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口蹄疫病毒Asia 1/JSWX株基因组全长感染性克隆的体外拯救与序列分析

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 771-780页

作者：仝燕许陈豪泰潘丽张永光王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过反转录聚合酶链反应,获得了口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JSWX株基因组3′端长片段(长约7.5kb)和5′UTR中ploy(C)前后的2个短片段。5′UTR的2个短片段经融合PCR扩增得到长约710bp的片段。用引物在基因组5′末端引入AflⅡ酶切位点和T7启动... 详细信息

通过反转录聚合酶链反应,获得了口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JSWX株基因组3′端长片段(长约7.5kb)和5′UTR中ploy(C)前后的2个短片段。5′UTR的2个短片段经融合PCR扩增得到长约710bp的片段。用引物在基因组5′末端引入AflⅡ酶切位点和T7启动子,在5′UTR内引入SpeⅠ酶切鉴定位点,在3′末端引入NotⅠ酶切位点,将融合片段和3′端长片段顺次连接到载体pSL1180。经T7体外转录系统获取的RNA转录本与脂质体共转染BHK21细胞。测序结果表明,构建的病毒基因组全长cDNA为8 197nt,分别包括1个长为1 095nt的5′UTR[含有1个17nt的ploy(C)];1个长6 990nt的ORF;1个长为93nt的3′UTR;之后是18nt的poly(A)尾巴。该全长cDNA克隆与Asia 1/Jiangsu/China/2005株基因组序列的同源性为98.4%。测序和酶切鉴定结果均表明,该口蹄疫病毒株全长cDNA克隆已构建成功,该方法极大地简化了获得FMDV全长cDNA克隆的过程。通过反转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和蚀斑试验等鉴定,本试验获得了感染性分子克隆;体外拯救获得的基因工程病毒连续传代培养后,可致BHK21细胞产生病变。上述结果表明,构建的cDNA克隆可以作为基因操作的载体,为深入研究安全性好、稳定性高和免疫原性强的基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒Asia 1型感染性全长cDNA RNA体外转录本序列分析病毒拯救

复方苦参注射液醇沉工艺优化及醇沉颗粒沉降过程研究

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中国中药杂志 2011年第22期36卷 3108-3113页

作者：刘晓谦仝燕王锦玉王瑞珍张彦霞王智民中国中医科学院中药研究所北京100700 中药质量控制技术国家工程实验室北京100700 山西振东制药股份有限公司山西长治047100

目的:以复方苦参注射液为模型药物,对其醇沉工艺进行优化,并对醇沉过程中颗粒沉降过程及其特点进行研究,掌握其沉降机制和过程变化规律,探讨过程控制模式在中药生产中的可行性。方法:以复方苦参注射液为研究对象,以生物碱及大泽米苷成... 详细信息

目的:以复方苦参注射液为模型药物,对其醇沉工艺进行优化,并对醇沉过程中颗粒沉降过程及其特点进行研究,掌握其沉降机制和过程变化规律,探讨过程控制模式在中药生产中的可行性。方法:以复方苦参注射液为研究对象,以生物碱及大泽米苷成分的保留量为评价指标,优化醇沉工艺,同时结合对醇沉过程中形成的沉淀颗粒的数量、密度、沉降速度等参数的测定确定醇沉时间,理解工艺过程。结果:优选出的醇沉工艺为醇沉2次,乙醇浓度依次为60%,80%～90%。该过程随着沉降时间的延长,生物碱类成分有一定的下降,一次醇沉36 h,二次醇沉6 h即可满足生产要求。10μm及25μm颗粒在第1次醇沉过程中完全沉降所需时间分别为157.7,25.2 h;在第2次醇沉过程中完全沉降所需时间分别为84.2,13.5 h。结论:优化后的醇沉工艺能够更好地保留指标成分,节约时间,减少能耗。同时也证实了中药注射剂的生产质量是可以控制和把握的,但过程控制模式应在充分理解过程的变化规律的基础上制定。

关键词：复方苦参注射液醇沉工艺颗粒沉降过程生物碱大泽米苷过程控制

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牛黄上清微丸定性及定量分析

中国实验方剂学杂志 2010年第16期16卷 69-73页

作者：杨立新王锦玉仝燕刘岱李建荣王智民中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:建立牛黄上清微丸定性及定量分析方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中的人工牛黄、栀子、赤芍、连翘、黄连、黄柏、黄芩、大黄和冰片进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中的黄芩苷、大黄素和大黄酚的含量。结果:薄层色谱显色... 详细信息

目的:建立牛黄上清微丸定性及定量分析方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中的人工牛黄、栀子、赤芍、连翘、黄连、黄柏、黄芩、大黄和冰片进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中的黄芩苷、大黄素和大黄酚的含量。结果:薄层色谱显色清晰,重复性好,阴性对照无干扰;黄芩苷线性范围为0.091 6～0.916 0μg,r=0.999 7,回收率和RSD分别为98.48%和2.05%;大黄素线性范围为0.034～0.272μg,r=0.999 9,回收率和RSD分别为97.45%和2.16%;大黄酚线性范围为0.055～0.44μg,r=0.999 9,回收率和RSD分别为98.55%和2.26%。结论:该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。

关键词：牛黄上清微丸薄层色谱法高效液相色谱法

星点设计-效应面法优化解毒通络颗粒的提取工艺

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中国实验方剂学杂志 2014年第9期20卷 15-18页

作者：王倩倩王锦玉马振山王琳陈贝贝仝燕中国中医科学院中药研究所北京100700 江西中医药大学南昌330004

目的:优选解毒通络颗粒的提取工艺。方法:选择浸泡时间、煎煮时间和溶剂用量为自变量,黄芩苷、槲皮素、异鼠李素提取量的综合评分为因变量,在单因素试验基础上,采用星点设计-效应面法优选提取工艺,通过SPSS软件对试验数据进行多元线性... 详细信息

目的:优选解毒通络颗粒的提取工艺。方法:选择浸泡时间、煎煮时间和溶剂用量为自变量,黄芩苷、槲皮素、异鼠李素提取量的综合评分为因变量,在单因素试验基础上,采用星点设计-效应面法优选提取工艺,通过SPSS软件对试验数据进行多元线性模型和二次多项式模型拟合,确定最佳数学模型,利用Design Expert 8.0.0统计分析软件绘制效应面图和等高线图。结果:最佳提取工艺为浸泡时间90 min,煎煮时间85.63 min,溶剂用量9.21倍;综合评分(93.2±0.051)%,与预测值(94.30%)的偏差仅-2.32%。结论:通过星点设计-效应面法建立的模型预测性良好,适用于解毒通络颗粒提取工艺的优选。

关键词：黄芩苷槲皮素异鼠李素星点设计-效应面法解毒通络颗粒单因素试验

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正确理解可逆反应的定义

正确理解可逆反应的定义

中国化学会第27届学术年会

作者：李晓飞仝燕苑娟河南中医学院药学院

大部分化学反应都可以看作是可逆反应。在教学实践中,有不少学生对可逆反应与自发反应有很多困惑,认为可逆反应如果正向ΔG小于零,则能自发进行,那么逆向ΔG一定大于零,因此得

关键词：热力学第二定律自发反应化学平衡可逆反应判据

来源： cnki会议评论

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牛黄上清微丸的制备工艺

中国实验方剂学杂志 2010年第17期16卷 10-11,14页

作者：王锦玉仝燕王智民李建荣中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:建立牛黄上清微丸制备方法。方法:以收率和圆整度优选挤出滚圆法制备工艺。结果:牛黄上清提取物加等量微晶纤维素,混匀,加30%水做黏合剂制软材,选择孔径为1.0 mm的筛板,挤出速度为30 r·min-1,滚圆速度50 Hz,滚圆时间为6 min。结论... 详细信息

目的:建立牛黄上清微丸制备方法。方法:以收率和圆整度优选挤出滚圆法制备工艺。结果:牛黄上清提取物加等量微晶纤维素,混匀,加30%水做黏合剂制软材,选择孔径为1.0 mm的筛板,挤出速度为30 r·min-1,滚圆速度50 Hz,滚圆时间为6 min。结论:微丸外表美观,质量稳定。

关键词：牛黄上清微丸制备工艺挤出-滚圆法

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双黄连即型凝胶体外释药性研究

中国实验方剂学杂志 2010年第17期16卷 7-9页

作者：陈两绵王锦玉仝燕刘德文中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:研究双黄连即型凝胶的体外释放特性。方法:以0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 7.4)为释放介质,以HPLC同时测定释放液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量,用franz扩散池法研究双黄连即型凝胶的体外释放特性。结果:双黄连即型凝胶中绿原... 详细信息

目的:研究双黄连即型凝胶的体外释放特性。方法:以0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 7.4)为释放介质,以HPLC同时测定释放液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷的含量,用franz扩散池法研究双黄连即型凝胶的体外释放特性。结果:双黄连即型凝胶中绿原酸、黄芩苷、连翘苷的释放曲线均符合Ritger-Peppas方程,但绿原酸的释放速率明显快于黄芩苷和连翘苷的释放。结论:双黄连即型凝胶释药机理为非Fick扩散。

关键词：双黄连即型凝胶体外释药高效液相色谱法 franz扩散池

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中药水煎煮液分离、纯化工艺的比较研究

中国中药杂志 2002年第1期27卷 28-30页

作者：冯青然王元瑜马振山张保献聂其霞赵小妹臧琛仝燕王琳中国中医研究院中药研究所北京100700

目的 :对中药水煎液的常用精制方法进行比较研究 ,以评价各种方法的优劣。方法 :用醇沉法、超滤法、澄清剂法、大孔树脂法分别对淫羊藿、黄芩汤等单味药和复方的水提液进行分离、纯化 ,并用HPLC及其他方法对其单味药和复方中的指标成分... 详细信息

目的 :对中药水煎液的常用精制方法进行比较研究 ,以评价各种方法的优劣。方法 :用醇沉法、超滤法、澄清剂法、大孔树脂法分别对淫羊藿、黄芩汤等单味药和复方的水提液进行分离、纯化 ,并用HPLC及其他方法对其单味药和复方中的指标成分及多糖、蛋白质进行定量测定和定性鉴别。结果 :4种分离纯化技术各有其优点。结论 :需根据临床治疗的需要。

关键词：水煎液分离纯化工艺比较中药

不同纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响

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中国中药杂志 2002年第12期27卷 903-905页

作者：聂其霞赵小妹张保献臧琛冯青然王元瑜马振山仝燕王琳中国中医研究院中药研究所北京100700

目的:比较了3种纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响,以优选出黄连解毒汤的水提取液的最佳纯化方法。方法:对黄连解毒汤的水提取液分别用醇沉、大孔树脂吸附和吸附澄清剂澄清3种方法纯化,并用HPLC法测定了所得提取物中盐酸小檗... 详细信息

目的:比较了3种纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响,以优选出黄连解毒汤的水提取液的最佳纯化方法。方法:对黄连解毒汤的水提取液分别用醇沉、大孔树脂吸附和吸附澄清剂澄清3种方法纯化,并用HPLC法测定了所得提取物中盐酸小檗碱的含量,以此为指标对3种纯化方法进行了比较研究。结果:大孔树脂吸附法出膏率最低,醇沉法次之,吸附澄清法最高;盐酸小檗碱含量以大孔树脂吸附法最高,醇沉法次之,吸附澄清法最低。结论:大孔树脂吸附法为黄连解毒汤水提取液的最佳纯化方法。

关键词：黄连解毒汤盐酸小檗碱高效液相色谱法醇沉法大孔树脂吸附法吸附澄清法