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靶向COX-2、AKT1和PI3Kp85基因的RNAi抑制胃腺癌SGC7901细胞侵袭迁移的体外实验研究

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靶向COX-2、AKT1和PI3Kp85基因的RNAi抑制胃腺癌SGC7901细胞侵袭...

作者：付彦超天津医科大学

学位级别：硕士

目的构建针对肿瘤相关基因AKT1、COX-2和PI3Kp85基因的shRNA重组腺病毒质粒表达载体,检测其在胃腺癌细胞株SGC-7901中对AKT1、COX-2和PI3Kp85基因表达的抑制作用,以及敲低靶基因的表达后,观察MMP-2、MMP-9、TIMP-2和VEGF的表达变化。在... 详细信息

目的构建针对肿瘤相关基因AKT1、COX-2和PI3Kp85基因的shRNA重组腺病毒质粒表达载体,检测其在胃腺癌细胞株SGC-7901中对AKT1、COX-2和PI3Kp85基因表达的抑制作用,以及敲低靶基因的表达后,观察MMP-2、MMP-9、TIMP-2和VEGF的表达变化。在体外实验中检测肿瘤细胞侵袭和迁移活性的变化,并进一步探讨COX-2和PI3K/AKT信号通路在胃腺癌侵袭迁移过程中的作用机制。方法本课题分两部分进行：第一部分设计可形成小干扰RNA的AKT1、COX-2和PI3Kp85 shRNA对应模板DNA序列,克隆至线性化质粒PEGFP6-1、PGENESIL-2、PEGFP6-4上,构建一个编码AKT1、COX-2和PI3Kp85三条shRNA的质粒表达载体。将此质粒亚克隆至腺病毒表达载体上,经酶切、测序鉴定正确后包装扩增并鉴定其病毒滴度,然后转染至SGC7901细胞中检测其转染率。第二部分在体外应用RNA干涉技术,以构建的重组腺病毒介导靶向AKT1、COX-2和PI3Kp85的shRNA转染人胃腺癌细胞系SGC-7901后,应用Realtime PCR和Western blot法检测目的基因的敲低情况,并用Western blot法检测RNAi敲低靶基因的表达后,COX-2及EGFR通路下游侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、TIMP-2和VEGF的蛋白表达变化。应用ELISA检测转染前后分泌到细胞外的MM9-2和MMP-9的浓度变化。应用划痕实验、Transwell实验、2-D和3-D的Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后侵袭迁移能力的变化。结果 1.通过应用定向克隆、同源重组等技术,获得一种同时包含靶向COX-2、PI3Kp85和AKT1三条RNA干扰序列的真核表达质粒,经酶切分析,测序鉴定表明构建成功后,扩增并亚克隆至重组腺病毒载体上,获得重组腺病毒质粒表达载体rAd5-C-A-P。由于重组腺病毒质粒表达载体上带有荧光蛋白表达框,所以通过转染SGC-7901后观察荧光蛋白表达情况,计算转染率>90%。 2. Realtime PCR和Western blot结果提示,转染AKT1、COX-2和PI3Kp85 shRNA后可明显敲低靶基因mRNA和蛋白的表达。在靶基因被下调后通过Western blot检测发现COX-2及PI3K/AKT信号通路下游侵袭相关因子MMP-2、MMP-9和VEGF的表达水平均明显降低,而TIMP-2表达上调。应用ELASA检测发现rAd5-C-A-P转染组细胞培养液中MMP-2和MMP-9明显减低,划痕实验显示与对照组和无义序列组相比,rAd5-C-A-P转染组细胞迁移运动能力明显减弱,Transwell体外侵袭实验结果显示对照组和无义序列组穿过细胞数分别为(105±4)、(102.5±6.4),而rAd5-C-A-P转染组(26.4±4.6) (p<0.001).2-D的Matrigel基质生长实验显示对照组和无义序列组细胞呈正常形态贴壁生长并融合成片,而rAd5-C-A-P转染组细胞贴壁能力与迁移能力均明显减低,3-D的Matrigel基质生长实验显示与对照组和无义序列组比较,rAd5-C-A-P转染组细胞形成的细胞团块较小(p<0.001)。结论 1.成功构建靶向AKT1、COX-2和PI3Kp85的重组腺病毒质粒表达载体,其能在体外高效转染肿瘤细胞。 2.靶向AKT1、COX-2和PI3Kp85的RNA干扰技术可以序列特异性地抑制SGC7901细胞的AKT1、COX-2和：PI3Kp85表达,在体外实验中对胃腺癌的侵袭迁移起到了明显的抑制作用。因此靶向AKT1、COX-2和PI3Kp85的联合基因治疗有望成为胃癌基因治疗的新措施。

关键词： RNA干扰胃腺癌侵袭迁移基因治疗

基于线性霍尔的交流永磁同步电机伺服驱动系统

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基于线性霍尔的交流永磁同步电机伺服驱动系统

作者：付彦超哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

交流永磁同步电机具有功率密度高、输出转矩大、控制相对简单等优点,在航空航天、国防及家用电器等领域中得到了广泛地应用。随着新结构的电机及新型控制策略的不断涌现,电机及其驱动器的紧凑化、小型化及轻量化已成为当前交流永磁同步... 详细信息

交流永磁同步电机具有功率密度高、输出转矩大、控制相对简单等优点,在航空航天、国防及家用电器等领域中得到了广泛地应用。随着新结构的电机及新型控制策略的不断涌现,电机及其驱动器的紧凑化、小型化及轻量化已成为当前交流永磁同步电机伺服驱动系统的发展趋势。本文针对交流永磁同步电机伺服驱动系统主要做了以下四方面的研究工作: 利用线性霍尔元件设计了一种与电机紧密结合的转子位置传感器。通过优化传感器内的永磁体磁环获得了正弦形状的气隙磁场;对该传感器进行了误差分析,并在硬件上采取相应措施进行误差补偿;在不同的温度下校验了该传感器的精度。应用多种判据对传感器误差的分布规律进行检验,并以检验结果为依据,分别针对DSP解码出的位置信号和传感器的输出信号设计了卡尔曼滤波器和扩展的卡尔曼滤波器来消除信号中的噪声干扰;通过综合对比两种滤波器的性能,最终选定卡尔曼滤波器来提高转子位置的量测精度。设计PMSM伺服系统中电流环的内模控制器,以实现对电机交、直轴电压的完全解耦控制;设计速度环的PI调节器;利用解码出来的电机转子位置信号实现PMSM的高精度矢量控制。针对电流环内模控制理器对模型参数较敏感的缺点,利用波波夫超稳定性理论设计PMSM定子电阻和电感的模型参考自适应控制系统,使其能够对定子电阻及电感进行准确辨识,进而实现电流内模自适应控制,提高了PMSM伺服系统的鲁棒性和控制精度。

关键词：永磁同步电机线性霍尔卡尔曼滤波器内模控制模型参考自适应

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大型桥梁工程施工风险管理研究

大型桥梁工程施工风险管理研究

作者：付彦超郑州大学

学位级别：硕士

本文从大型桥梁施工的实际出发,结合现有的风险管理理论,在构建大型桥梁施工风险管理流程的基础上,从桥梁施工风险因素的识别、风险估计与评价、风险应对等方面对桥梁施工风险管理进行了较为系统的研究,并从工程的实用性和可操作性角度... 详细信息

本文从大型桥梁施工的实际出发,结合现有的风险管理理论,在构建大型桥梁施工风险管理流程的基础上,从桥梁施工风险因素的识别、风险估计与评价、风险应对等方面对桥梁施工风险管理进行了较为系统的研究,并从工程的实用性和可操作性角度,提出了大型桥梁施工风险管理的新方法。本文主要研究成果如下：（1）结合桥梁施工特点和现有风险的定义,给出了桥梁施工风险的概念,并在博德事故因果连锁理论的基础上,建立了桥梁施工风险致因模型,从而为桥梁施工风险管理的研究提供了理论基础。（2）应用WBS-RBS方法对桥梁施工风险进行识别研究。首先在深入研究国内外建设信息分类体系的基础上,提出了桥梁施工信息分类体系BCICS,建立了桥梁施工期WBS的统一框架;然后将风险按照来源分解建立RBS,进而构建RBM风险分解矩阵,最后应用名义群体法（NGT）判断RBM元素,从而辨识出风险。这种模块化的风险分析思想,使风险管理人员目标明确,且提出的桥梁施工信息分类体系BCICS有助于风险信息的交流和计算机存储。（3）将贝叶斯网络引入桥梁施工风险概率估计中,建立了基于贝叶斯网络的桥梁施工风险概率估计模型,该模型不仅能够计算出风险事件的发生概率,确定风险概率等级,而且还可以找出导致风险事件发生的关键风险因素,为风险应对提供科学依据。（4）在对桥梁施工风险损失分类研究的基础上,采用定性的损失估计方法对每种损失进行分级描述,然后通过建立风险损失综合估计模型,获得施工风险损失的综合描述。（5）依据提出的风险概率估计和损失估计模型,采用基于ALARP的风险矩阵评价方法,对桥梁施工风险进行评价和决策。（6）考虑到风险问题的复杂性、不确定性以及人认知的模糊性,本文在传统AHP的基础上,建立了更为实用的基于区间数判断矩阵的AHP群体决策方法用于风险应对措施的优先排序。

关键词：大型桥梁施工风险 WBS-RBS 贝叶斯网络区间数判断矩阵

游艇活动水域碰撞风险度量与避碰决策方法研究

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游艇活动水域碰撞风险度量与避碰决策方法研究

作者：付彦超武汉理工大学

学位级别：硕士

随着我国国民经济的崛起,人民对美好生活的向往和追求,带来游艇产业的快速发展,特别是小型载客游艇产业的发展越来越快。然而,由于我国水上旅游产业的发展尚处于起步阶段,相关的管理经验及行业技术标准不够完善,在巨大旅游需求的推动下... 详细信息

随着我国国民经济的崛起,人民对美好生活的向往和追求,带来游艇产业的快速发展,特别是小型载客游艇产业的发展越来越快。然而,由于我国水上旅游产业的发展尚处于起步阶段,相关的管理经验及行业技术标准不够完善,在巨大旅游需求的推动下,现阶段国内大部分游艇活动水域的营运安全承受着越来越大的压力。同时,国内游艇活动水域范围受限、通航环境复杂及不同营运公司游艇航线间交叉交汇的状况普遍,加之小型游艇具有吨位小、吃水浅、航行速度快及抗风浪能力弱等诸多特性,导致了游艇航行过程中的风险增加,特别是船舶碰撞事故发生的概率较高,对游客生命财产危害较大。本文通过分析游艇及其碰撞的主要特征,探究游艇活动水域碰撞事故的主要致因,建立小型游艇碰撞风险评估体系,构建小型游艇碰撞风险识别、度量及预测模型;提出小型游艇多船协同分布式避碰决策方法,实现小型游艇航行线路设计及避碰轨迹可视化。本文主要研究工作:(1)在界定游艇及其活动水域的基础上,分析游艇及其活动水域的主要特征,研究游艇碰撞行为特征,借鉴国内外典型游艇碰撞事故案例,分析游艇碰撞事故特征及主要致因。(2)运用综合安全评估方法建立小型游艇碰撞风险评估体系,基于模糊层次分析法构建小型游艇碰撞风险因素识别分析模型,提取小型游艇碰撞风险关键要素,采用贝叶斯网络建立小型游艇碰撞风险度量模型,基于动态贝叶斯网络构建小型游艇碰撞风险预测模型。(3)分析游艇活动水域交通冲突情景特征和交通行为特征,结合小型游艇运动特征,运用船舶操纵理论,针对小型游艇运动态势进行建模,设置小型游艇安全区域,分析小型游艇转向避碰情景;结合国际海上避碰规则,运用计算机仿真技术,提出小型游艇多船协同分布式避碰决策方法,在此基础上对小型游艇航行线路进行设计与规划。(4)以蓬莱游艇活动水域为算例,运用风险识别模型对蓬莱水域小型游艇碰撞风险因素进行辨识与提取,采用风险度量模型计算各条件下小型游艇的碰撞概率,运用风险预测模型分析小型游艇碰撞风险随时间的变化规律;基于所提出的小型游艇多船协同分布式避碰决策方法及航路设计方法进行避碰仿真,实现小型游艇避碰轨迹可视化,验证避碰决策方法的有效性。本文研究成果可以降低游艇航行时的碰撞风险,保护游艇乘客的人身财产安全,对保障游艇活动水域的安全和高效具有较好的理论和现实意义,为有关部门的监督管理和旅游业的健康发展提供技术支撑。

关键词：小型游艇碰撞风险度量贝叶斯网络避碰决策

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胃癌血管生成及抗血管生成治疗的研究进展

世界华人消化杂志 2008年第18期16卷 2012-2018页

作者：付彦超张庆瑜天津医科大学总医院消化科天津市300052

作为肿瘤间质组成的一部分,肿瘤内血管生成不仅为原发肿瘤生长所必需,也是肿瘤细胞向远处播散的必备条件之一.超微结构和免疫组化的观察发现,不同人类肿瘤组织中的血管密度和数量与肿瘤的侵袭转移潜能密切相关.最近许多研究证实了血管... 详细信息

作为肿瘤间质组成的一部分,肿瘤内血管生成不仅为原发肿瘤生长所必需,也是肿瘤细胞向远处播散的必备条件之一.超微结构和免疫组化的观察发现,不同人类肿瘤组织中的血管密度和数量与肿瘤的侵袭转移潜能密切相关.最近许多研究证实了血管生成与胃癌侵袭性之间的联系,同时也有许多研究证实抑制血管生成能显著抑制肿瘤的生长及转移,在胃癌的治疗实验中已初步显示出良好的应用前景.

关键词：胃癌血管生成血管生成抑制

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郑州市农村生活用水浪费的原因及改善措施

安徽农业科学 2009年第16期37卷 7574-7575,7578页

作者：刘婵玉付彦超胡彩虹郑州大学水利与环境学院河南郑州450001

通过问卷调查方式,对郑州市农村生活用水浪费原因进行了分析。提出了加强节约用水宣传与教育、制定合理水价体系、推广使用节水器具及做好供水管网防护等改善措施,以期推动郑州市农村节水工作的开展。

关键词：农村生活用水原因改善措施

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受限水域超大型船舶富裕水深定量计算研究

哈尔滨工程大学学报 2018年第9期39卷 1491-1497页

作者：郭威治刘敬贤刘文付彦超胡佑希刘钊武汉理工大学航运学院湖北武汉430063 武汉理工大学国家水运安全工程技术研究中心湖北武汉430063

针对国内外港口UKC计算方法和经验取值的差异性问题,本文提出了一种基于数据驱动并采用高斯混合模型和期望最大算法的UKC计算方法和优化取值标准,并以2009—2016年曹妃甸港超大型船舶进出港数据为算例,提出了受限水域不同吨位、不同装... 详细信息

针对国内外港口UKC计算方法和经验取值的差异性问题,本文提出了一种基于数据驱动并采用高斯混合模型和期望最大算法的UKC计算方法和优化取值标准,并以2009—2016年曹妃甸港超大型船舶进出港数据为算例,提出了受限水域不同吨位、不同装载率下的超大型船舶UKC的取值标准,运用缩尺船模、实船试验的方法对取值结果进行了验证。结果表明:不同吨位、不同装载率下超大型船舶的UKC应采取不同的取值区间,计算提出的UKC计算和优化取值结果低于目前超大型船舶进出港要求,对实现船型大型化和航运效益与安全的最优化具有重要的实际意义。

关键词：水路运输超大型船舶受限水域富裕水深数据驱动高斯混合模型实船试验缩尺船模试验

靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达

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中华实验外科杂志 2009年第7期26卷 880-883页

作者：张靖付彦超康春生张庆瑜天津医科大学总医院消化科 300052

目的构建靶向性蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶-2（COX-2）的短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体，观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达。方法利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（pGSadeno—A＋C），经酶切及... 详细信息

目的构建靶向性蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶-2（COX-2）的短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体，观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达。方法利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（pGSadeno—A＋C），经酶切及测序鉴定后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组rAd5-A＋C腺病毒，并测定病毒的滴度。体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后，Real—timePCR和蛋白印迹分别检测Akt1和COX-2mRNA和蛋白质的表达。结果成功构建rAd5．A＋C重组腺病毒，测定包装的病毒滴度为1．0×10^10pfu／ml。转染组Akt1和COX-2mRNA表达明显下调，其ACt值分别是（12．26±0．05）和（5．41±0．09），比rAd5-HK空载组（10．63±0．02）、（3．75±0．08）和对照组（10．57-1-0．02）、（3．73±0．08）增高（P〈0．01），而空载组和对照组比较ACt值无明显变化（P〉0．05）。同样转染组Akt1和COX-2蛋白表达量与空载组和对照组比较分别下调70．5％和63．7％（P〈0．01），空载组和对照组比较Akt1和COX-2蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向性Akt1和COX-2的shRNA腺病毒载体可以特异性抑制Akt1和COX-2的表达，可能成为胃癌靶向性Akt1和COX-2基因治疗的新策略。

关键词：胃癌蛋白激酶B1 环氧合酶2 短发夹RNA 腺病毒载体

恩替卡韦分散片治疗慢性乙型病毒性肝炎临床疗效分析

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当代医学 2017年第2期23卷 109-110页

作者：付彦超驻马店市西平县第一人民医院消化内科河南驻马店463900

目的观察恩替卡韦分散片对慢性乙型病毒性肝炎的临床疗效及临床不良反应。方法将100例慢性乙型病毒性肝炎患者随机分为治疗组和对照组,各50例,对照组在护肝等基础治疗上口服恩替卡韦片,治疗组在护肝等基础治疗上口服恩替卡韦分散片;持... 详细信息

目的观察恩替卡韦分散片对慢性乙型病毒性肝炎的临床疗效及临床不良反应。方法将100例慢性乙型病毒性肝炎患者随机分为治疗组和对照组,各50例,对照组在护肝等基础治疗上口服恩替卡韦片,治疗组在护肝等基础治疗上口服恩替卡韦分散片;持续监测6个月,记录两组患者治疗前后总胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白的改善情况,统计两组患者HBV-DNA阴转率、HBe Ag阴转率和谷丙转氨酶复常率,及两组患者的药物不良反应率,比较两组患者的治疗效果。结果疗程结束后,两组患者治疗前后的胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白比较,差异无统计学意义;HBV-DNA阴转率、HBe Ag阴转率和谷丙转氨酶复常率三项指标比较,差异无统计学意义,两组均未出现严重不良反应。结论对于慢性乙型病毒性肝炎抗病毒治疗中,国产恩替卡韦分散片治疗效果与进口恩替卡韦片相当,均具有显著抗病毒疗效,无临床不良反应,并且恩替卡韦分散片费用更低,具有替代与推广价值。

关键词：恩替卡韦分散片慢性乙型病毒性肝炎疗效观察