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固醇调节元件结合蛋白2信号通路与非酒精性脂肪性肝病

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中国生物化学与分子生物学报 2017年第10期33卷 1014-1020页

作者：兰佳欣付常振刘庆平大连大学生命科学与技术学院辽宁省糖脂代谢研究重点实验室辽宁大连116622

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以肝细胞内甘油三酯和胆固醇等脂毒性脂肪过度沉积为主要特征的一种临床获得性代谢综合征。最新研究表明,NAFLD向非酒精性脂肪肝炎(NASH)进展时,肝内胆固醇积累可能较甘... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以肝细胞内甘油三酯和胆固醇等脂毒性脂肪过度沉积为主要特征的一种临床获得性代谢综合征。最新研究表明,NAFLD向非酒精性脂肪肝炎(NASH)进展时,肝内胆固醇积累可能较甘油三酯更具有细胞毒性风险。固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element-binding protein 2,SREBP2)是脂质代谢重要的核转录因子之一,主要调控胆固醇的生物合成和体内平衡。SREBP2及其靶基因调控的胆固醇异常是引起非酒精性脂肪肝病发生发展的重要因素之一。因此,认识SREBP2信号通路中,上下游各因素的表达调控作用与NAFLD发病机制之间关系,就显得非常重要。本文总结了受SREBP2调控表达的靶基因的特点,着重介绍SREBP2调控胆固醇体内合成与平衡的信号通路与NAFLD发病机制之间关系,为研究和指导治疗NAFLD及其代谢性疾病提供新的思路。

关键词：非酒精性脂肪性肝病固醇调节元件结合蛋白2 胆固醇靶基因

牛过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因第5外显子多态性与胴体、肉质性状的相关性

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农业生物技术学报 2010年第4期18卷 713-718页

作者：樊月圆昝林森王洪宝付常振西北农林科技大学动物科技学院国家肉牛改良中心

利用PCR-SSCP结合DNA测序方法对牛(Bostaurus)6个品种(秦川牛、南阳牛、郏县红牛、鲁西牛、安格斯和夏南牛)共计717个个体的过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因第5外显子的SNP位点进行检测,并分析了该SNP位点与秦川牛的部分胴体、... 详细信息

利用PCR-SSCP结合DNA测序方法对牛(Bostaurus)6个品种(秦川牛、南阳牛、郏县红牛、鲁西牛、安格斯和夏南牛)共计717个个体的过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因第5外显子的SNP位点进行检测,并分析了该SNP位点与秦川牛的部分胴体、肉质性状的相关性。结果显示,在PPARα基因第5外显子的138bp处发生T→C突变。卡方检验结果显示,秦川牛和南阳牛处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P0.05)。多态信息含量(PIC)显示,这6个品种均属于中度多态(0.25

关键词：过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因 SNPs 肉质性状分子标记

不同代次牛成肌细胞的诱导分化及相关基因的表达分析

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西北农业学报 2014年第9期23卷 1-7页

作者：张乐刘扬付常振王洪宝昝林森西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 国家肉牛改良中心陕西杨凌712100

利用初生荷斯坦牛的成肌细胞,在不同代次以含体积分数为2%马血清的DMEM进行诱导分化,在之后0、2、4、6、8、10d观察细胞的形态变化并收集细胞提取总RNA,检测成肌相关基因的表达情况,为进一步研究牛肌肉发生过程及相关基因的表达调控提... 详细信息

利用初生荷斯坦牛的成肌细胞,在不同代次以含体积分数为2%马血清的DMEM进行诱导分化,在之后0、2、4、6、8、10d观察细胞的形态变化并收集细胞提取总RNA,检测成肌相关基因的表达情况,为进一步研究牛肌肉发生过程及相关基因的表达调控提供依据。同时利用实时荧光定量PCR分别检测肌性相关基因MyoD(生肌决定因子)、MyoG(肌细胞生成素)以及非肌性相关基因A-FABP(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白)表达水平的变化。研究表明:1各代细胞在诱导培养4d后开始有肌管形成,其后越来越多,8d时达高峰。2成肌细胞向成熟肌细胞分化过程中,MyoD、MyoG、A-FABP基因都呈先上升然后下降的趋势。3高代次成肌细胞比低代次细胞增殖慢,而且在诱导分化后,肌管的数目明显变少;MyoD、MyoG、A-FABP随着代次的升高而下降。故推断MyoD、MyoG以及A-FABP基因会在成肌分化开始后的不同阶段被激活,从而发挥不同的调控作用,而且随着传代次数的增加成肌细胞的分化能力减弱。

关键词：牛成肌细胞诱导分化 A-FABP MyoD MyoG

秦川牛CD36基因多态性检测及其与肉用性状的相关性研究

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畜牧兽医学报 2014年第7期45卷 1060-1067页

作者：张松昝林森王洪宝王国庆付常振张亚冉梅楚刚邓冠群西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100 国家肉牛改良中心杨凌712100

旨在研究秦川牛脂肪酸转位酶基因(Cluster of differentiation 36,CD36)的多态性及其对秦川牛肉用性状的影响,以探索改善秦川牛肉用性状的分子育种方法。本研究选取288头同等饲养条件下的24月龄健康秦川牛母牛,采用DNA测序技术检测了CD3... 详细信息

旨在研究秦川牛脂肪酸转位酶基因(Cluster of differentiation 36,CD36)的多态性及其对秦川牛肉用性状的影响,以探索改善秦川牛肉用性状的分子育种方法。本研究选取288头同等饲养条件下的24月龄健康秦川牛母牛,采用DNA测序技术检测了CD36基因的多态性,并结合PCR-RFLP技术对所发现的多态位点进行基因型分型,然后将不同基因型与秦川牛肉用性状(背膘厚、眼肌面积、眼肌深度和肌内脂肪含量)进行关联性分析。结果表明,在CD36基因上发现4个多态位点,分别命名为SV1、SV2、SV3和SV4。连锁不平衡和单倍型分析表明,SV1-SV2为连锁位点,与SV3为强连锁,SV4与其他3个位点均为弱连锁,单倍型ITA属于优势单倍型(频率为60.4%)。关联分析结果表明,除SV4在眼肌深度指标中存在显著性差异外,单个多态位点的基因型之间和不同多态位点的组合基因型之间均在肌内脂肪含量指标中存在显著性或极显著性差异。其中,IITTAG型个体在肌内脂肪含量指标中显著低于IWTCAA型个体(P<0.05),极显著低于WWCCAA型个体(P<0.01)。结果提示,CD36基因对秦川牛肉用性状有显著的影响,可通过人工选择降低群体中IITTAG型个体的比例以改善肉用性状。

关键词：秦川牛 CD36 PCR-RFLP 多态性单倍型肉用性状

piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2013年第9期41卷 8-14,20页

作者：杨宁昝林森成功付常振李耀坤西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 国家肉牛改良中心陕西杨凌712100

【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨... 详细信息

【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞。【结果】经过酶切和测序鉴定,载体pPB-AFABP构建正确;PB二元系统的阳性克隆数明显多于转座子载体pPB-AFABP的克隆数;PCR鉴定结果表明,牛成纤维细胞中存在目的基因A-FABP。【结论】成功构建了转基因表达载体pPB-AFABP,且证实PB转座子在牛成纤维细胞中具有较高的转座活性。

关键词： piggyBac转座子 A-FABP基因表达载体牛成纤维细胞

腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2)过表达载体的构建与鉴定

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农业生物技术学报 2013年第8期21卷 993-1001页

作者：付常振刘扬昝林森王虹成功王嘉力西北农林科技大学动物科技学院国家肉牛改良中心

固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2)属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,在胆固醇的代谢过程中具有重要的调控作用。克隆秦川牛(Bos taurus)的SREBP2基因并构建相应腺病毒过表达载体... 详细信息

固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2)属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,在胆固醇的代谢过程中具有重要的调控作用。克隆秦川牛(Bos taurus)的SREBP2基因并构建相应腺病毒过表达载体,包装扩繁获得高滴度腺病毒,对于在细胞水平上研究SREBP2基因的功能和作用机制具有重要作用。本研究以秦川牛脂肪组织为实验材料,提取总RNA并反转录为cDNA,依据GenBank收录的牛的SREBP2基因(Accession ***001205600)mRNA序列设计引物,克隆出SREBP2基因编码区(coding sequence,CDS)全长。将SREBP2基因与穿梭载体连接构建pAdTrack-CMV-SREBP2表达载体,用PmeⅠ分别酶切线性化pAdTrack-CMV-SREBP2和空白对照pAdTrack-CMV载体并转化含有骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态进行同源重组,得到腺病毒重组载体pAd-SREBP2和pAd-CMV,分别用PacⅠ酶切后胶回收DNA大片段,并将回收产物转染293A细胞包装得到腺病毒Ad-SREBP2和Ad-CMV,增殖并提高病毒滴度,得到高滴度病毒后,用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定显示Ad-SREBP2和Ad-CMV的病毒滴度分别为7×108和1.3×109GFU/mL。将Ad-SREBP2和Ad-CMV腺病毒侵染秦川牛前体脂肪细胞检测病毒的有效性,实时定量PCR检测结果显示,侵染48h时SREBP2基因的表达量提高了102.3倍。本研究成功克隆了秦川牛的SREBP2基因,构建了病毒重组体,包装增殖获得了高滴度病毒,为在细胞水平上基因功能的研究提供了基础资料。

关键词：秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2) 胆固醇腺病毒

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磺基转移酶SULT在疾病中的作用

生理科学进展 2019年第5期50卷 381-386页

作者：梁健王欢付常振武官敏陈丽姗韩晓菲大连大学生命科学与技术学院辽宁省糖脂代谢研究重点实验室

硫酸化(sulfation)是人体内的主要共轭途径之一,它负责脱毒并从宿主体内清除有毒外源性化学物质和内源性小分子。人体内硫酸化反应主要由胞浆磺基转移酶(sulfotransferase,SULT)超家族成员催化的,此反应对于维持体内内源性小分子与外源... 详细信息

硫酸化(sulfation)是人体内的主要共轭途径之一,它负责脱毒并从宿主体内清除有毒外源性化学物质和内源性小分子。人体内硫酸化反应主要由胞浆磺基转移酶(sulfotransferase,SULT)超家族成员催化的,此反应对于维持体内内源性小分子与外源性化合物的稳态具有重要作用。本文结合国内外关于SULT的报道,综述了SULT对癌症、脂质代谢紊乱等疾病的重要作用,最后对SULT的发展趋势和应用前景做出了展望。

关键词：硫酸化磺基转移酶SULT 分类与分布疾病研究

基于“双一流”建设背景下生物技术专业课程体系的改革与探索

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国际公关 2020年第12期 202-203页

作者：迟彦任飞姚子昂侯义龙付常振辽宁师范大学生命科学学院大连大学生命科学与技术学院辽宁师范大学出版社

在国家"双一流"建设背景下,大连大学生命科学学院以生物技术专业课程建设为抓手,以实践教学为着眼点,以社会需求为导向,通过(1)增加实践应用类课程学时;(2)设置贯穿上中下游的综合性实践课程;(3)拓展应用型实践课程教学体系以及(4)增设... 详细信息

在国家"双一流"建设背景下,大连大学生命科学学院以生物技术专业课程建设为抓手,以实践教学为着眼点,以社会需求为导向,通过(1)增加实践应用类课程学时;(2)设置贯穿上中下游的综合性实践课程;(3)拓展应用型实践课程教学体系以及(4)增设本科生科研实训实践教学环节等措施制定多维化的实践课程体系四个方面的改革与探索,为培养具有较强实践能力、创新能力和职业技能可持续发展的高级生物技术应用型人才奠定了良好的基础,为提高本科教学质量和学校创一流建设贡献力量。

关键词：双一流教学改革实践课程体系

慢病毒介导CD36基因沉默细胞株的构建及其对caveolin-1蛋白表达的影响

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生物工程学报 2018年第1期34卷 110-121页

作者：李敬达余承洁王仁军付常振修志龙刘庆平大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116024 大连大学生命科学与技术学院辽宁省糖脂代谢重点实验室辽宁大连116600

CD36作为重要的清道夫受体密切参与了巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取作用,为了进一步研究CD36的功能,本文利用慢病毒介导的shRNA干扰技术,构建了CD36基因沉默巨噬细胞(J774A.1)株,并以此为模型分析了CD36在caveolin-1蛋白表达过程中... 详细信息

CD36作为重要的清道夫受体密切参与了巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取作用,为了进一步研究CD36的功能,本文利用慢病毒介导的shRNA干扰技术,构建了CD36基因沉默巨噬细胞(J774A.1)株,并以此为模型分析了CD36在caveolin-1蛋白表达过程中的作用。首先,针对CD36基因序列设计合成5条shRNA片段,并构建得到pLKO.1-CD36-shRNA慢病毒干扰载体,测序鉴定后与psiCHECK-Ⅱ-CD36载体共转染入293T细胞中,筛选出有效的CD36-shRNA。将慢病毒干扰载体与病毒包装质粒共转染入293T细胞,包装得到慢病毒颗粒,之后感染J774A.1细胞,经嘌呤霉素筛选后得到CD36基因沉默稳转细胞株。Western blotting及激光共聚焦检测结果表明CD36基因沉默效率达90%,并且伴随着CD36的基因沉默,与之结合的DiI-oxLDL也随之大幅降低,证明构建成功具有良好生物学活性的CD36基因沉默细胞株。最后,抑制剂处理及oxLDL给药刺激实验结果表明,CD36的基因沉默能够显著降低JNK及ERK的磷酸化水平,进而抑制了caveolin-1的蛋白表达,表明CD36能够经由JNK及EKR信号传导调节caveolin-1的蛋白表达。

关键词： CD36受体 shRNA基因干扰氧化低密度脂蛋白 Caveolin-1 巨噬细胞