检索结果-南通市图书馆

牛结节性皮肤病病毒L1R蛋白膜外区的可溶性表达及免疫原性鉴定

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物传染病学报 2024年

作者：王彩霞于浩洋汪琳杨振仇松寅张舟刘晓飞吴绍强王慧煜冯春燕林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所中国海关科学技术研究中心南京农业大学动物医学院

本研究截取牛结节性皮肤病病毒（LSDV）L1R基因膜外区序列人工合成至原核表达载体pET15b上，转化BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达和亲和层析纯化获得重组LSDV-L1R-His蛋白，进行了SDS-PAGE鉴定和抗原性鉴定，并对其作为间接ELISA诊断原... 详细信息

本研究截取牛结节性皮肤病病毒（LSDV）L1R基因膜外区序列人工合成至原核表达载体pET15b上，转化BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达和亲和层析纯化获得重组LSDV-L1R-His蛋白，进行了SDS-PAGE鉴定和抗原性鉴定，并对其作为间接ELISA诊断原料的应用前景进行了评价。此外，本研究进一步制备了该重组蛋白的多克隆抗体，分别采用重组抗原和灭活病毒建立的间接ELISA检测多抗效价，并评估了该多抗在间接免疫荧光检测中的应用。结果显示，本研究成功获得了可溶形式的重组L1R蛋白，大小约为27kD。抗原性鉴定结果显示，该抗原能够有效识别LSDV和羊痘的灭活阳性血清，与阴性血清和其他羊病血清无交叉反应；利用L1R间接ELISA检测临床羊血清，检测结果与IDvet试剂盒的符合率为93.48%；制备的多抗以重组L1R蛋白检测效价高达1:20 480 000，以灭活病毒检测效价为1：1600；间接免疫荧光结果显示，该多克隆抗体能够特异性识别羊痘疫苗毒AV41。本研究结果表明L1R蛋白具有良好的抗原性和免疫原性，是LSDV和GTPV间接ELISA诊断方法的重要候选靶标。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 L1R基因真核表达多克隆抗体

非洲猪瘟病毒CD2v阻断ELISA检测方法的初步建立与应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2024年第8期54卷 1050-1055页

作者：王彩霞于浩洋吴佳俊杨振贾红仇松寅刘晓飞吴绍强冯春燕林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所北京100176 中国动物疫病预防控制中心北京102600 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100091

为了建立特异性检测CD2v抗体的非洲猪瘟病毒(ASFV)阻断ELISA方法,以杆状病毒表达的CD2v蛋白作为包被抗原,以抗ASFV CD2v蛋白的特异性阻断单克隆抗体为检测抗体,经过条件优化以及敏感性和特异性检测,建立了特异性检测CD2v抗体的ASFV阻断E... 详细信息

为了建立特异性检测CD2v抗体的非洲猪瘟病毒(ASFV)阻断ELISA方法,以杆状病毒表达的CD2v蛋白作为包被抗原,以抗ASFV CD2v蛋白的特异性阻断单克隆抗体为检测抗体,经过条件优化以及敏感性和特异性检测,建立了特异性检测CD2v抗体的ASFV阻断ELISA方法。结果显示,建立的阻断ELISA的最佳抗原包被量为20 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶1,酶标抗体最佳稀释度为1∶10000。当血清样品的PI≥41.23%时,判定结果为CD2v抗体阳性,当血清样品的PI<41.23%时,判定结果为CD2v抗体阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能与ASFV阳性血清反应,与伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和猪瘟病毒等猪病病毒疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检测出128倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;对64份猪血清样品盘样品进行检测,结果显示符合率为96.88%。上述结果表明,本研究中建立的基于CD2v蛋白的ASFV阻断ELISA方法,联合p30等ASFV抗原血清学诊断方法可以用于CD2v缺失毒株的鉴别检测,为我国出现的ASFV CD2v缺失毒株的流行病学调查及疫情监测提供有效的检测技术。

关键词：非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白阻断ELISA 敏感性特异性

猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物检疫 2024年第1期41卷 95-101页

作者：于浩洋王彩霞仇松寅刘晓飞景宏丽吴绍强冯春燕林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所北京100176 三亚中国检科院生物安全中心海南三亚572000

猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方... 详细信息

猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性,与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性好,对慢病毒阳性对照品的最低检出限为10~1 copies/μL,比普通RT-PCR灵敏10倍。使用该方法检测模拟病毒样品,发现最低检出限为10~1 TU/mL,与荧光定量RT-PCR方法一致。本研究首次建立了可检测猪Linda病毒的巢式RT-PCR方法,其特异性强、灵敏度高,为在口岸以及条件有限的场地对猪Linda病毒进行精准且快速的检测提供了有效技术手段,也为防范Linda病毒传入提供了有力技术支撑。

关键词：猪Linda病毒巢式RT-PCR 检测方法非典型瘟病毒

欧洲暴发施马伦贝格病疫情及我国应采取的对策

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医杂志 2012年第4期48卷 92-95页

作者：张永宁吴绍强刘建仇松寅林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京朝阳100029

2011年夏秋季节,德国和荷兰一些牛场开始出现一种未知疾病,病牛出现发热（〉40℃）、精神不振、体质下降、厌食、产奶量下降（高达50%）和腹泻等临床症状,有时出现流产症状,但多数症状出现数天后自动消失^[1-2]。德国弗里德里希洛弗勒... 详细信息

2011年夏秋季节,德国和荷兰一些牛场开始出现一种未知疾病,病牛出现发热（〉40℃）、精神不振、体质下降、厌食、产奶量下降（高达50%）和腹泻等临床症状,有时出现流产症状,但多数症状出现数天后自动消失^[1-2]。德国弗里德里希洛弗勒研究所（Friedrich Loffler Institute,FLI）通过实验室诊断,先后排除了蓝舌病、流行性出血热、口蹄疫、裂谷热、牛病毒性腹泻、牛流行热、牛疱疹病毒1型感染以及其他疱疹病毒感染的可能。

关键词：牛病毒性腹泻疱疹病毒感染疫情欧洲临床症状流行性出血热实验室诊断牛疱疹病毒

肌肉生成抑制素基因敲除猪多重PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京农业大学学报 2015年第6期38卷 993-997页

作者：李晓琳王勤朱振营吴绍强仇松寅刘晓飞孙敏潘登科林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京100029 山东出入境检验检疫局山东青岛266002 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094

[目的]本试验旨在建立肌肉生成抑制素基因(myostatin,MSTN)敲除猪的快速检测方法,为该品系转基因猪及其产品的检测提供技术支持。[方法]根据猪β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2M)设计猪内源性基因引物,标记基因新霉素磷酸转移酶基... 详细信息

[目的]本试验旨在建立肌肉生成抑制素基因(myostatin,MSTN)敲除猪的快速检测方法,为该品系转基因猪及其产品的检测提供技术支持。[方法]根据猪β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2M)设计猪内源性基因引物,标记基因新霉素磷酸转移酶基因(neomycin phosphotransferaseⅡ,NPTⅡ)和测定的边界序列设计特异性引物,对引物的量进行调整,优化反应条件。对PCR的敏感性和特异性进行检测,并应用建立的方法对随机选取的32份猪肺和脾脏组织样品进行检测,均仅扩增出B2M条带。[结果]该方法的最佳退火温度为56℃,最低能检测出含1%MSTN基因敲除基因组成分的样本,对32份组织样本仅扩增出B2M条带。[结论]建立的多重PCR方法敏感、特异,在一个反应中能检测多个基因片段,可用于MSTN基因敲除猪的检测,为此品系转基因动物检测标准的建立提供依据。

关键词：转基因检测多重PCR MSTN基因敲除猪

基于专家问卷系统建立动物疫病半定量风险评估技术

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物检疫 2021年第3期38卷 22-28页

作者：刘晓飞仇松寅吴绍强中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所北京100176

为使动物疫病传播风险评估工作更加科学,在现有条件下尽量减少人员主观因素给风险评估带来的不良影响,从而有效提高动物卫生风险分析水平,在定性风险评估原则基础上,构建了基于专家问卷系统(experts questionnaire system,EQS)的动物疫... 详细信息

为使动物疫病传播风险评估工作更加科学,在现有条件下尽量减少人员主观因素给风险评估带来的不良影响,从而有效提高动物卫生风险分析水平,在定性风险评估原则基础上,构建了基于专家问卷系统(experts questionnaire system,EQS)的动物疫病半定量风险评估模型。该评估模型利用层次分析法(analytic hierarchy process,AHP),把专家对动物疫病传入的定性风险评估结果进行量化加权,将定性评估转化为半定量评估。在风险评估时,该系统将专家对相关领域的熟悉程度也进行量化处理,从而提升了风险打分的合理性。本研究建立的半定量风险评估模型,提高了定性风险评估结论的准确性和可重复性,同时结合了专家对于专业知识的把握程度,很好地解决了定性风险评估科学性和客观性不足的问题,能够从实际应用层面提升动物疫病风险分析水平,使我国动物疫病风险管理模式更加科学、合理、高效。

关键词：动物疫病半定量风险评估层次分析法专家问卷系统

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

日本核泄漏污染俄罗斯输华鱼粉的风险评估

湖北畜牧兽医 2013年第8期34卷 65-68页

作者：仇松寅刘建林祥梅徐丽丽中国检验检疫科学研究院北京100029 国家质量监督检验检疫总局进出口食品安全局北京100088 易智瑞(中国)信息技术有限公司北京100007

2011年3月11日日本本州岛海域发生地震，日本福岛第一核电站发生核燃料泄漏，大量放射性物质泄漏至环境中。因此，为了保护国内民众不受日本核泄露事件带来的危害，对俄罗斯输华鱼粉进行风险评估。经分析，核泄漏发生70-75d后，俄罗斯... 详细信息

2011年3月11日日本本州岛海域发生地震，日本福岛第一核电站发生核燃料泄漏，大量放射性物质泄漏至环境中。因此，为了保护国内民众不受日本核泄露事件带来的危害，对俄罗斯输华鱼粉进行风险评估。经分析，核泄漏发生70-75d后，俄罗斯捕捞船作业区将受到较明显的核污染影响。建议限制俄罗斯输华鱼粉的作业捕捞作业范围，处于风险区之内的全面禁止向中国出口鱼粉，并进一步加强风险评估工作。

关键词：日本核泄漏俄罗斯鱼粉核污染洋流风险评估

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

转基因大动物常用载体频数分析及筛查策略

畜牧兽医学报 2017年第12期48卷 2239-2248页

作者：刘晓飞王勤李晓琳刘丹丹仇松寅林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京100176

构建重组表达载体是转基因动物生产制备研究中非常关键的一步,包括构建完整的外源基因表达盒,包含目的基因、调控序列(启动子、终止子)和筛选报告基因等。本文概述了转基因大动物制备技术,归纳统计了近10年转基因猪、牛、羊制备过程中... 详细信息

构建重组表达载体是转基因动物生产制备研究中非常关键的一步,包括构建完整的外源基因表达盒,包含目的基因、调控序列(启动子、终止子)和筛选报告基因等。本文概述了转基因大动物制备技术,归纳统计了近10年转基因猪、牛、羊制备过程中常用的载体和频数,统计结果表明,转基因猪中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、CAG、CMV启动子,终止子频数依次为兔β-globin poly A、酪蛋白poly A、SV40poly A和BGH poly A;转基因羊中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、BLG和CMV启动子,终止子依次为酪蛋白poly A、BLG poly A、BGH poly A、SV40poly A和兔β-globin poly A;转基因牛中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、CMV、人乳清白蛋白启动子等,终止子依次为SV40poly A、BGH poly A和酪蛋白poly A。根据统计结果提出针对启动子和终止子的多重检测和筛查策略;分析了未来转基因动物检测可能存在的问题,以期对转基因动物的监管和筛查检测方法的建立提供参考。

关键词：转基因大动物载体检测

非洲猪瘟病毒K196R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医杂志 2019年第5期55卷 3-8页

作者：崔贝贝仇松寅梅琳韩雪清吴绍强李霆林祥梅中国检验检疫科学研究院

为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快... 详细信息

为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快速检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法选择的引物具有高度灵敏性和特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.998),对ASFV核酸最低检测下限为1.3拷贝,且与猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等多种病原不存在交叉反应。本研究建立的K196R基因实时荧光定量PCR检测方法为非洲猪瘟疫情提供了一种新型、灵敏和特异的早期检测方法。

关键词：非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR K196R基因检测