁学的生物传感技术与设备在传染病病原体即时检测(point-of-care testing,POCT)中的研究进展,总结了3种检测方法在POCT应用中的优劣。分析了生物传感POCT技术与设备在传染病病原体检测中面临的问题,指出了传染病病原体生物传感POCT技术与设备未来应向低成本、高通量、高准确性、高灵敏度及便携性等方面发展。

关键词：传染病病原体生物传感 POCT 光学电化学磁学

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康强电子被任氏家族再度举牌 005

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上海证券报

作者：吴绮玥

半年时间，任氏家族不断“扫货”康强电子，11月7日的最新一笔交易让其持股比例触及15%的第三次举牌红线。康强电子今日公告，公司于11月8日收到通知函，7日，任峰杰通过集中竞价交易方式增持公司股份1.38万股，任峰杰与任奇峰、任伟达...

半年时间，任氏家族不断“扫货”康强电子，11月7日的最新一笔交易让其持股比例触及15%的第三次举牌红线。康强电子今日公告，公司于11月8日收到通知函，7日，任峰杰通过集中竞价交易方式增持公司股份1.38万股，任峰杰与任奇峰、任伟达、任贵龙、宁波汇峰电子科技股份有限

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