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利用胞嘧啶碱基编辑器高效制备奶牛BLG基因敲除胚胎的研究

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南京农业大学学报 2024年

作者：丁修虎丁强王悦夏淑雯赵芳陈坤琳吴家顺何南仲跻峰王慧利李惠侠南京农业大学动物科技学院江苏省农业科学院畜牧研究所江苏省畜禽精准育种工程研究中心农业农村部种养结合重点实验室山东农业大学动物科技学院

[目的]β-乳球蛋白是由BLG基因编码的蛋白质，是牛乳中主要的过敏原。本试验旨在使用优化后的CBE单碱基编辑器YE1-BE3-FNLS和YE1-AncBE4max对牛胚胎BLG基因进行单碱基编辑，同时对两种单碱基编辑器在牛胚胎BLG基因敲除效果进行评价。[方... 详细信息

[目的]β-乳球蛋白是由BLG基因编码的蛋白质，是牛乳中主要的过敏原。本试验旨在使用优化后的CBE单碱基编辑器YE1-BE3-FNLS和YE1-AncBE4max对牛胚胎BLG基因进行单碱基编辑，同时对两种单碱基编辑器在牛胚胎BLG基因敲除效果进行评价。[方法]在奶牛的BLG基因的第一外显子上设计sgRNA序列，通过胞嘧啶碱基编辑器将BLG基因第21位密码子CAG突变为TAG实现c*.61C>T（p.Q21*）的转变，获得终止密码子，使蛋白质翻译提前终止，达到基因敲除的目的。通过体外转录获得sgRNA和YE1-BE3-FNLS和YE1-AncBE4max的mRNA，显微注射到奶牛胚胎中。收集囊胚进行胚胎基因组扩增，PCR扩增BLG基因目标序列并进行测序验证编辑效率。根据sgRNA的序列，全基因组选择错配碱基最少的5个潜在脱靶位点进行脱靶检测。[结果]分别检测20枚YE1-BE3-FNLS编辑囊胚和24枚YE1-AncBE4max编辑囊胚，PCR测序，YE1-AncBE4max对牛胚胎BLG基因的靶向编辑效率为79.17%（19/24）高于YE1-BE3-FNLS的靶向编辑效率60%（12/20），而前者存在较大的编辑窗口，可对sgRNA序列上的多个胞嘧啶进行编辑（C1-C9），后者具有较小的编辑窗口为C2-C4；另外，YE1-BE3-FNLS具有较高的靶位点双链编辑效率35%（7/20），而YE1-AncBE4max只有2枚编辑胚胎发生双链编辑，纯合编辑率较低；经分析，两种单碱基编辑器制备的编辑胚胎均未出现插入缺失和脱靶效应。[结论]本文使用的两种胞嘧啶碱基编辑器均能高效制备奶牛BLG基因编辑胚胎，为进一步获得BLG基因单碱基敲除奶牛储备技术方法。

关键词： CBE 单碱基编辑奶牛 BLG基因胚胎验证

蒙荷杂交牛与荷斯坦牛重要经济性状的比较研究

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中国畜牧杂志 2024年第7期 195-198页

作者：陈坤琳夏淑雯连红沈阳阳赵芳丁强崔兆康仲跻峰田雨王慧利江苏省农业科学院畜牧研究所江苏省畜禽精准育种工程研究中心农业农村部种养结合重点实验室江苏优源奶业产业研究院有限公司

本试验旨在研究蒙贝利亚与荷斯坦牛杂交后代泌乳、繁殖、生长和健康等重要经济性状，为荷斯坦牛的杂交改良效果提供参考依据。研究采用最小二乘线性模型，对比分析相同饲养环境下的蒙荷杂交后代与自繁荷斯坦牛的各项性状。结果显示，在... 详细信息

本试验旨在研究蒙贝利亚与荷斯坦牛杂交后代泌乳、繁殖、生长和健康等重要经济性状，为荷斯坦牛的杂交改良效果提供参考依据。研究采用最小二乘线性模型，对比分析相同饲养环境下的蒙荷杂交后代与自繁荷斯坦牛的各项性状。结果显示，在泌乳性状方面，蒙荷杂交牛的日产奶量和乳脂率与自繁荷斯坦牛相比基本一致，乳蛋白率高于荷斯坦牛（P<0.01），体细胞评分低于荷斯坦牛（P<0.05）；在繁殖性状方面，蒙荷杂交后代青年牛首配日龄提前5 d，成母牛配妊次数低于荷斯坦牛（P<0.01），空怀天数缩短50 d，且青年牛和成母牛妊娠期长度均延长5 d，产犊间隔缩短19.53 d；在生长性状方面，蒙荷杂交牛成母牛体重高于荷斯坦牛（P<0.05），平均增加53.05 kg，公牛体重高于荷斯坦牛20.87 kg；在健康性状方面，蒙荷杂交牛总体发病率低于荷斯坦牛，但差异不显著，其中消化代谢类疾病和呼吸类疾病发病率均低于荷斯坦牛（P<0.001），肢蹄类疾病发病率低于荷斯坦牛（P<0.05），乳房类疾病和繁殖类疾病发病率均低于荷斯坦牛，但差异不显著。综上所述，蒙荷杂交牛在泌乳性状、繁殖性状、生长性状及健康性状方面均具有优势，可显著提高养殖经济效益。

关键词：蒙荷杂交牛泌乳性状繁殖性状生长性状健康性状

来源：博看期刊

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江苏地区荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数估计

畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1030-1039页

作者：夏淑雯陈坤琳沈阳阳安振江赵芳丁强仲跻峰林志平王慧利江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 江苏省畜禽精准育种工程研究中心南京210014 农业农村部种养结合重点实验室南京210014 南京农业大学动物科技学院南京210095 江苏优源奶业产业研究院有限公司南京211100

旨在估计荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数及评估育种值,为提高生产性能及实施平衡育种提供参考。本研究共收集江苏地区9个规模化牧场2017—2023年间19 756头荷斯坦成母牛的离群记录,分析牛只的长寿性和淘汰情况。利用R软件的GLM程序对影... 详细信息

旨在估计荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数及评估育种值,为提高生产性能及实施平衡育种提供参考。本研究共收集江苏地区9个规模化牧场2017—2023年间19 756头荷斯坦成母牛的离群记录,分析牛只的长寿性和淘汰情况。利用R软件的GLM程序对影响奶牛长寿性状的固定效应(包括牧场、出生年季、头胎产犊月龄)进行显著性检验;采用BLUPF90软件进行遗传参数估计以及育种值评估,并绘制遗传趋势图。结果表明:江苏地区规模化牧场成母牛平均在群寿命为1 640.87 d,生产寿命为917.15 d,平均利用胎次为2.60胎;长寿性状遗传力估计值变化范围为0.07~0.15,属低遗传力性状;7个长寿性状(在群天数、生产寿命、利用胎次和L1-L4)间均具有中等到较高的遗传和表型相关(0.27~0.99),其中在群寿命与生产寿命的相关性趋近于1;通过计算长寿性状的育种值,绘制遗传趋势图,发现近年来长寿性状遗传进展缓慢且整体呈下降趋势。本研究对江苏地区规模化牧场成母牛长寿性状进行了系统的遗传分析,可为制定南方地区奶牛长寿性状育种规划提供参考。

关键词：荷斯坦牛长寿性状遗传力遗传相关育种值

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江苏省奶牛生产性能测定发展状况及成效分析

中国奶牛 2024年第6期 42-46页

作者：夏淑雯林志平刘小军张敏王慧利仲跻峰邢光东江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 江苏省畜禽精准育种工程研究中心南京210014 江苏优源奶业产业研究院有限公司南京211100 南京卫岗乳业有限公司南京211100

本文通过对江苏省2009-2023年间奶牛生产性能测定(DHI)规模和南京奶牛生产性能测定中心历年DHI数据进行整理分析,并与全国平均水平进行比对,阐述了江苏奶牛生产性能测定工作发展状况、江苏奶牛生产水平以及DHI工作的成效。结果表明,江苏... 详细信息

本文通过对江苏省2009-2023年间奶牛生产性能测定(DHI)规模和南京奶牛生产性能测定中心历年DHI数据进行整理分析,并与全国平均水平进行比对,阐述了江苏奶牛生产性能测定工作发展状况、江苏奶牛生产水平以及DHI工作的成效。结果表明,江苏DHI参测牛群规模、参测牛场数量、牛群参测规模、平均日单产等指标都有较明显的提升,平均乳脂率和乳蛋白率以及体细胞数等指标有较大改善,生产性能改良效果明显。分析显示,江苏DHI工作的积极推广及后期快速发展,对推进江苏奶业的高质量发展起到了重要的支撑作用。

关键词：江苏奶牛 DHI发展状况成效分析

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立面斜交网格高层结构对比分析

建筑结构 2023年第S2期53卷 133-135页

作者：仲跻峰南通市建筑设计研究院有限公司南通226006

某境外保险公司大楼计划建造180m高的超高层建筑,标准层平面为梯形。外立面设置斜柱,交叉斜柱每4层相交一次。境外设计公司提出设计方案:斜柱与边梁组成斜交网格结构,交通竖井周边布置剪力墙,内部其他区域布置框架,三者共同组成抗侧力体... 详细信息

某境外保险公司大楼计划建造180m高的超高层建筑,标准层平面为梯形。外立面设置斜柱,交叉斜柱每4层相交一次。境外设计公司提出设计方案:斜柱与边梁组成斜交网格结构,交通竖井周边布置剪力墙,内部其他区域布置框架,三者共同组成抗侧力体系,均采用钢筋混凝土材料。总承包公司在投标过程中,参照卡塔尔塔设计方案,进行详细的计算复核。卡塔尔塔的标准层平面为圆形,外框立面同样为斜交网格结构。从平面形状、边梁拉力、预应力施加难度、节点构造等几个方面进行两栋楼的对比分析,发现保险公司大楼拟施加预应力和节点混凝土应力过大,有安全隐患。保险大楼如果全部采用钢筋混凝土结构,难以解决这么多问题,建议斜交网格采用钢结构,或者采用组合结构。

关键词：超高层建筑立面斜交网格结构边梁预应力节点

Pladienolide B对牛胚胎干细胞多能性相关基因表达及细胞活力的影响

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中国农业科学 2023年第11期56卷 2186-2201页

作者：赵芳丁强夏淑雯高运东兰国成林志平王慧利仲跻峰江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省畜禽精准育种工程研究中心/农业农村部种养结合重点实验室山东奥克斯畜牧种业有限公司香港大学李嘉诚医学院江苏优源奶业产业研究院有限公司

【背景】牛胚胎干细胞(bovine embryonic stem cells,BESCs)因具备较高的多能性，在牛品种保存、品种选育及研究家畜胚胎发育调控机制方面具有重要的应用价值。然而，BESCs多能性维持及分化调控的研究相对缺乏，很多机制仍不清楚。【目... 详细信息

【背景】牛胚胎干细胞(bovine embryonic stem cells,BESCs)因具备较高的多能性，在牛品种保存、品种选育及研究家畜胚胎发育调控机制方面具有重要的应用价值。然而，BESCs多能性维持及分化调控的研究相对缺乏，很多机制仍不清楚。【目的】探究不同浓度Pladienolide B(PlaB)对BESCs多能标记基因、全能标记基因、胚胎细胞谱系基因表达及细胞活力的影响，为提高BESCs多能性提供参考和理论依据。【方法】利用免疫荧光检测牛BESCs多能标记基因的表达，利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测不同浓度PlaB对BESCs剪接体、全能标记基因及胚胎细胞谱系基因表达的影响，利用RT-qPCR和Western Blot分别检测不同浓度PlaB对BESCs多能标记基因mRNA和蛋白表达的影响，利用CCK8和EDU染色检测不同浓度PlaB对BESCs增殖的影响。【结果】RT-qPCR结果显示，PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时显著下调EPSCM-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达水平；PlaB浓度为1.5nmol·L-1时，CTFR-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达下降；PlaB浓度范围为0.5—1.5 nmol·L-1时，CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs的SF3B4和SF3B5的mRNA表达水平呈剂量依赖性增加。此外，PlaB显著下调CTFR-BESCs中SF3B6的mRNA表达。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时，EPSCM-BESCs和CTFR-BESCs中剪接体LSM4的mRNA表达显著下调。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1时，显著下调CTFR-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平；PlaB浓度为1—1.5 nmol·L-1时能显著下调BEPSCM-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平。浓度为0.5—1.5 nmol·L-1范围内，PlaB均以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因OCT4、SOX2及NANOG的mRNA表达水平和蛋白水平。在PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L-1范围内，PlaB以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中全能标记基因MDM2、PID1及BTG2的mRNA表达水平，而下调DDIT4和PDRG1的mRNA表达水平。CTFR-BESCs中添加PlaB均上调胚胎细胞谱系基因的表达，而EPSCM-BESCs中添加PlaB显著降低GATA4、GATA6、SOX7等胚胎细胞谱系基因的表达，但是对于ZIC1没有显著影响。随着PlaB剂量增加和处理时间延长，CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs细胞活力均呈下降趋势，但CTFR-BESCs比EPSCM-BESCs更敏感。【结论】PlaB显著上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因和部分全能标记基因的表达；降低EPSCM-BESCs中胚胎细胞谱系基因的表达和细胞活力。PlaB对两种BESCs发挥作用的浓度及对基因表达的影响并不完全一致。由于PlaB降低BESCs的细胞活力，仍需要进一步研究以优化培养体系。

关键词：牛胚胎干细胞 Pladienolide B 剪接体多能性相关基因细胞活力

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禅文化在中西方艺术中的影响及显现探究

禅文化在中西方艺术中的影响及显现探究

作者：仲跻峰中央美术学院

学位级别：硕士

禅是东方文化特有的思维方式,在宗教、艺术、文化及很多方面也起到纽带作用,连接着内在关系。特别是在东西方的艺术中起到重要影响,如中国古代的南画,四僧作品、西方的很多波普艺术和当代艺术中或多或少直接或间接地与禅文化产生着联系... 详细信息

禅是东方文化特有的思维方式,在宗教、艺术、文化及很多方面也起到纽带作用,连接着内在关系。特别是在东西方的艺术中起到重要影响,如中国古代的南画,四僧作品、西方的很多波普艺术和当代艺术中或多或少直接或间接地与禅文化产生着联系。本文结合自身的艺术成长、创作过程、创作体验,和慢慢对禅的学习通过分析中国i古代、当代艺术及自身作品探讨禅宗、禅文化在艺术中的作用。参禅和艺术不但相互影响,而且在做艺术也是一种参禅的形式,体验一种不断悟道修为。艺术不单单是向外的更是向内的。并有很多可以与禅比较探讨的,比如艺术用文字和言语去分析去理解一件件作品只能去诠释可释的那一部分,能多的境界和气韵是无法用言语诠释透彻的这正像禅宗的不立文字相似。这也正是禅宗与艺术的i魅力所在。所以我在文章之中我试着去探讨和分析那些可以说可以探讨的部分。

关键词：禅当代艺术中国画老庄

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兔胚胎细胞核移植重组胚的发育力

中国兽医学报 2002年第2期22卷 194-197页

作者：桑润滋韩建永常万存仲跻峰河北农业大学动物科技学院河北保定071001 山东农业科学院生物技术中心山东济南250100

以兔为模型 ,对影响胚胎细胞核移植重组胚发育力的电融合与激活参数、体外培养系统进行了探索性研究。结果表明 ,有利于重组胚发育力的适宜电融合与激活参数为 2 0 0 V/ m m的电场强度、10 0μs的脉冲宽度 ;在不同的体外培养系统中 ,TCM... 详细信息

以兔为模型 ,对影响胚胎细胞核移植重组胚发育力的电融合与激活参数、体外培养系统进行了探索性研究。结果表明 ,有利于重组胚发育力的适宜电融合与激活参数为 2 0 0 V/ m m的电场强度、10 0μs的脉冲宽度 ;在不同的体外培养系统中 ,TCM- 199培养液内于兔胎儿成纤维细胞饲养层 (REF feeder)上共同培养的重组胚获得了最高的 2～ 4-细胞发育率和桑椹胚或囊胚的发育率 ,分别为 6 5 .7%和 2 2 .9%;移植 111枚重组胚给 9只假孕母兔 ,其中 2只妊娠 ,1只完成足月妊娠产出 2只克隆仔兔 ,另 1只在妊娠 2 2 d流产 1只克隆死胎。

关键词：兔胚胎细胞核移植克隆体外发育发育力重组胚

开食料NDF水平及补饲日龄对湖羊羔羊生长发育的影响

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南京农业大学学报 2023年第1期46卷 135-142页

作者：邓维张俊钱勇王慧利刘方旭李隐侠夏淑雯郑开之孟春花曹少先仲跻峰江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 农业农村部种养结合重点实验室江苏南京210014 浙江省农业科学院浙江杭州310021

[目的]本试验旨在研究湖羊开食料中不同中性洗涤纤维(NDF)水平及补饲起始时间对羔羊生长发育的影响,以优化羔羊补饲方案。[方法]选择98只相同日龄、初生体重接近(约3.29 kg)的湖羊羔羊,随机分成7组(n=14):3个试验组从14日龄开始补饲至6... 详细信息

[目的]本试验旨在研究湖羊开食料中不同中性洗涤纤维(NDF)水平及补饲起始时间对羔羊生长发育的影响,以优化羔羊补饲方案。[方法]选择98只相同日龄、初生体重接近(约3.29 kg)的湖羊羔羊,随机分成7组(n=14):3个试验组从14日龄开始补饲至60日龄,开食料中NDF水平分别为15%、20%、25%(质量分数);3个试验组从21日龄开始补饲至60日龄,开食料中NDF水平分别为15%、20%、25%;对照组不补饲开食料。分别测定羔羊0、30、60日龄体重,计算平均日增重;测定60日龄屠宰胴体质量、内脏器官质量、复胃容积、4个胃室(瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃)的质量,计算屠宰率和脏器指数。[结果]自14和21日龄起补饲NDF水平分别为15%、20%、25%的开食料对湖羊羔羊平均日增重、宰前活重(60日龄体重)等具有极显著促进作用(P0.05)。[结论]14日龄开始补饲含有20%NDF的开食料最有利于湖羊羔羊生长发育,尤其对肝脏、肾脏、瘤胃和瓣胃的发育具有显著促进作用。

关键词：中性洗涤纤维(NDF) 补饲日龄生长性能胃肠道发育湖羊羔羊