检索结果-南通市图书馆

无症状感染利什曼原虫快速分子检测方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国血吸虫病防治杂志 2015年第1期27卷 45-48,52页

作者：赵桂华尹昆仲维霞崔勇王洪法山东省医学科学院、山东省寄生虫病防治研究所济宁272033

目的建立适合快速检测利什曼原虫无症状感染者的分子生物学方法。方法选择利什曼原虫k DNA小环保守区的2对快速诊断特异性引物RV1-RV2、K13A-K13B,以杜氏利什曼原虫山东分离株前鞭毛体抽提的k DNA为模板进行PCR扩增,并通过对扩增条带测... 详细信息

目的建立适合快速检测利什曼原虫无症状感染者的分子生物学方法。方法选择利什曼原虫k DNA小环保守区的2对快速诊断特异性引物RV1-RV2、K13A-K13B,以杜氏利什曼原虫山东分离株前鞭毛体抽提的k DNA为模板进行PCR扩增,并通过对扩增条带测序比对来鉴定方法的可靠性。运用该法对四川省黑水县105例无症状家犬和新疆喀什地区部分乡镇75例无症状易感人群的静脉血样进行检测,并同时对上述地区确诊的部分病犬及病人(均为7例)进行检测,以验证该方法的可行性及准确性。结果 RV1-RV2、K13A-K13B两对引物扩增出与预期片段大小一致的条带,序列比对结果显示扩增产物在利什曼原虫种内保守性高;该方法对105例无症状家犬及75例无症状居民静脉血样的阳性检出率分别为37.14%(39/105)和82.67%(62/75),且对同地区确诊病犬及病人血样本检测的阳性率均为100%(7/7)。结论该方法适于目前我国黑热病流行区利什曼原虫无症状感染者的检测,且灵敏快速准确,具有较好的推广应用价值。

关键词：利什曼原虫无症状感染 kDNA PCR 检测

杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 172-176页

作者：孙长峰仲维霞王洪法崔勇赵桂华山东省医学科学院、山东省寄生虫病防治研究所山东渟272033 济南大学、山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250100

目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子。重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5%的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验。结果在本研究中拼接引物经SOE-PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZαA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用。结论杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性。

关键词：杂合抗菌肽 Cecropin P1 dermaseptin s4 毕赤酵母分泌表达

蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞杀伤作用的效果观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2012年第8期7卷 589-591页

作者：仲维霞屈金辉王洪法崔勇赵桂华山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033

目的观察蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞杀伤作用的效果。方法培养骨髓瘤细胞至对数生长期,调整细胞浓度为(3～5)×105/ml,接种于96孔组织培养板中,100μl/孔,于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养24h。设实验孔、空白对照孔和5-F... 详细信息

目的观察蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞杀伤作用的效果。方法培养骨髓瘤细胞至对数生长期,调整细胞浓度为(3～5)×105/ml,接种于96孔组织培养板中,100μl/孔,于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养24h。设实验孔、空白对照孔和5-FU阳性对照孔。实验孔分别于10μl对数生长期骨髓瘤细胞中加入蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液至终浓度分别为30、60、90、120、150、180μg/ml,每个浓度重复9孔,5-FU阳性对照孔终浓度为400μg/ml。连续培养24、48和72h后,采用MTT法检测各浓度蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液对骨髓瘤细胞的杀伤效果。结果蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞SP2/0有杀伤作用,发酵产物浓度为150μg/ml时,杀伤作用最大,杀伤率最大为78.845%,相当于400μg/ml的5-FU对骨髓瘤细胞SP2/0的杀伤作用。结论蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞具有杀伤作用。

关键词：抗菌肽猪蛔虫骨髓瘤细胞SP2/0 杀伤作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物抗菌肽毕赤酵母表达系统研究进展

中国病原生物学杂志 2009年第9期4卷 700-702页

作者：孔凡红仲维霞崔勇王洪法山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在生物界。抗菌肽具有广谱抗菌活性,有良好的应用前景,使其走向临床的最大的挑战是如何用基因工程技术低成本大量生产抗菌肽产品。抗菌肽天然提取资源有限且提取难度大,难以实现规模化生产;人工... 详细信息

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在生物界。抗菌肽具有广谱抗菌活性,有良好的应用前景,使其走向临床的最大的挑战是如何用基因工程技术低成本大量生产抗菌肽产品。抗菌肽天然提取资源有限且提取难度大,难以实现规模化生产;人工合成成本太高,难以实现产业化,目前多局限于研究用途。毕赤酵母表达系统适用于多种生物抗菌肽的表达,多种表达策略的采用可以提高表达量,毕赤酵母表达抗菌肽具有良好的应用前景。本文综述了抗菌肽毕赤酵母表达的研究进展。

关键词：抗菌肽毕赤酵母综述

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

我国黑热病的流行概况和防治现状

中国病原生物学杂志 2011年第8期6卷 629-631页

作者：李玉凤仲维霞赵桂华王洪法山东省兖州市疾病预防控制中心山东兖州272100 山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所

黑热病又称内脏利什曼病,是严重危害人类身体健康的寄生虫病。按传染源特点可分为野生动物源型、犬源型和人源型3种类型。目前,人源型黑热病除新疆流行区外,在其他流行区已得到控制。而犬源型和野生动物源型黑热病则在其流行区不断出现... 详细信息

黑热病又称内脏利什曼病,是严重危害人类身体健康的寄生虫病。按传染源特点可分为野生动物源型、犬源型和人源型3种类型。目前,人源型黑热病除新疆流行区外,在其他流行区已得到控制。而犬源型和野生动物源型黑热病则在其流行区不断出现,有死灰复燃之势。本文对我国黑热病的分型、流行概况和防治现状进行了综述。

关键词：黑热病分型流行防治综述

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品蛋白质水解肽的研究概况

安徽农业科学 2009年第34期37卷 17162-17163页

作者：赵桂华尹淑霞郝万东仲维霞尹昆山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 济宁供水集团水质检测中心山东济宁272000 山东省济宁市金乡县第一中学山东济宁272200

综述了食品蛋白质水解肽的制备方法及蛋白质水解产物的应用情况。

关键词：生物活性肽酶解工艺深度水解应用

猫肠上皮细胞的原代培养及cDNA文库的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国血吸虫病防治杂志 2017年第4期29卷 464-467,474页

作者：刘烨赵桂华尹昆王洪法肖婷刘功振仲维霞崔勇济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东省寄生虫病防治研究所济宁272033 山东省济宁市第一人民医院医学检验科

目的建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础。方法分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的... 详细信息

目的建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础。方法分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的原代培养,通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法鉴定后提取mRNA,运用SMART技术合成cDNA第一链,以LD-PCR扩增获得双链cDNA(ds cDNA),通过同源重组方法在酵母菌株Y187中构建猫IECs的cDNA文库,计算文库的容量,以酵母菌液PCR检测插入片段的大小分布。结果两种培养方法效果表明酶联合消化法更为有效。本研究建立了连续培养猫IECs体系,培养出高纯度的猫IECs,用其构建的cDNA文库容量为1.1×10~6,滴度为2.8×10~9cfu/ml,插入片段大小在0.5~2.0 kb之间。结论培养的原代猫IECs构建的cDNA文库符合酵母双杂交筛选互作因子标准,这为筛选弓形虫终末宿主的毒性因子互作蛋白奠定了基础。

关键词：弓形虫肠上皮细胞猫原代培养酵母双杂交 cDNA文库

采用弓形虫T7噬菌体文库筛选黏附相关蛋白基因的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2013年第11期8卷 1005-1007页

作者：崔勇仲维霞赵桂华李瑾徐超魏艳彬魏冬冬王洪法山东省医学科学院、山东省寄牛虫病防治研究所山东济宁272033 济南大学山东济南250022

目的用原代培养的猫肠上皮细胞(IECs)对已构建的弓形虫T7噬菌体展示文库进行筛选,期望得到将新的弓形虫入侵宿主细胞黏附相关蛋白基因。方法将猫IECs与混有噬菌体文库的DMEM培养基孵育培养后进行洗脱筛选,再与宿主菌BLT5403共同培养扩... 详细信息

目的用原代培养的猫肠上皮细胞(IECs)对已构建的弓形虫T7噬菌体展示文库进行筛选,期望得到将新的弓形虫入侵宿主细胞黏附相关蛋白基因。方法将猫IECs与混有噬菌体文库的DMEM培养基孵育培养后进行洗脱筛选,再与宿主菌BLT5403共同培养扩增文库,筛选噬菌体DNA并进行基因序列测定与分析。结果洗脱下的噬菌体滴度从第1轮7.6×105到第5轮的3.6×107,富集了230倍,非特异性结合和亲和力低的噬菌体被成功去除;核苷酸序列分析表明含插入片段为394bp的噬菌体富集量最大,经检索为弓形虫棒状体蛋白基因,是棒状体蛋白基因ROP2和ROP8的共有序列。结论初步证明弓形虫棒状体蛋白为黏附相关蛋白基因,其表达产物为ROP2。

关键词：弓形虫猫肠上皮细胞噬菌体黏附蛋白棒状体蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南水北调与血吸虫病扩散

中国血吸虫病防治杂志 2007年第3期19卷 238-240页

作者：王洪法文衍秋仲维霞山东省寄生虫病防治研究所济宁272033 山东省济宁市产品质量监督检验所

血吸虫病流行于我国长江流域及其以南地区,钉螺为血吸虫的惟一中间宿主.南水北调东线工程从长江下游扬州附近抽引长江水,利用京杭大运河及与其平行的河道为输水干线,经过山东的南四湖和东平湖到达天津.

关键词：南水北调东线工程血吸虫病扩散南水北调工程京杭大运河长江流域中间宿主长江下游长江水