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基于靶向代谢组学研究方法探究芍药内酯苷通过调节肠道菌群抗抑郁的机制

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基于靶向代谢组学研究方法探究芍药内酯苷通过调节肠道菌群抗抑郁...

作者：付苏凝天津中医药大学

学位级别：硕士

抑郁症(Depression)是一种严重的情感障碍性精神疾病,以显著而持久的心境低落为主要临床特征。目前临床使用的合成抗抑郁药物虽然有一定的疗效,但起效迟缓、疗效低或有强烈的副作用。探究抑郁症复杂的发病机制,为寻找治疗抑郁症的药物... 详细信息

抑郁症(Depression)是一种严重的情感障碍性精神疾病,以显著而持久的心境低落为主要临床特征。目前临床使用的合成抗抑郁药物虽然有一定的疗效,但起效迟缓、疗效低或有强烈的副作用。探究抑郁症复杂的发病机制,为寻找治疗抑郁症的药物作用新靶点、开发出疗效更好和副作用更低的抗抑郁药物成为当今研究的热点。本课题组在前期工作中分别探究了芍药总苷、芍药苷和芍药内酯苷的抗抑郁效果,发现三者均有一定的抗抑郁作用,芍药内酯苷的抗抑郁作用优于芍药苷和芍药总苷,且抗抑郁效果具有剂量依赖性。本次研究是在此基础上采用经典的大鼠慢性温和不可预知性应激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁症模型,考察芍药内酯苷的快速抗抑郁作用,并运用新一代靶向代谢组学(Next-generation targeted metabolomics)技术,研究分析大鼠海马组织中和肠道内的代谢产物水平,揭示芍药内酯苷抗抑郁的分子药理学机制。通过构建慢性温和不可预知性应激抑郁大鼠模型,分别将抗抑郁药氟西汀和快速起效抗抑郁药氯胺酮作为阳性药对照,考察芍药内酯苷对CUMS模型大鼠体重、1%糖水偏好实验和开放场(Open field test,OFT)实验中的抗抑郁效果。结果显示,在大鼠CUMS模型中,连续给予芍药内酯苷7天后,可明显逆转CUMS模型大鼠体重的下降和1%糖水偏好的减少,以及开放场实验中活动总距离和直立次数的减少;而连续给药7天的氟西汀(10 mg/kg)组对模型大鼠的1%糖水偏好影响,与CUMS组相比无显著性差异。单次给药氯胺酮(10 mg/kg)和芍药内酯苷(7 mg/kg)均可明显逆转CUMS模型大鼠1%糖水偏好的减少,且氯胺酮和芍药内酯苷之间没有统计学差异,表明芍药内酯苷具有快速起效的抗抑郁作用。开展了芍药内酯苷的药代动力学研究,大鼠灌胃给予芍药内酯苷(7 mg/kg)后,在预定的时间点眼眶后静脉丛取血,在每个时间点收集血液后处死大鼠并迅速分离大鼠脑海马组织,采用LC-MS/MS法测定血浆和海马组织中芍药内酯苷的含量变化。结果显示,大鼠在灌胃后5 min就可以在血浆中检测到芍药内酯苷,大鼠海马区芍药内酯苷浓度在45 min时达到峰值(T)。药代动力学结果进一步表明了芍药内酯苷的快速起效作用。开展了芍药内酯苷对CUMS抑郁模型大鼠抗抑郁机制研究。大鼠海马组织靶向代谢组学研究结果显示,芍药内酯苷可以恢复海马组织中的代谢紊乱,调节代谢产物水平,调控苯丙氨酸、酪氨酸、谷氨酸和色氨酸代谢通路。蛋白表达(Western Blot)研究结果显示,在大鼠海马和伏隔核(NAc)区,与CUMS模型组相比,芍药内酯苷连续给药7天后可快速上调环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、磷酸化的c AMP反应原件结合蛋白(Phosphorylated Camp Response Element Binding Protein,p CREB)、酪氨酸激活酶B(Tropomyosin-related kinase B receptor,Tr KB)和磷酸化的酪氨酸激活酶B(phosphorylated tropomyosin related kinase B,p Tr KB)的表达;在海马区,芍药内酯苷给药7天后脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达显著上调,氟西汀治疗组则没有影响,另外,芍药内酯苷显著下调N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA)B亚型谷氨酸受体离子型(NMDA Receptor 2B,GLu N2B)的表达水平,发挥了与氯胺酮类似的作用。大鼠粪便靶向代谢组学研究结果显示,CUMS诱导大鼠肠道菌群代谢失调,给予芍药内酯苷治疗后使得大鼠整体肠道微生物代谢趋向正常代谢,调节慢性应激诱导的肠道代谢紊乱,调控花生四烯酸和酪氨酸等代谢通路。为了进一步验证肠道微生物在芍药内酯苷抗抑郁效果中的作用,我们通过灌胃和饮水对大鼠肠道菌群进行广谱抗生素干预。构建了抗生素诱导的肠道微生物耗竭(Antibiotic-induced microbial depletion,AIMD)模型。以粪便细菌DNA负荷和肠道微生物代谢产物水平较正常对照组大鼠显著降低,以及AIMD组的苯甲酸含量显著减少为评估指标,表明肠道微生物组清除成功。然后,使用CUMS抑郁症模型大鼠评估AIMD对芍药内酯苷抗抑郁活性的影响。结果显示,OFT检测中,芍药内酯苷治疗的AIMD组仅部分校正了由慢性应激引起的直立次数和活动总距离的减少。海马靶向代谢组学结果显示,AIMD部分消除了芍药内酯苷对CUMS模

关键词：抑郁症肠道微生物芍药内酯苷靶向代谢组学苯甲酸

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南昌市D区“雪亮工程”项目管理研究

南昌市D区“雪亮工程”项目管理研究

作者：付苏伟南昌大学

学位级别：硕士

“雪亮工程”是以某城市管辖的县（区）、乡、村三级综治管理平台为指挥调度平台、以信息数据为后台支撑、以网格结构管理为基础、以监联设备采集视频和图像应用为重点的“群众性治安防控工程”。南昌市D区的“雪亮工程”建设,按照城市... 详细信息

“雪亮工程”是以某城市管辖的县（区）、乡、村三级综治管理平台为指挥调度平台、以信息数据为后台支撑、以网格结构管理为基础、以监联设备采集视频和图像应用为重点的“群众性治安防控工程”。南昌市D区的“雪亮工程”建设,按照城市五年总体发展规划设计建设要求,紧紧围绕“全域覆盖、全网共享、全时可用、全程可控”的总体目标,采用“政府采购、公开招标、公安管理、资源共享”的建设模式,坚持统一规划、统一建设、综合应用、统筹管理的原则,抓好“建、联、汇、传、储、管、用”七个关键字建设内容,以打造具有南昌特色的“雪亮工程”,全面建成与经济社会发展和公共安全需要相适应的公共安全视频监控系统。本文结合南昌市D区“雪亮工程”项目的实施,以项目的具体操作过程为依据对项目实施的各个环节进行了分解和梳理。本文基于工程项目的实际情况特点,结合运用项目管理中的进度管理、质量管理和风险管理理论,对整体项目的任务、进度以及需要准备的条件等制定符合项目实施的项目计划,提前最好对项目建设全过程的合理安排,并对该项目建设中质量控制和风险控制,提出采取措施和有效的方式和策略,尽最大可能消除各个环节中存在的不利因素,使项目在科学规划下进行,确保圆满完成现项目的工期目标、质量目标和成本目标。

关键词：雪亮工程项目管理进度管理质量管理

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我国药品专利期限补偿制度构建研究

我国药品专利期限补偿制度构建研究

作者：付苏杰华东政法大学

学位级别：硕士

本文主要研究我国药品专利期限补偿制度的制度构建与优化,分析药品专利期限补偿制度对我国创新药企业、仿制药企业间的利益以及专利保护与公共利益保护间矛盾的影响。主要分析的内容包括当前药品专利期限补偿制度的问题及实施环境、我... 详细信息

本文主要研究我国药品专利期限补偿制度的制度构建与优化,分析药品专利期限补偿制度对我国创新药企业、仿制药企业间的利益以及专利保护与公共利益保护间矛盾的影响。主要分析的内容包括当前药品专利期限补偿制度的问题及实施环境、我国目前专利法及立法草案中关于该制度的规定内涵、与域外立法及司法实践相比我国当前药品专利期限补偿制度设计存在的问题、以及在配套制度层面存在的问题等。文章的主体部分分为四章,第一章讨论了药品专利保护制度中存在的问题,指出药品专利期限补偿制度引入的原因及背景,然后讨论了引入该制度对我国医药行业和公共卫生的影响,最后分析了我国推行药品专利期限补偿制度的实施环境,再结合我国当前的相关法规分析了该制度在我国的立法现状。第二章从创新药企业与仿制药企业之间以及专利保护与公共利益保护之间的角度对药品专利期限补偿制度对各方面的影响进行分析,指出该制度在我国落地的过程中需要重点关注那些主体的相关利益,并结合我国现状进行侧重。第三章分析美国专利期限延长制度及欧洲补充保护证书制度中规定的可补偿的专利、可补偿的药品、补偿期的计算方式、补偿期内的专利保护范围等问题,并通过国际条约及贸易协定中对药品专利期限补偿制度的规定分析该制度的国际化路径及影响。第四章结合域外立法及司法实践,分析我国当前的专利法、专利法实施细则草案及审查指南草案的规范内容中存在的问题,以及我国药品专利期限补偿制度配套制度上存在的问题,并根据我国当前的立法现状提出立法及政策上的修改建议。

关键词：药品专利期限补偿制度构建仿制药 Boalr例外

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日、韩等国进口我国蔬菜的现状分析

中国蔬菜 2000年第3期 5-7页

作者：苏保乐付苏友山东潍坊出入境检验检疫局潍坊市奎文区四平路中段261041

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内外部企业社会责任对员工绩效的影响研究

内外部企业社会责任对员工绩效的影响研究

作者：付苏豪华南农业大学

学位级别：硕士

基于HSE管理体系下工具式桩基钻孔平台设计

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中外公路 2013年第6期33卷 118-121页

作者：付甦彭鹏程茂林郭劲中交第二航务工程局有限公司湖北武汉430040

基于HSE管理体系下的工具式桩基钻孔平台解决了在通航航线纵横交错、航行船舶密度大、水上交通及超大构件运输的条件限制下施工效率低的问题,具有结构简单,系统自调节能力强,安装拆卸方便的特点;对项目实施阶段的污染源和环境因素都有... 详细信息

基于HSE管理体系下的工具式桩基钻孔平台解决了在通航航线纵横交错、航行船舶密度大、水上交通及超大构件运输的条件限制下施工效率低的问题,具有结构简单,系统自调节能力强,安装拆卸方便的特点;对项目实施阶段的污染源和环境因素都有针对性的保证措施,保护生态环境。工具式桩基钻孔平台的研发将使桩基施工工艺及桩基施工的集成化设备得到一次重大的革新。随着它在今后的大型跨江跨海桥梁桩基施工中的应用,桩基施工的集成化设备将变得更加完善,使用性更强,应用前景更广阔。

关键词：港珠澳大桥 HSE管理体系工具式桩基钻孔平台设计

炎症微环境中巨噬细胞对前体脂肪细胞作用的研究进展

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中华整形外科杂志 2019年第4期35卷 410-413页

作者：程浩栾杰付苏中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院乳房整形中心 100144

脂肪再生对脂肪移植后脂肪体积的保留起到重要作用,而前体脂肪细胞就是脂肪再生的重要来源。炎症微环境对于调控脂肪再生具有重要影响,作为这个过程的关键节点,巨噬细胞对前体脂肪细胞的影响是研究的热点。该文对国内外学者在相关领域... 详细信息

脂肪再生对脂肪移植后脂肪体积的保留起到重要作用,而前体脂肪细胞就是脂肪再生的重要来源。炎症微环境对于调控脂肪再生具有重要影响,作为这个过程的关键节点,巨噬细胞对前体脂肪细胞的影响是研究的热点。该文对国内外学者在相关领域的研究,对巨噬细胞在前体脂肪细胞的成脂分化、增殖以及存活方面影响等作一简要综述。

关键词：巨噬细胞前体脂肪细胞炎症微环境脂肪再生

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脂肪组织再生来源

中华整形外科杂志 2023年第5期39卷 571-574页

作者：冯家宜付苏栾杰中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院乳房整形中心北京100144

以往对脂肪细胞生成的研究多关注于体外诱导培养。近年来随着谱系示踪手段的更新,结合单细胞测序的迅猛发展,可以综合得到更加全面的不同状态下体内脂肪谱系的再生来源及分化轨迹的证据。该文综述了近年来体内脂肪组织再生细胞来源相关... 详细信息

以往对脂肪细胞生成的研究多关注于体外诱导培养。近年来随着谱系示踪手段的更新,结合单细胞测序的迅猛发展,可以综合得到更加全面的不同状态下体内脂肪谱系的再生来源及分化轨迹的证据。该文综述了近年来体内脂肪组织再生细胞来源相关研究。

关键词：脂肪组织脂肪细胞再生来源

利用小鼠活体子宫内电转基因技术研究N-Cadherin对大脑皮层神经元迁移的影响

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利用小鼠活体子宫内电转基因技术研究N-Cadherin对大脑皮层神经元...

作者：付苏雷新乡医学院

学位级别：硕士

背景高等动物的大脑皮层是一个由多层神经细胞构成的、高度复杂而有序的复合体,它的形成是神经细胞由内及外的装配过程,这个过程受到严格的调控以确保建立正确的、有功能的大脑皮层。有研究表明,通过条件型基因敲除技术在小鼠胚胎时敲除... 详细信息

背景高等动物的大脑皮层是一个由多层神经细胞构成的、高度复杂而有序的复合体,它的形成是神经细胞由内及外的装配过程,这个过程受到严格的调控以确保建立正确的、有功能的大脑皮层。有研究表明,通过条件型基因敲除技术在小鼠胚胎时敲除N-Cadherin基因,会导致大脑皮层出现分层混乱,完全失去正常的层结构,这说明N-Cadherin在皮层发育中有着不可替代的作用。小鼠子宫内电转基因技术是近年来发展起来的在活体内研究基因功能的重要方法,特别适用于中枢神经系统基因功能研究。目的建立小鼠活体子宫内电转基因方法,利用该方法结合RNA干扰技术研究N-Cadherin在小鼠大脑皮层形成过程中对神经元迁移的影响。方法1.小鼠活体子宫内电转基因：取怀孕15d的小鼠,以合适的电转条件对胎鼠大脑皮层室管膜进行定时定位活体电转基因,电转后24h取阳性胎脑,4%多聚甲醛固定,包埋后冷冻冠状切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化,荧光免疫组织化学法检测α-SMA的表达差异。2.活体电转报告基因质粒的选择：通过小鼠子宫内电转基因技术将pCAGGS-GFP, pEGFP-N1和pCL-GFP三种质粒转染到E15胎鼠的大脑皮层室管膜,通过统计三种质粒表达的荧光强度,筛选一个在活体表达荧光最强的质粒作为报告基因质粒;进一步将筛选出的质粒以不同浓度做电转比较,确定用于后续实验的合适浓度。3. N-Cadherin异常表达质粒(超表达质粒和RNA干扰质粒)的构建与验证：对购自Addgene的小鼠N-Cadherin超表达质粒进行测序,分析质粒结构;小鼠N-Cadherin的RNA干扰质粒,首先通过在线设计干扰片段,然后交由公司合成构建;将异常表达质粒转染HEK293T细胞后,应用免疫荧光及Western blotting检测N-Cadherin表达量的变化,以此验证质粒表达的效率和强度。4.通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,应用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征。5.为了研究N-Cadherin是否对干细胞向神经细胞分化具有重要作用,本研究将培养至第六代小鼠脂肪间充质干细胞诱导成为类神经细胞,应用RT-PCR检测诱导后N-Cadherin及其相关蛋白β-catenin、ADAM17、ADAM9等的表达变化。结果1.通过对各种转染条件的探索,成功建立了小鼠子宫内电转基因方法。GFP阳性表达胚胎的脑组织切片,显示GFP转染和正常区域的组织形态结构和a-SMA表达无显著差别。2.通过三种质粒pCAGGS-GFP、pEGFP-N1和pCL-GFP在活体表达GFP荧光强度进行比较,发现相同摩尔浓度下pCAGGS-GFP在小鼠大脑皮层的荧光表达最强;其作为报告基因的适合浓度为0.25μg/μL～0.5μg/μL。3.小鼠N-Cadherin的超表达质粒pEGFP-N-Cad转染HEK293T细胞后,细胞免疫荧光及Western blotting的结果表明,pEGFP-N-Cad能够实现小鼠N-Cadherin的超表达;同时由公司构建的两个干扰质粒N-Cad-shRNA1和shRNA2用同样的方法检测,结果表明两个干扰质粒均有干扰效果,但N-Cad-shRNA1干扰效果更优。4.通过小鼠子宫内电转基因方法成功实现了N-Cadherin在小鼠大脑皮层的抑制表达和超表达,发现抑制N-Cadherin的表达导致大脑皮层神经细胞停滞在VZ区及SVZ区,不能正常迁移;而N-Cadherin的超表达对大脑皮层神经细胞的迁移未见明显影响。5.将小鼠脂肪间充质干细胞体外诱导成类神经细胞后,观察到GFAP表达呈阳性,RT-PCR结果显示N-Cadherin表达显著升高,β-catenin、ADAM9和ADAM17表达显著降低。结论1.成功建立了以GFP作为报告基因的小鼠子宫内电转基因方法。2.筛选出一个在小鼠子宫内电转中适合作报告基因的质粒pCAGGS-GFP,并确定其最佳浓度。3.筛选出一个能够有效干扰小鼠N-Cadherin表达的干扰序列,并获得了相应的干扰质粒。4.在小鼠大脑皮层发育过程中,超表达N-Cadherin后未见对室管膜细胞迁移有明显影响,而干扰N-Cadherin的表达后则明显抑制其向外迁移,暗示N-Cadherin对室管膜神经细胞向外迁移具有重要作用。5.体外诱导小鼠脂肪间充质干细胞成为类神经细胞后,发现N-Cadherin基因表达显著升高,而β-catenin、ADAM9和ADAM17

关键词：子宫内电转 RNA干扰神经钙粘蛋白神经元迁移