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啤酒麦芽极限糊精酶、蛋白抑制因子分离纯化及其两者相互作用的研究

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啤酒麦芽极限糊精酶、蛋白抑制因子分离纯化及其两者相互作用的研...

作者：付燕秋中国海洋大学

学位级别：硕士

极限糊精酶作为影响生产高发酵度、淡爽型啤酒的关键因素，在啤酒酿造中起着举足轻重的作用。本研究对澳麦201106Gairdner绿麦芽中的极限糊精酶及其抑制因子进行了分离纯化，并对其两者性质作了初步研究。同时，在离体的缓冲液体系中，... 详细信息

极限糊精酶作为影响生产高发酵度、淡爽型啤酒的关键因素，在啤酒酿造中起着举足轻重的作用。本研究对澳麦201106Gairdner绿麦芽中的极限糊精酶及其抑制因子进行了分离纯化，并对其两者性质作了初步研究。同时，在离体的缓冲液体系中，初步探讨了两者之间的相互作用及还原剂DTT作用结合态极限糊精酶释放自由态酶的机制。该研究不仅为获得较高纯度极限糊精酶及其抑制因子提供了有力的理论依据和可行的工艺方法，亦为国内针对性地深入研究啤酒麦芽极限糊精酶性质提供了丰富的研究材料，还为啤酒糖化过程实现酶调控技术提供了可靠的理论基础。采用25%-35%-80%硫酸铵三步盐析、Sephadex G-25凝胶过滤柱层析、DEAEsepharose FF离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶过滤柱层析，纯化得到麦芽极限糊精酶，经SDS-PAGE和IEF凝胶电泳检测为单一条带，证明获得了极限糊精酶纯品，分子量大约为101.9kDa，等电点pI约为4.66;将每一步分离纯化得到的蛋白质样品，以酪蛋白为标准，依据福林-酚法测定蛋白质含量，同时以染色底物红普鲁兰法测定酶活力，计算各步骤的比活力、收率和纯化倍数，最终极限糊精酶的纯化倍数为164.2，回收率为16.5%。对麦芽极限糊精酶的酶学性质研究发现，其最适作用温度为50，热敏感，当温度超过50时，酶活力迅速下降;最适pH在5.5左右，当pH低至4.5时酶活力损失40%以上，在pH5.0-9.0的范围内基本保持稳定;此外，Ca、Mg、Mn等金属离子对该酶有显著的激活作用，尤其是工业中常用的淀粉酶保护剂Ca，在80下对极限糊精酶有良好的保护作用;对该酶的动力学性质研究表明，以支链淀粉为底物，该酶的K值为3.3426mg/mL，最大反应速度V值为0.8456mg/min mL。采用粗提取、热提取、羧甲基纤维素CM-52离子交换柱层析和SephadexG-100凝胶过滤柱层析，纯化得到两种极限糊精酶抑制因子混合物，分子量相近大约为15.8kDa，等电点pI分别约为6.76和7.28，纯化倍数为39.9，回收率为14.1%。对麦芽极限糊精酶抑制因子的性质研究发现，其对极限糊精酶的抑制最适pH近5.5，其在广泛的pH范围(pH4.0-8.0)内对极限糊精酶均有抑制作用;在温暖(40)的环境中，有牛血清白蛋白(BSA)和还原剂DTT存在时，无活性的极限糊精酶可恢复其活性，保温8h，活性可恢复约66.5%。在离体条件下对极限糊精酶调控机制的研究发现，在温暖(40)的环境，有牛血清白蛋白(BSA)存在的缓冲液体系中，还原剂DTT可使结合态极限糊精酶活力有一定程度的恢复;自由态极限糊精酶不是“巯基酶”;在离体的缓冲液体系中，推测出一种还原剂DTT作用结合态极限糊精酶释放自由态的假设，即DTT通过作用于被牛血清白蛋白(BSA)激活或修饰的结合态极限糊精酶，将其还原成自由态极限糊精酶。

关键词：啤酒麦芽极限糊精酶蛋白抑制因子分离纯化酶调控

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啤酒麦芽中极限糊精酶的分离纯化

中国食品学报 2015年第12期15卷 122-127页

作者：付燕秋管斌孔青赵旭乐余俊红董建军中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003 啤酒生物发酵工程国家重点实验室山东青岛266061

以发芽6 d的澳麦麦芽为原料,通过醋酸钠缓冲液萃取,硫酸铵分部盐析,Sephadex G-25凝胶过滤柱层析,DEAE Sepharose FF离子交换柱层析及Sephadex G-100凝胶柱层析,获得极限糊精酶,其比活力由3.40m U/mg提高到558.26 m U/mg,纯化倍数和回... 详细信息

以发芽6 d的澳麦麦芽为原料,通过醋酸钠缓冲液萃取,硫酸铵分部盐析,Sephadex G-25凝胶过滤柱层析,DEAE Sepharose FF离子交换柱层析及Sephadex G-100凝胶柱层析,获得极限糊精酶,其比活力由3.40m U/mg提高到558.26 m U/mg,纯化倍数和回收率分别为164.2倍和16.5%。该酶经SDS-PAGE检测分子质量约为101.9 ku,IEF检测等电点p I约为4.66,并且电泳图谱均显示单一条带,说明该纯化酶达到电泳纯。

关键词：啤酒麦芽极限糊精酶分离纯化

AB-8大孔树脂吸附黑枸杞中花青素行为研究

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林产化学与工业 2016年第4期36卷 79-86页

作者：王宏付燕秋韩静赵宇明刘栋沈阳药科大学制药工程学院辽宁沈阳110016 济南博纳生物科技公司山东济南250101

通过平衡吸附实验、等温吸附实验及柱吸附实验,研究了黑枸杞中花青素在AB-8大孔树脂中的吸附行为及吸附机理。结果表明:AB-8大孔树脂对花青素的吸附可用Elovich动力学模型描述,且吸附符合Freundlich及Langmuir等温吸附模型,Freundlich... 详细信息

通过平衡吸附实验、等温吸附实验及柱吸附实验,研究了黑枸杞中花青素在AB-8大孔树脂中的吸附行为及吸附机理。结果表明:AB-8大孔树脂对花青素的吸附可用Elovich动力学模型描述,且吸附符合Freundlich及Langmuir等温吸附模型,Freundlich模型的线性拟合性更好;此外,花青素的等温吸附焓变为正值且绝对值小于40 k J/mol,吉布斯自由能为负值,熵变为正,说明吸附过程为多层物理吸附,吸附可自发进行;由粒子内部扩散模型和Boyd模型可知吸附机理很复杂,主要受粒子扩散的影响;Adams-Bohart模型分析表明,在柱吸附分离纯化花青素过程中,应减小流动相的流量和床层高度,增加花青素质量浓度。

关键词：花青素动力学热力学吸附机理分离纯化

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锶掺杂棒状纳米羟基磷灰石的合成与表征

福州大学学报（自然科学版） 2010年第6期38卷 907-911页

作者：于佳俞建长付燕秋易小红福州大学材料科学与工程学院福建福州350108

以磷酸氢二铵、硝酸钙和硝酸锶为原料,利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)表面活性剂的水溶液形成的胶束为反应模板,采用水热法合成工艺,成功合成分散性较好的一维纳米掺锶羟基磷灰石(Sr-HAP).通过XRD、FT-IR以及TEM对样品的表征分析发现:... 详细信息

以磷酸氢二铵、硝酸钙和硝酸锶为原料,利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)表面活性剂的水溶液形成的胶束为反应模板,采用水热法合成工艺,成功合成分散性较好的一维纳米掺锶羟基磷灰石(Sr-HAP).通过XRD、FT-IR以及TEM对样品的表征分析发现:随着锶掺杂浓度的升高,样品的结构稳定性变低,其晶胞参数随之会有相应的升高,产物的尺寸很好地控制在25～65nm;检测结果表明,产物中不残留CTAB,且具有CO32-以及Sr2+等离子,类似于生物体内磷灰石的成分;产物均为长棒状结构.

关键词：羟基磷灰石一维纳米棒锶掺杂水热法

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一维纳米羟基磷灰石的制备与表征

中国陶瓷 2009年第10期45卷 34-36页

作者：于佳俞建长黄清明易小红付燕秋福州大学材料科学与工程学院福州350108

以磷酸氢二铵、硝酸钙为原料,利用CTAB表面活性剂的水溶液形成的胶束为反应模板,采用水热法合成工艺,在反应液pH=11,反应温度为150℃,反应时间为24h的条件下成功合成了高纯度的一维纳米羟基磷灰石,并提出其可能的形成机理。通过XRD,TEM,... 详细信息

以磷酸氢二铵、硝酸钙为原料,利用CTAB表面活性剂的水溶液形成的胶束为反应模板,采用水热法合成工艺,在反应液pH=11,反应温度为150℃,反应时间为24h的条件下成功合成了高纯度的一维纳米羟基磷灰石,并提出其可能的形成机理。通过XRD,TEM,FT-IR测试表征,发现制备的纳米棒长度为60～360nm,直径为15～25nm,轴径比为5～20,分散度高,具有与人体骨骼成分相近的结构。

关键词： HAP一维纳米材料 CTAB表面活性剂水热法表征

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正极材料磷酸铁锂的研究进展

当代化工研究 2018年第12期 8-9页

作者：于佳付燕秋青岛市产品质量检验技术研究所山东266000

以磷酸铁锂为正极材料的锂离子电池以其高容量、高环保、长寿命、低价格等特点,越来越受到研究者的青睐。文章总结并分析了近年来LiFePO4的市场动态、合成方法以及电化学性能的最新进展。最后作者对磷酸铁锂的产业化状况和发展趋势进行... 详细信息

以磷酸铁锂为正极材料的锂离子电池以其高容量、高环保、长寿命、低价格等特点,越来越受到研究者的青睐。文章总结并分析了近年来LiFePO4的市场动态、合成方法以及电化学性能的最新进展。最后作者对磷酸铁锂的产业化状况和发展趋势进行了展望。

关键词：正极材料磷酸铁锂制备方法改性研究

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液态悬浮发酵法生产红茶茶汤的工艺参数探索

中国食品学报 2010年第5期10卷 177-182页

作者：周昀陈躬瑞黄椿鑑付燕秋倪莉福州大学食品科学技术研究所福州350108

通过添加作为内源酶来源的茶鲜叶，对低档绿茶茶汤进行悬浮发酵生产红茶茶汤。以茶红素（TRs）和茶黄素（TFs）为评价指标，在单因素试验基础上做部分析因试验及扩充试验；使用JMP软件分析最佳工艺参数以及对产品中红茶色素影响较大的... 详细信息

通过添加作为内源酶来源的茶鲜叶，对低档绿茶茶汤进行悬浮发酵生产红茶茶汤。以茶红素（TRs）和茶黄素（TFs）为评价指标，在单因素试验基础上做部分析因试验及扩充试验；使用JMP软件分析最佳工艺参数以及对产品中红茶色素影响较大的几个因素。研究结果表明，在兼顾TRs和TFs的情况下，茶汤中二者含量达到最佳比例时的发酵条件是：发酵时间35min，通氧量26．5mL／min，温度30-35℃，pH从5．5逐渐升至6，且无需添加果胶酶。

关键词：红茶茶汤悬浮发酵低档绿茶茶鲜叶红茶色素

利用(NH_4)_2SO_4分步盐析法从麦芽中初步分离极限糊精酶

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食品与发酵工业 2013年第1期39卷 199-202页

作者：付燕秋王欣宏管斌孔青余俊红董建军候松珍中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003 青岛啤酒股份有限公司山东青岛266061

文中对极限糊精酶的(NH4)2SO4盐析法进了研究。从大麦芽中萃取得到的粗酶液,采用(NH4)2SO4盐析法进行粗分级提取,绘制盐析曲线,确定盐析法纯化极限糊精酶的方案,并研究了各方案对极限糊精酶纯化纯度和得率的影响。研究结果表明:盐析曲... 详细信息

文中对极限糊精酶的(NH4)2SO4盐析法进了研究。从大麦芽中萃取得到的粗酶液,采用(NH4)2SO4盐析法进行粗分级提取,绘制盐析曲线,确定盐析法纯化极限糊精酶的方案,并研究了各方案对极限糊精酶纯化纯度和得率的影响。研究结果表明:盐析曲线中饱和度分别为35%和80%时出现两个酶活峰,但80%饱和度时可以将绝大部分酶蛋白沉淀;分别采用一步法盐析(80%),二步法盐析(25%,80%),三步法盐析(25%,35%,80%)沉淀酶蛋白,其中三步法盐析可使极限糊精酶的纯度(A510/A280)达到1.635,纯化倍数和得率分别为8.8倍和49.5%,均优于其他两种方法。极限糊精酶盐析方案的优化可为其进一步分离纯化奠定基础。

关键词：大麦芽极限糊精酶 (NH4)2SO4盐析法盐析曲线

金黄色葡萄球菌和沙门氏菌在啤酒中生存情况的研究

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食品安全导刊 2022年第14期 87-89,94页

作者：付燕秋吕志敏王智于佳青岛市产品质量检验研究院青岛市产品质量检验技术研究所山东青岛266000

本文对啤酒中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的生长和存活进行了研究。在啤酒中分别接种定量的两种致病菌,静态培养,对其在培养期间的菌落数进行检测分析,并研究了pH值和储存温度对沙门氏菌的影响。结果表明,在中酒精度(2.5%vol~3.6%vol)和... 详细信息

本文对啤酒中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的生长和存活进行了研究。在啤酒中分别接种定量的两种致病菌,静态培养,对其在培养期间的菌落数进行检测分析,并研究了pH值和储存温度对沙门氏菌的影响。结果表明,在中酒精度(2.5%vol~3.6%vol)和高酒精度(≥4.0%vol)啤酒中,两者均不能生长;在无酒精啤酒(<0.5%vol)中,金黄色葡萄球菌迅速失活,沙门氏菌迅速生长,当pH值降低至4.0时,其生长停止;在5~25℃贮存条件下,温度升高,沙门氏菌在无酒精啤酒中生长加快。

关键词：啤酒沙门氏菌金黄色葡萄球菌生存