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作者：仇治梅遵义医科大学

学位级别：硕士

研究背景:冠状动脉疾病（Coronary artery disease,CAD）是造成全球范围内死亡的最主要原因,因为它阻塞了流向心肌的基本血液流动,导致心肌缺血或心肌梗死（myocardial infarction,MI）。虽然可以通过药物溶栓、介入治疗或外科搭桥等再... 详细信息

研究背景:冠状动脉疾病（Coronary artery disease,CAD）是造成全球范围内死亡的最主要原因,因为它阻塞了流向心肌的基本血液流动,导致心肌缺血或心肌梗死（myocardial infarction,MI）。虽然可以通过药物溶栓、介入治疗或外科搭桥等再灌注手段来实现血运重建,但仍有部分患者因冠脉微循环功能障碍而导致心肌灌注不足或无灌注。因此,如何促进MI后血管新生以重新建立缺血性心肌的血液供应尤为重要。成年哺乳动物心脏有微弱的再生能力,但这种微弱的再生能力通常不足以在心脏损伤后产生具有临床意义的心肌修复。不同的是,新生小鼠心脏在受到损伤时具有强大的自我修复能力。心肌再生的关键因素之一是受损组织的血运重建。在正常心脏中,几乎每个心肌细胞旁都有一根毛细血管,内皮细胞与心肌细胞的比值为3:1。表明在新生的早期就建立了冠脉微血管网络。因此,解构新生小鼠损伤修复中调控血管新生的信号分子及相关通路对改善成人缺血性心脏病患者的预后具有关键影响。近年越来越多的研究表明非编码RNA（Non-codingRNA,ncRNA）是心血管疾病发生发展的重要参与者。目前已有文献报道多种微小RNA（microRNA,miRNA）和长链非编码RNA（Long non-codingRNA,LncRNA）在小鼠新生阶段血管新生中发挥了重要作用,而ncRNA家族的另一成员环状RNA（CircularRNA,CircRNA）是否参与了调控新生阶段的血管新生过程未见报道。通过高通量测序技术分析心脏不同发育阶段或生理病理状态下CircRNA表达情况,发现新生鼠和成年鼠心脏中存在大量差异表达的CircRNA,且不同生理病理状态下CircRNA的表达丰度不同,表明CircRNA与心脏发育、生理和病理过程有着非常密切的关系。本研究通过新生鼠与成年鼠心脏的CircRNA表达谱筛选分析,筛选出环状RNA CircERBB2IP并探讨其作用机制。第一部分环状RNA的筛选及其对乳鼠心脏再生的影响目的:1、筛选、验证并鉴定新生及成年小鼠心脏中差异表达的CircRNA并分析其基本特征。2、体内实验观察敲低CircERBB2IP对乳鼠心肌再生的影响。方法:1、筛选并鉴定环状RNA:通过新生鼠及成年鼠心脏中CircRNA表达谱筛选分析,筛选出环状RNA CircERBB2IP,q RT-PCR检测CircERBB2IP在心脏组织出生后不同时间点（P1、P7、成年鼠）的表达情况。通过设计跨越CircRNA特异性接头序列的q PCR引物,验证其扩增曲线及溶解曲线。Sanger测序确定其环化位点及环化位点序列。RNA酶R（RNase R）检测CircRNA的稳定性,胞质胞核分离实验确定CircRNA的亚细胞定位。2、结扎左冠状动脉前降支建立乳鼠心肌梗死模型,将表达靶向CircERBB2IP的shRNA的ADV载体或空载体注入到左心室心肌中,观察敲低CircERBB2IP对乳鼠心肌梗死后心功能、纤维化程度、心肌细胞增殖及血管生成能力的影响。结果:1、通过新生鼠及成年鼠心脏中CircRNA表达谱筛选出CircERBB2IP,q RT-PCR结果证实在心脏发育过程中,小鼠心脏组织的CircERBB2IP表达显著降低。2、PCR扩增结果提示CircRNA引物的溶解曲线为单峰,Tm值在正常范围之内,电泳条带单一,分子量大小正确,Sanger测序结果为单峰,环化位点正确。RNase R消化降解后,线性ERBB2IP的mRNA水平显著降低,而CircERBB2IP能够抵抗RNase R。胞质胞核分离实验表明CircERBB2IP主要定位于细胞质。3、在乳鼠心肌梗死模型中,与注射对照腺病毒组（ADV-sh NC）相比,注射ADV-sh CircERBB2IP组小鼠表现为:心功能下降,心脏纤维化程度加重,瘢痕面积上升。敲低CircERBB2IP后对心肌细胞的增殖没有影响,但显著减少梗死心肌周围CD31+毛细血管密度和α-SMA+小动脉密度。结论:1、在小鼠心脏发育过程中,CircERBB2IP的表达显著降低;2、敲低CircERBB2IP不利于乳鼠心肌梗死后心脏再生及减弱血管新生。第二部分CircERBB2IP调控心肌微血管内皮细胞（CMECs）的生物学行为改善心肌梗死后心脏修复目的:1、体内实验观察CircERBB2IP对成年小鼠心肌梗死后心脏修复的影响。2、体外观察CircERBB2IP对CMECs增殖、迁移及成管的影响。方法:1、构建具有心脏特异性过表达CircERBB2IP的重组9型腺相关病毒（AAV9-CircERBB2IP）,建立小鼠心肌梗死模型,尾静脉注射过表达小鼠心脏中的CircERBBIP,观察过表达CircERBB2IP后对小鼠心肌梗死后心功能、纤维化程度及血管生成能力的影响。2、CMECs的培养:采用酶消化法联合差速贴壁法培养CMECs。免疫荧光（IF）鉴定CMECs标

关键词：心肌微血管内皮细胞 CircERBB2IP miR-145a-5p 血管新生

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SUMO化修饰在心力衰竭中的作用及机制研究进展

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解剖科学进展 2023年

作者：张伟仇治梅谷宁石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科

心力衰竭（heart failure，HF）是具有多种病因的复杂疾病过程，是世界范围内发病和死亡的重要原因。现有的研究都集中在阐明与心力衰竭相关的新分子机制以识别新的药物靶点，而很少有旨在通过靶向这些关键蛋白质的翻译后修饰来改善心... 详细信息

心力衰竭（heart failure，HF）是具有多种病因的复杂疾病过程，是世界范围内发病和死亡的重要原因。现有的研究都集中在阐明与心力衰竭相关的新分子机制以识别新的药物靶点，而很少有旨在通过靶向这些关键蛋白质的翻译后修饰来改善心脏功能的研究。最近发现泛素样修饰剂(small ubiquitin - like modification，SUMO)可以形成一种新型的蛋白质翻译后修饰，称为SUMO化，在心脏发育和功能中发挥着关键作用。此外，SUMO化与心力衰竭等心血管疾病的发病机制有关，在心力衰竭中具有保护作用。最终，本综述推荐将SUMO化作为治疗心血管疾病的关键治疗靶点。

关键词：心力衰竭翻译后修饰小泛素样修饰剂心脏保护

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TLR4基因修饰BMSCs移植对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响

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第三军医大学学报 2019年第15期41卷 1438-1444页

作者：陈文明蹇明辉仇治梅石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科

目的探讨Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR4)修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem Cells,BMSCs)对心肌梗死后心脏心功能的影响。方法取大鼠骨髓体外分离扩增培养BMSCs,将携带目的基因重组慢病毒载体(Lv-EGFP-TL... 详细信息

目的探讨Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR4)修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem Cells,BMSCs)对心肌梗死后心脏心功能的影响。方法取大鼠骨髓体外分离扩增培养BMSCs,将携带目的基因重组慢病毒载体(Lv-EGFP-TLR4)及空病毒载体(Lv-EGFP)分别转染至BMSCs;用ELISA检测Lv-EGFP-TLR4转染后BMSCs细胞上清液TLR4的表达。选用成年SD大鼠,结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,随机分为3组(n=18):对照组、Lv-EGFP-BMSCs组、Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组。分别将Lv-EGFP-BMSCs和Lv-EGFP-TLR4-BMSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量PBS;细胞移植第7天,用荧光显微镜追踪EGFP阳性细胞表达,Western blot检测梗死区周边TLR4的蛋白表达;细胞移植第28天,用超声心动图检测大鼠心功能,HE和MASSON染色观察心肌胶原纤维化程度,用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)表达水平。结果Lv-EGFP-TLR4转染BMSCs后,细胞上清液中TLR4的表达明显增多,浓度达到(31.55 pg/mL)。细胞移植第7d,心肌梗死区域有EGFP标记的BMSCs,Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组的绿色荧光强度明显优于Lv-EGFP-BMSCs组,对照组无EGFP表达,TLR4蛋白表达也明显高于Lv-EGFP-BMSCs组(P治疗心肌梗死,进一步减轻心肌纤维化程度,从而改善心肌梗死大鼠的心功能。

关键词： Toll样受体-4 骨髓间充质干细胞急性心肌梗死心功能

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人参皂苷Rg3对大鼠血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

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遵义医科大学学报 2020年第4期43卷 419-424页

作者：仇治梅陈文明王艳石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科贵州遵义563099

目的研究人参皂苷Rg3(Ginsenoside Rg3,GSRg3)对大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs,免疫荧光法检测VSMCs中平滑肌α-肌动蛋白(Smooth muscle alph... 详细信息

目的研究人参皂苷Rg3(Ginsenoside Rg3,GSRg3)对大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs,免疫荧光法检测VSMCs中平滑肌α-肌动蛋白(Smooth muscle alpha actin,SMα-actin);MTT法检测不同浓度GSRg3(25、50、100μg/mL)和不同时间(24、48 h)刺激下对VSMCs的增殖效应;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测GSRg3处理VSMCs凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3、cleaved caspase 9蛋白的表达水平。结果MTT检测结果显示,与对照组相比,不同浓度GSRg3组VSMCs增殖活性下降,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,不同浓度GSRg3作用于VSMCs 48 h后凋亡率明显增加(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,GSRg3能够下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase 3和cleaved caspase 9的表达,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论GSRg3通过促进Bax、cleaved caspase 3和cleave caspase 9的表达,抑制Bcl-2的表达,从而诱导VSMCs凋亡。

关键词：人参皂苷Rg3 血管平滑肌细胞细胞凋亡凋亡相关基因

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骨髓源性生长因子对高糖诱导H9c2细胞焦亡的改善作用

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第三军医大学学报 2021年第10期43卷 923-929页

作者：张玉王艳赵然尊仇治梅龙仙萍李朝富陈文明石蓓遵义医科大学附属医院心内科贵州遵义563000

目的探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:(1)正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;(2)高糖组(high glucose,HG)予以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(3)Mydgf组采用25 ng/mL重组Mydgf蛋白处理细胞12 h,随后以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(4)Necrosulfonamide组(NSA)采用32μmol/L NSA处理细胞0.5 h,然后予50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h。Western blot法检测H9c2细胞中天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ACS)、炎症复合体(NLRP3)及成孔蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达水平。ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的分泌量。CCK-8法检测Mydgf及NLRP3对H9c2细胞活力的影响。将携带NLRP3的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)慢病毒载体(NLRP3-EGFP)及空病毒载体(EGFP)分别转染至H9c2细胞,做回复实验,检测焦亡相关指标变化。结果Western blot结果显示,HG组焦亡相关蛋白cleaved Caspase-1、ACS、NLRP3、GSDMD表达量较正常组明显增高(P25 ng/mL的Mydgf明显降低H9c2细胞活力(P0.05),而NLRP3-EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05)。回复实验的Western blot结果显示,在高糖环境中,与Mydgf组相比,Mydgf+NLRP3-EGFP组中焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1表达显著增加(P<0.05);ELISA检测结果也表明IL-1β和IL-18表达较Mydgf组明显增高(P<0.05)。结论Mydgf可能通过抑制NLRP3来改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。

关键词：骨髓源性生长因子 H9c2细胞细胞焦亡 NLRP3 糖尿病性心肌病

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Mst-1调控缺氧复氧诱导的小鼠心肌细胞自噬及凋亡的机制

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中华心血管病杂志 2020年第12期48卷 1060-1069页

作者：王艳赵然尊仇治梅沈长银陈攀科郝星袁近松邓文文石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科 563000 遵义医科大学第二附属医院心血管内科 563000

目的探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,Mst-1)调控缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞,通过缺... 详细信息

目的探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,Mst-1)调控缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞,通过缺氧24 h复氧6 h的方法建立HR模型。实验分组:对照组:正常培养的心肌细胞;Mst-1空病毒组:用重组慢病毒空载体转染心肌细胞48 h;Mst-1敲低组:用携带Mst-1小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒转染心肌细胞48 h;Mst-1过表达组:用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞48 h;HR组:建立心肌细胞HR模型;Mst-1敲低+HR组:用携带Mst-1 siRNA的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型;Mst-1过表达+HR组:用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型。采用实时荧光定量RCR(qPCR)以及Western blot检测细胞中Mst-1 mRNA及蛋白相对表达量,免疫荧光染色检测心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT),及细胞自噬体与自噬溶酶体变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡水平,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ,P62及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶剪切体(cleaved-caspase)9、半胱氨酸天冬氨酸酶前体(pro-caspase)9、cleaved-caspase-3、pro-caspase-3,以及髓细胞白血病1基因(MCL-1)的表达情况达。予以MCL-1抑制剂A1210477做回复实验,验证Mst-1通过调控MCL-1参与心肌细胞凋亡及自噬。结果免疫荧光检测发现培养细胞表达心肌细胞特异性标志物cTnT;HR情况下心肌细胞中Mst-1表达增加,慢病毒转染可有效抑制或过表达细胞中Mst-1。HR组与Mst-1过表达+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量低于对照组,而Mst-1敲低+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量高于HR组(P均<0.05)。TUNEL结果显示,HR组及Mst-1过表达+HR组中TUNEL阳性细胞比例高于对照组,而Mst-1敲低组+HR组中TUNEL阳性细胞比例低于HR组(P均<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,HR组及Mst-1过表达+HR组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值较低,P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较高(P均<0.05);与HR组比较,Mst-1敲低+HR组中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值较高,P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较低(P均<0.05)。HR与Mst-1过表达+HR组心肌细胞中磷酸化(P)MCL-1蛋白表达水平低于对照组,Mst-1敲低+HR组的P-MCL-1蛋白表达水平高于HR组(P均<0.05)。回复实验显示抑制细胞中MCL-1可阻断Mst-1 siRNA对细胞自噬及凋亡的调节作用。结论抑制心肌细胞中Mst-1的表达,可促进HR诱导的心肌细胞自噬,改善心肌细胞凋亡,该作用可能与其调控MCL-1表达相关。

关键词：肌细胞,心脏哺乳动物不育系20样激酶1 自噬凋亡髓细胞生长因子1

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苏木化在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究进展

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海南医学 2023年第3期34卷 440-445页

作者：张伟(综述) 仇治梅谷宁石蓓(审校) 遵义医科大学临床医学院贵州遵义563000 遵义医科大学附属医院心血管内科贵州遵义563000

心肌梗塞(MI)是一种普遍存在且危及生命的心血管疾病。心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤对心肌梗塞患者的预后有很大影响。最近,有人发现小泛素样修饰(SUMO)蛋白可以形成一种新的蛋白质翻译后修饰(PTM),称为苏木化,在MI/R损伤中发挥显著作用... 详细信息

心肌梗塞(MI)是一种普遍存在且危及生命的心血管疾病。心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤对心肌梗塞患者的预后有很大影响。最近,有人发现小泛素样修饰(SUMO)蛋白可以形成一种新的蛋白质翻译后修饰(PTM),称为苏木化,在MI/R损伤中发挥显著作用。此外,已发现几种可以被苏木化的靶蛋白会干扰MI/R损伤的不同机制,在MI/R损伤中具有保护作用。因此,更好地理解苏木化在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制,有利于开发更有效的治疗心血管疾病的靶向药物。

关键词：心肌梗塞心肌缺血再灌注损伤苏木化小泛素相关修饰剂心脏保护

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假单胞菌单加氧酶基因的克隆表达及其在手性亚砜生物催化合成中的活性分析

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基因组学与应用生物学 2016年第4期35卷 886-891页

作者：袁志美李林艳邓成念郝丽颖仇治梅欧刚卫杨加伟遵义医学院生物化学教研室遵义563000

单加氧酶催化的硫醚底物不对称氧化反应是手性亚砜类药物绿色合成的新途径之一,而寻求高催化效率和高底物耐受性的硫醚单加氧酶仍是其难点和瓶颈。本研究从前期获得的能高效合成手性亚砜化合物的菌株中筛选和克隆了2个单加氧酶基因,构... 详细信息

单加氧酶催化的硫醚底物不对称氧化反应是手性亚砜类药物绿色合成的新途径之一,而寻求高催化效率和高底物耐受性的硫醚单加氧酶仍是其难点和瓶颈。本研究从前期获得的能高效合成手性亚砜化合物的菌株中筛选和克隆了2个单加氧酶基因,构建相应的表达载体并诱导表达重组蛋白,最后以苯甲硫醚为底物来初步探讨重组蛋白在生物催化合成苯甲亚砜中的活性。结果显示,成功构建了2个基因的表达载体并获得了大量的可溶性重组蛋白。而且,这2个重组蛋白均表现出了一定的生物催化活性,能将少量的苯甲硫醚底物转化为苯甲亚砜产物。本研究为将来进一步利用重组酶蛋白生物催化合成手性亚砜类化合物打下了一定的基础。

关键词：单加氧酶手性亚砜生物催化

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静音发电机组吊装结构分析及优化

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内燃机与动力装置 2021年第4期38卷 59-62,76页

作者：殷治梅孙勇仇海龙吴宁宁内燃机可靠性国家重点实验室山东潍坊261061 潍柴重机股份有限公司山东潍坊261061

在保证吊装安全的前提下,对静音发电机组的吊装结构进行轻量化改进设计。将2组吊装横梁、4个吊耳的吊装结构优化升级为1组吊装横梁、2个吊耳的吊装结构;通过理论计算选择最佳吊耳厚度,利用仿真软件Abaqus进行可靠性及偏移量建模仿真,对... 详细信息

在保证吊装安全的前提下,对静音发电机组的吊装结构进行轻量化改进设计。将2组吊装横梁、4个吊耳的吊装结构优化升级为1组吊装横梁、2个吊耳的吊装结构;通过理论计算选择最佳吊耳厚度,利用仿真软件Abaqus进行可靠性及偏移量建模仿真,对优化后的静音发电机组吊装结构进行起吊试验验证。试验结果表明,优化后吊装结构的强度及机组的平衡性满足起吊要求。优化后的吊装结构安全可靠,减轻了质量,降低了制造成本,提高了产品竞争力。

关键词：静音发电机组吊装结构吊耳仿真分析及优化

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南瓜包的制作

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职业教育(下旬刊) 2018年第6期 11-12页

作者：仇杏梅宁波市古林职业高级中学

南瓜富含淀粉、蛋白质、胡萝卜素、维生素B、维生素C、钙和磷等成分,营养丰富,不仅有较高的食用价值,而且有着不可忽视的食疗作用。据《滇南本草》载:"南瓜性温,味甘无毒,入脾、胃二经,能润肺益气,化痰排脓,驱虫解毒,治咳止喘,疗肺痈与... 详细信息

南瓜富含淀粉、蛋白质、胡萝卜素、维生素B、维生素C、钙和磷等成分,营养丰富,不仅有较高的食用价值,而且有着不可忽视的食疗作用。据《滇南本草》载:"南瓜性温,味甘无毒,入脾、胃二经,能润肺益气,化痰排脓,驱虫解毒,治咳止喘,疗肺痈与便秘,并有利尿、美容等作用。"南瓜包、南瓜饼

关键词：豆沙馅干酵母绵白糖

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