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靶向伪狂犬病病毒UL35基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2024年

作者：张心雨吴红霞李永锋孙元付强仇华吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为了确定UL35基因能否作为诊断伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）感染的靶标，本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列，设计合成特异性荧光定量PCR引物，扩增长度为54 bp的片段。通过优化反应条件和反应体系，结果显示，建立的P... 详细信息

为了确定UL35基因能否作为诊断伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）感染的靶标，本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列，设计合成特异性荧光定量PCR引物，扩增长度为54 bp的片段。通过优化反应条件和反应体系，结果显示，建立的PRV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性和特异性，其标准曲线与模板浓度呈现良好的线性关系；对猪繁殖和呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）核酸扩增均呈阴性；将所建立的方法与同类方法进行比较，敏感性无差异；组间和组内重复性试验的变异系数小于2%。用本研究所建立的方法对PRV感染小鼠的组织样品进行检测，均检测到一定的病毒载量。结果表明，UL35基因可以作为诊断PRV感染的靶标。

关键词：伪狂犬病病毒 UL35基因 SYBR Green I 定量PCR

表面展示非洲猪瘟病毒p54蛋白细菌样颗粒的构建及其对小鼠免疫原性评价

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中国动物传染病学报 2024年

作者：黄京山高天琦 Assad Moon 吴红霞仇华吉孙元吉林农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江八一农垦大学动物科技学院

非洲猪瘟（African swine fever， ASF）的流行极大地影响了我国养猪业的发展，且我国目前尚无安全有效的ASF疫苗。为了提供ASF疫苗研发的新策略，本研究构建了表面展示非洲猪瘟病毒p54蛋白的细菌样颗粒。通过构建重组质粒pCold-TF-p54... 详细信息

非洲猪瘟（African swine fever， ASF）的流行极大地影响了我国养猪业的发展，且我国目前尚无安全有效的ASF疫苗。为了提供ASF疫苗研发的新策略，本研究构建了表面展示非洲猪瘟病毒p54蛋白的细菌样颗粒。通过构建重组质粒pCold-TF-p54-PA，将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，获得重组菌pCold-TF-p54-PA/Rosetta，并将食品级乳酸乳球菌NZ3900用热和酸处理后得到仅含肽聚糖的细菌样颗粒（Bacterium-like particles， BLPs），用处理后的BLPs与经诱导表达的pCold-TF-p54-PA/Rosetta裂解液共孵育制备了表面锚定展示p54蛋白的BLPs。将BLPs-p54对小鼠进行灌胃及肌注免疫，结果表明，肌注组小鼠在二免后7 d产生了高水平的血清特异性IgG抗体，口服组小鼠在二免后7 d，2/5的小鼠血清特异性IgG抗体转阳。上述结果表明，BLPs-p54具有良好的免疫原性，是一种有前途的ASF疫苗候选策略。

关键词：非洲猪瘟细菌样颗粒 p54蛋白免疫原性

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非洲猪瘟病毒的流行与遗传演化：变与不变

中国兽医学报 2024年

作者：陈盛媚王涛陆战豪蓝靖罗瑞付强孙元仇华吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

非洲猪瘟（African swine fever， ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus， ASFV）感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中，已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年，基因Ⅱ型ASFV强毒株传... 详细信息

非洲猪瘟（African swine fever， ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus， ASFV）感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中，已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年，基因Ⅱ型ASFV强毒株传入我国后，相继出现了基因Ⅱ型弱毒株、基因Ⅰ型弱毒株以及基因Ⅰ型和Ⅱ型重组的ASFV强毒株。这表明ASFV在流行过程中出现了复杂、多样的遗传演化，给疫苗研发和疫病的监测带来了严峻的挑战。本文首先对ASFV在我国和全球流行的新特点进行了总结；重点分析了ASFV在流行过程中的遗传变异和致病性的改变；在此基础上，探讨了ASFV遗传变异对病毒免疫逃逸和致病性的影响，以及对疫苗研发、疫病检测和监测带来的挑战；旨在加深对ASFV遗传演化规律与变异机制的认知，从而为疫苗和诊断技术研究提供理论依据。

关键词：非洲猪瘟非洲猪瘟病毒基因突变重组遗传演化疫苗

非洲猪瘟病毒消毒策略及活病毒鉴别检测技术研究进展

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 823-833页

作者：樊高成高晓薇杨玉莹罗玉子仇华吉长江大学动物科学学院湖北荆州434023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种出血性、高度接触性传染病。由于目前我国尚无针对ASF的有效疫苗,猪场仍以生物安全防控为主,消毒则是生物安全防控中极其... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种出血性、高度接触性传染病。由于目前我国尚无针对ASF的有效疫苗,猪场仍以生物安全防控为主,消毒则是生物安全防控中极其重要的一环。当前,猪场的消毒方式众多,但对消毒效果的评价技术甚少,无法辨别消毒后病毒是否具有感染性,存在巨大的安全隐患。通过对灭活病毒的方式、常见的活病毒鉴别方法及局限性进行综述,并探讨光敏核酸染料结合分子检测技术运用到ASFV灭活效果评价中的可行性,以期对ASF的防制提供帮助。

关键词：非洲猪瘟病毒活病毒鉴别消毒

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生物安全在养猪业的发展与应用

黑龙江畜牧兽医 2024年第3期 38-44页

作者：李树稳李永锋张交儿孙元张新黄淑坚仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231

随着规模化养猪的快速发展,烈性传染病造成的经济损失越来越大,而建立科学、高效的生物安全体系是有效预防和控制动物传染病的重要措施。在养猪生产过程中采取生物安全措施可以阻止或减少外部病原的引入(外部生物安全)及病原在养殖场内... 详细信息

随着规模化养猪的快速发展,烈性传染病造成的经济损失越来越大,而建立科学、高效的生物安全体系是有效预防和控制动物传染病的重要措施。在养猪生产过程中采取生物安全措施可以阻止或减少外部病原的引入(外部生物安全)及病原在养殖场内的传播(内部生物安全)。同时,科学的生物安全体系还有助于提高养殖生产效率、减少药物和疫苗的使用量。文章综述了目前国内养猪业主要采取的生物安全措施,同时系统分析了美洲和欧洲国家生物安全措施在猪场应用的发展历程,以期为完善我国养猪业生物安全防控体系提供借鉴。

关键词：生物安全养猪业疾病预防发展生物安全规范

非洲猪瘟病毒毒力相关基因的鉴定及其功能研究进展

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 834-846页

作者：蓝靖陆战豪罗瑞宋鑫孙元杨玉莹王涛仇华吉长江大学动物科学学院湖北荆州434023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪所引起的一种急性、出血性、高度接触性传染病。自2018年ASF传入我国以来,已经流行了5年多,病毒已经演化出了低毒力的基因Ⅱ型和基因Ⅰ型弱毒... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪所引起的一种急性、出血性、高度接触性传染病。自2018年ASF传入我国以来,已经流行了5年多,病毒已经演化出了低毒力的基因Ⅱ型和基因Ⅰ型弱毒株,以及基因Ⅱ型和Ⅰ型重组毒株,这为该病的防制和疫苗研发带来了巨大挑战。ASF减毒活疫苗(live attenuated vaccines,LAVs)能够诱导良好的免疫保护,具备商品化疫苗的潜力。鉴定和研究毒力相关基因(virulence-associated genes,VAGs)对于LAVs的研发至关重要,也是ASFV研究的热点和难点。因此,对已鉴定的ASFV VAGs进行全面系统的综述,总结VAGs编码蛋白的作用机制,同时展望如何全面鉴定ASFV VAGs及其编码蛋白的作用机制,以及如何利用已知的VAGs科学设计安全高效的LAVs,以期为ASFV的致病机制及LAVs研发提供参考。

关键词：非洲猪瘟非洲猪瘟病毒毒力相关基因减毒活疫苗致病机制

伪狂犬病病毒在小鼠原代神经细胞中潜伏感染模型的建立

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中国预防兽医学报 2024年第1期46卷 1-6,15页

作者：向广韬吴红霞王异民周末王亚林王翌尹航仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室黑龙江哈尔滨150069

缺少PRV良好的潜伏感染模型已成为研究其潜伏感染机制的障碍。为建立PRV潜伏感染的体外细胞模型,本研究通过分离新生鼠背根神经节(DRG)获取神经细胞,并利用间接免疫荧光试验(IFA)对其进行鉴定,获得了DRG中的神经细胞。采用重组报告病毒r... 详细信息

缺少PRV良好的潜伏感染模型已成为研究其潜伏感染机制的障碍。为建立PRV潜伏感染的体外细胞模型,本研究通过分离新生鼠背根神经节(DRG)获取神经细胞,并利用间接免疫荧光试验(IFA)对其进行鉴定,获得了DRG中的神经细胞。采用重组报告病毒r PRV-EGFP感染神经细胞,同时添加阿昔洛韦(ACV)抑制病毒复制以建立潜伏感染,并采用棋盘法对病毒感染剂量和ACV浓度进行优化,结果显示,感染复数(MOI)为0.001,ACV浓度为0.5 mmol/L,病毒能够在神经细胞中稳定建立潜伏感染。采用荧光定量RT-PCR、病毒滴度测定、药物刺激再激活的方法对潜伏感染模型鉴定,结果显示,潜伏感染时病毒不能复制,且不产生感染性病毒粒子;而经LY294002(PI3K抑制剂)诱导病毒再激活后,病毒大量复制并产生感染性病毒粒子。本研究首次利用小鼠原代神经细胞建立了PRV的潜伏感染模型,该模型的建立为PRV潜伏感染机制的研究奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒小鼠背根神经节潜伏感染再激活模型

非洲猪瘟疫苗的研发策略与应用前景：可行性和可能性

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中国农业科学 2023年第11期56卷 2212-2222页

作者：王涛罗瑞孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室佛山科学技术学院生命科学与工程学院

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）感染猪而引起的一种烈性传染病，强毒株急性感染死亡率可高达100%。当前，ASF全球流行与危害不断加剧。该病自2018年传入我国后，经过3年多... 详细信息

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）感染猪而引起的一种烈性传染病，强毒株急性感染死亡率可高达100%。当前，ASF全球流行与危害不断加剧。该病自2018年传入我国后，经过3年多的流行，最初暴发的基因Ⅱ型ASFV强毒株，已演化出弱毒株。2021年又出现了基因I型低毒力ASFV的流行，使我国ASF防控和根除面临的形势更加严峻和复杂。作为传染病防控的有效利器，ASF疫苗的研发受到政府、生猪养殖、疫苗制造企业和科学界的广泛关注。随着相关科研经费的不断加大，近年来基于灭活、减毒、亚单位、病毒载体和DNA等疫苗研发策略，在ASF疫苗研究中取得空前进展，加深了对ASF疫苗研发与评价的科学认知。当前，部分ASF疫苗候选株已经或即将进入临床试验阶段，应用前景较为乐观，但仍有一些问题亟待解决。本文结合国内外ASF疫苗最新研究成果与观点，系统总结了不同疫苗研发策略的优势和劣势及其面临的技术瓶颈，现有ASF疫苗候选株的科学评价，并对未来安全高效ASF疫苗的发展方向与挑战，以及ASF疫苗的应用前景进行了讨论，以期为业内人士提供参考。

关键词：非洲猪瘟疫苗研发策略应用前景

保护性病毒抗原的筛选策略及其在新型疫苗研发中的应用

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生物工程学报 2022年第8期38卷 2857-2871页

作者：钟代浪王涛罗瑞仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

随着疫苗研发技术的发展,新型疫苗在传染病的预防中得到了广泛应用。由于新型疫苗安全性良好,因此其在烈性病疫苗的应用中有着得天独厚的优势,然而研制新型疫苗的前提是筛选出保护性抗原。随着各种组学研究的发展,针对真核生物的多种生... 详细信息

随着疫苗研发技术的发展,新型疫苗在传染病的预防中得到了广泛应用。由于新型疫苗安全性良好,因此其在烈性病疫苗的应用中有着得天独厚的优势,然而研制新型疫苗的前提是筛选出保护性抗原。随着各种组学研究的发展,针对真核生物的多种生物信息学方法代表着最前沿的技术手段。相对于真核细胞,病毒具有更为简单的结构,对应着相对简单的研究方法,未来的保护性抗原筛选策略,需要结合生物信息学和传统分子生物学方法的优势。本文分别从宿主和病毒入手,论述了病毒保护性抗原的筛选策略,列举了一系列基于真核细胞开发的可能用于保护性抗原筛选的生物信息学方法,并总结了应用保护性抗原进行新型疫苗设计的案例,以便加深对病毒保护性抗原筛选策略的认知,为新型疫苗的研发提供借鉴。

关键词：保护性抗原筛选策略新型疫苗