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人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子真核表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2013年第9期26卷 1218-1221,1227页

作者：亢渝俊王川姜政王丕龙重庆市第三人民医院消化科重庆400014 重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的构建人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)真核表达质粒,并在COS-7细胞中表达。方法采用巢式PCR法从人结肠癌SW-480细胞中扩增EMMPRIN基因,插入pEGFP-N1质粒,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1-EM... 详细信息

目的构建人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)真核表达质粒,并在COS-7细胞中表达。方法采用巢式PCR法从人结肠癌SW-480细胞中扩增EMMPRIN基因,插入pEGFP-N1质粒,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1-EMMPRIN,转染COS-7细胞,48 h后,于倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法和Western blot法分别检测转染细胞中EMMPRIN基因mRNA的转录和蛋白的表达。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1-EMMPRIN经菌落PCR、酶切及测序证实构建正确,测序结果经比对分析,仅发现1个碱基突变,即534位:GCC→GCT,为无义突变;pEGFP-N1-EMMPRIN转染的COS-7细胞能表达绿色荧光蛋白,且能检测到EMMPRIN基因mRNA的转录和蛋白的表达。结论成功构建了人EMMPRIN真核表达质粒,并在COS-7细胞中表达了EMMPRIN,为进一步研究EMMPRIN在恶性肿瘤发生发展中的作用及其基因治疗奠定了基础。

关键词：细胞外基质金属蛋白酶诱导因子真核细胞基因表达恶性肿瘤

EMMPRIN在胃癌SGC-7901细胞中的表达及生物学影响研究

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EMMPRIN在胃癌SGC-7901细胞中的表达及生物学影响研究

作者：亢渝俊重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：构建pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN重组质粒，通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞，验证其在SGC-7901细胞中的表达情况，并检测其对SGC-7901细胞体外实验中侵袭以及迁移的变化，从基因的维度提供解决消化道肿... 详细信息

目的：构建pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN重组质粒，通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞，验证其在SGC-7901细胞中的表达情况，并检测其对SGC-7901细胞体外实验中侵袭以及迁移的变化，从基因的维度提供解决消化道肿瘤问题的基本思路。方法：（1）从结肠癌细胞株SW-480细胞中提取总RNA，通过RT-PCR获得EMMPRIN基因，将其克隆到质粒pEGFP-N1上，构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN，将其转染SGC-7901真核表达细胞，通过对其绿色荧光蛋白表达情况的观察、RT-PCR及Western blot检测其在SGC-7901中的表达;（2）体外合成针对人EMMPRIN的干扰质粒pshRNA-EMMPRIN4组，通过测序、RT-PCR和Western blot检测其在SGC-7901中的表达并筛选出沉默效率最高的质粒组;（3）将pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN分别通过脂质体Lipofectamine2000将其转染SGC-7901细胞，Transewell检测各组SGC-7901细胞侵袭及迁移生物学行为的影响。结果：（1）通过RT-PCR获得EMMPRIN基因片断，成功构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN，验证了其在SGC-7901细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合;（2）成功构建pshRNA-EMMPRIN，并经测序、RT-PCR及western blot筛选出对沉默效果明显的重组质粒;（3）成功观察到pEGFP-N1-EMMPRIN组与pshRNA-EMMPRIN组之间SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力存在明显差异。结论： EMMPRIN能明显增强肿瘤细胞的侵袭与迁移能力，降低EMMPRIN表达量能够明显减弱肿瘤的侵袭和迁移，为消化道肿瘤的基因治疗奠定基础。

关键词： EMMPRIN SGC-7901 侵袭迁移

重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2013年第2期33卷 155-161页

作者：亢渝俊王川姜政王丕龙重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的构建人细胞外金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)重组质粒,观察其在胃癌SGC-7901细胞中的表达及对细胞侵袭和迁移的影响。方法从结肠癌细胞株SW-480中提取总RNA,通过RT-PCR获得EMMPRIN基因,连接至载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPR... 详细信息

目的构建人细胞外金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)重组质粒,观察其在胃癌SGC-7901细胞中的表达及对细胞侵袭和迁移的影响。方法从结肠癌细胞株SW-480中提取总RNA,通过RT-PCR获得EMMPRIN基因,连接至载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN,通过脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌SGC-7901细胞;RT-PCR和Western blotting分别检测EMMPRIN mRNA和蛋白在SGC-7901细胞中的表达,Transwell实验检测EMMPRIN对SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响。结果重组质粒pEGFP-N1-EMMPRIN构建成功,并在SGC-7901细胞中表达,RT-PCR和Western blotting检测示转染后SGC-7901细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达均增加,Transwell实验检测示转染后SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力均显著增强。结论EMMPRIN可显著增强肿瘤细胞的侵袭与迁移能力。

关键词：重组质粒细胞外金属蛋白酶诱导因子 SGC-7901 侵袭迁移

EMMPRIN短发夹RNA对SGC-7901细胞侵袭与迁移的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2013年第1期33卷 12-18,24页

作者：亢渝俊王川姜政王丕龙重庆医科大学附属第一医院消化科重庆400016

目的构建人细胞外金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)短发夹RNA(shRNA),研究其对人胃癌细胞SGC-7901侵袭与迁移的影响。方法体外设计合成针对人EMMPRIN的4组小干扰RNA(siRNA),退火形成双链shRNA,并插入pGenesil-1质粒中。经测序鉴定及RT-PCR和... 详细信息

目的构建人细胞外金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)短发夹RNA(shRNA),研究其对人胃癌细胞SGC-7901侵袭与迁移的影响。方法体外设计合成针对人EMMPRIN的4组小干扰RNA(siRNA),退火形成双链shRNA,并插入pGenesil-1质粒中。经测序鉴定及RT-PCR和Western blotting筛选出沉默效果明显的干扰质粒,通过脂质体Lipofectamine 2000转染SGC-7901细胞,Transewell法检测重组干扰质粒对SGC-7901细胞侵袭及迁移能力的影响。结果成功构建并筛选出pshRNA-EMMPRIN干扰质粒。重组干扰质粒转染SGC-7901细胞后,细胞EMMPRIN mRNA和蛋白表达显著降低。Transewell法检测发现,在转染重组干扰质粒的SGC-7901细胞中,侵袭细胞和迁移细胞的个数明显减少。结论下调EMMPRIN表达能够显著减弱肿瘤的侵袭和迁移能力,为进一步研究EMMPRIN对消化道肿瘤的基因治疗奠定了基础。

关键词：细胞外金属蛋白酶诱导因子短发夹RNA SGC-7901 侵袭迁移

SL7207/pEGFP-N1-AQP9及SL7207/pshRNA-AQP9重组沙门菌的构建及表达

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重庆医学 2012年第33期41卷 3465-3467,3470,F0002页

作者：王川亢渝俊姜政王丕龙重庆医科大学附属第一医院消化内科 400016

目的将人水甘油通道蛋白9(AQP9)真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9及干扰质粒pshRNA-AQP9通过电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,并验证其表达情况,为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的作用奠定基础。方法从人肝脏组织中通过RT-PCR获得AQP9基... 详细信息

目的将人水甘油通道蛋白9(AQP9)真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9及干扰质粒pshRNA-AQP9通过电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,并验证其表达情况,为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的作用奠定基础。方法从人肝脏组织中通过RT-PCR获得AQP9基因,克隆到载体pEGFP-N1上,构建真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9,设计合成针对人AQP9的siRNA,退火形成双链shRNA,并插入pGenesil-1质粒中,构建干扰质粒pshRNA-AQP9,电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,通过PCR、Western blot验证其表达情况,并检测其稳定性。结果成功构建pEGFP-N1-AQP9及pshRNA-AQP9重组质粒,将其转化SL7207后,能在重组沙门菌中表达。结论成功构建SL7207/pEGFP-N1-AQP9及SL7207/pshRNA-AQP9重组沙门菌,为进一步研究AQP9对NAFLD的基因治疗奠定基础。

关键词：水甘油通道蛋白质类非酒精性脂肪肝病重组质粒基因治疗

Decorin基因转染对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1009-1012页

作者：刘波姜政王川胡在敏季文蔡璨亢渝俊重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的:探讨核心蛋白聚糖(DCN)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的影响及可能的机制。方法:构建裸鼠胃癌移植瘤模型,将重组质粒pEGFP-N1-DCN注入肿瘤中央及基底部,以空质粒组和生理盐水组作为对照,测量肿瘤体积和质量的变化,RT-PCR及We... 详细信息

目的:探讨核心蛋白聚糖(DCN)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的影响及可能的机制。方法:构建裸鼠胃癌移植瘤模型,将重组质粒pEGFP-N1-DCN注入肿瘤中央及基底部,以空质粒组和生理盐水组作为对照,测量肿瘤体积和质量的变化,RT-PCR及Western blot法检测DCN的表达,Western blot法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,免疫组织化学染色方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:裸鼠胃癌移植瘤模型构建成功,与对照组比较,重组质粒组肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和质量明显变小(P<0.05);RT-PCR显示重组质粒组DCN表达增强(P<0.05),Western blot结果显示重组质粒组有融合蛋白的表达,重组质粒组TGF-β1及MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05);免疫组化显示重组质粒组VEGF表达降低(P<0.05)。结论:DCN基因可以抑制裸鼠移植瘤生长,其机制可能与转化生长因子-β1及基质金属蛋白酶-9蛋白的表达降低和肿瘤新生血管形成抑制有关。

关键词：核心蛋白聚糖转染胃癌转化生长因子-β1 基质金属蛋白酶-9 血管内皮生长因子

shRNA抑制Nanog基因的表达对胃癌细胞SGC-7901分子生物学行为的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1073-1077,1080页

作者：季文姜政菜璨刘波胡在敏亢渝俊王川袁媛重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的:利用RNA干扰技术构建并筛选出对Nanog基因有抑制作用的重组质粒pshRNA-Nanog,转染入胃癌细胞SGC-7901中,检测其对Nanog表达的影响及其对胃癌细胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡以及迁移的影响。方法:构建出针对人Nanog基因构建出的干... 详细信息

目的:利用RNA干扰技术构建并筛选出对Nanog基因有抑制作用的重组质粒pshRNA-Nanog,转染入胃癌细胞SGC-7901中,检测其对Nanog表达的影响及其对胃癌细胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡以及迁移的影响。方法:构建出针对人Nanog基因构建出的干扰质粒pshRNA-Nanog,在脂质体的介导下将其转染胃癌细胞SGC-7901,通过荧光显微镜,RT-PCR和Western blot法检测其表达,筛选出抑制率最高的一组;将筛选出的转染效率最高的一组pshRNA-Nanog重组质粒转染胃癌细胞SGC-7901中,通过CCK-8检测其胃癌细胞SGC-7901增殖情况,流式细胞仪分析SGC-7901周期变化和凋亡情况,Transwell迁移实验验证Nanog对SGC-7901的迁移能力以及侵袭实验验证Nanog对SGC-7901侵袭能力的影响。结果:成功构建并筛选出了对胃癌细胞SGC-7901干扰效果最明显的一组重组质粒;细胞的增殖受到抑制,胃癌细胞侵袭能力及迁移能力减弱,细胞周期停滞在S期,细胞的凋亡明显增加。结论:Nanog基因与胃癌细胞的增殖能力、周期及凋亡、迁移和侵袭能力有密切的关系。

关键词：胃癌 Nanog 细胞凋亡细胞迁移 shRNA

无症状人群结直肠息肉检出情况及危险因素分析

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第三军医大学学报 2017年第22期39卷 2232-2237页

作者：王艳丽雷微亢渝俊江丰任孟军崔红渝重庆市人民医院消化内科重庆400014

目的探讨不同病理类型结直肠息肉在无症状人群中的检出情况及相关危险因素。方法收集我院2013-2016年接受结直肠镜检查但无临床症状的体检者702例的临床资料[年龄、性别、体质量指数(BMI)、吸烟情况、一级亲属结直肠癌家族史、2型糖尿... 详细信息

目的探讨不同病理类型结直肠息肉在无症状人群中的检出情况及相关危险因素。方法收集我院2013-2016年接受结直肠镜检查但无临床症状的体检者702例的临床资料[年龄、性别、体质量指数(BMI)、吸烟情况、一级亲属结直肠癌家族史、2型糖尿病及胆囊结石病史]和肠镜结果。根据肠镜结果和息肉病理类型分组,分析不同病理类型息肉的检出情况及危险因素。结果腺瘤、增生性息肉(hyperplasic polyp,HP)、广基锯齿状腺瘤/息肉、传统锯齿状腺瘤、炎性息肉的检出率分别为14.0%(98/702)、8.8%(62/702)、0.6%(4/702)、0.1%(1/702)、0.9%(6/702),进展期腺瘤的检出率为2.7%(19/702)。年龄≥50岁(50~<60岁:OR=1.712,95%CI=1.048~2.798,P=0.032;≥60岁:OR=2.151,95%CI=1.146~4.036,P=0.017)、吸烟≥400支/年(OR=1.866,95%CI=1.120~3.109,P=0.017)、一级亲属结直肠癌家族史(OR=1.853,95%CI=1.038~3.310,P=0.037)是腺瘤的独立危险因素;BMI≥24.0 kg/m^2(OR=3.150,95%CI=1.069~9.280,P=0.037)、2型糖尿病(OR=4.430,95%CI=1.248~15.721,P=0.021)是进展期腺瘤的独立危险因素;吸烟≥400支/年(OR=2.200,95%CI=1.203~4.024,P=0.010)是HP唯一的独立危险因素。结论腺瘤及HP是无症状人群结直肠息肉的主要病理类型。吸烟、50岁以上、一级亲属结直肠癌家族史是腺瘤的危险因素,若同时合并2型糖尿病或体质量超重则增加进展期腺瘤的风险。吸烟也是HP的危险因素,且对HP的促进作用可能更显著。

关键词：无症状人群结直肠息肉腺瘤增生性息肉危险因素

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EMMPRIN与恶性肿瘤的研究进展

检验医学与临床 2013年第15期10卷 2034-2037页

作者：亢渝俊姜政重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）也简称为CD147,EMMPRIN广泛参与胚胎以及器官形态发生、骨质重建、伤口愈合等生理过程,同时还参与呼吸、循环系统疾病、关节炎及溃疡等病理过程。大量研究表明,正常组织中EMM-PRIN的出现和调节... 详细信息

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）也简称为CD147,EMMPRIN广泛参与胚胎以及器官形态发生、骨质重建、伤口愈合等生理过程,同时还参与呼吸、循环系统疾病、关节炎及溃疡等病理过程。大量研究表明,正常组织中EMM-PRIN的出现和调节可导致MMPs表达的升高;而在肿瘤组织中,间质细胞特别是成纤维细胞分泌MMPs的表达水平与EMMPRIN的表达相关,

关键词：细胞外基质金属蛋白酶诱导因子肿瘤侵袭转移