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二甲双胍与顺铂联合诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的研究

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二甲双胍与顺铂联合诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的研究

作者：于敬坤华北理工大学

学位级别：硕士

目的观察不同浓度盐酸二甲双胍、顺铂及盐酸二甲双胍联合顺铂用药对体外人结肠癌HCT-8细胞增殖、凋亡状况的影响,探究二甲双胍、顺铂及联合用药影响人结肠癌HCT-8细胞凋亡的可能机制。方法体外常规37℃、双气、95%湿度环境无菌培养人结... 详细信息

目的观察不同浓度盐酸二甲双胍、顺铂及盐酸二甲双胍联合顺铂用药对体外人结肠癌HCT-8细胞增殖、凋亡状况的影响,探究二甲双胍、顺铂及联合用药影响人结肠癌HCT-8细胞凋亡的可能机制。方法体外常规37℃、双气、95%湿度环境无菌培养人结肠癌HCT-8细胞,取生长状态良好的HCT-8细胞行MTT实验,观察不同浓度盐酸二甲双胍及不同浓度顺铂药物作用下人结肠癌HCT-8细胞的增殖情况;根据药物剂量依赖性实验结果,将HCT-8细胞分成二甲双胍组(MET)、顺铂组(DDP)、二甲双胍联合顺铂组(MET+DDP)、空白对照组(CK)4个组群并给予对应处理;再依次行MTT实验检测MET、DDP、MET+DDP、CK各组细胞于相应处理24、48、72 h时的增殖情况;流式细胞术检测48 h时各组HCT-8细胞的凋亡情况;Western blotting实验观察各组HCT-8细胞经相应处理48 h时的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,凋亡启动蛋白Caspase-3(激活型)以及AKT/GSK-3β通路蛋白的表达水平;用SPSS Statistic17.0数据统计分析软件分析各实验数据,评估实验效果。结果1 MTT实验结果提示:盐酸二甲双胍与顺铂均可抑制体外HCT-8细胞的增殖,并存在一定的时间及剂量依赖性;MET、DDP两组的细胞增殖活性均明显低于CK组,且MET+DDP组的细胞增殖活性明显弱于其它三组(P0.05)。结论二甲双胍、顺铂及二甲双胍联合顺铂用药时均可明显提高人结肠癌HCT-8细胞的凋亡,且二甲双胍及顺铂联合作用时促HCT-8细胞凋亡作用更明显;其促凋亡机制可能与AKT/GSK-3β/Bcl-2家族蛋白信号通路受调控有关,并且能促使p-Caspase-3转化为Caspase-3(激活型)启动细胞凋亡程序。另一方面,二甲双胍与顺铂联合用药的促进HCT-8细胞凋亡作用要强于单药作用。图20幅;表6个;参106篇。

关键词：人结肠癌HCT-8细胞二甲双胍凋亡 AKT/GSK-3β信号通路

血清微RNA-429、肿瘤坏死因子受体相关因子6与肝癌肝动脉化疗栓塞术灵敏度相关性及槐耳颗粒干预作用研究

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安徽医药 2023年第6期27卷 1144-1149页

作者：崔明新刘晓刚程大铭于敬坤曲凤智唐山市工人医院肝胆外二科河北唐山063000

目的探讨血清微RNA-429(miR-429)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)与肝癌肝动脉化疗栓塞术(TACE)灵敏度相关性及槐耳颗粒干预作用。方法选取2016年1月至2021年1月唐山市工人医院收治的80例肝癌病人,采用电脑随机数字表法按照随机... 详细信息

目的探讨血清微RNA-429(miR-429)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)与肝癌肝动脉化疗栓塞术(TACE)灵敏度相关性及槐耳颗粒干预作用。方法选取2016年1月至2021年1月唐山市工人医院收治的80例肝癌病人,采用电脑随机数字表法按照随机、平行、对照原则分为对照组和观察组,各40例。两组均给予TACE治疗,对照组术后1 d起口服甲苯磺酸索拉非尼片,观察组在对照组基础上,于术前1个月及术后3 d开始口服槐耳颗粒,术后3个月评估疗效,比较两组治疗前、术后1个月、术后3个月血清miR-429、TRAF6蛋白表达,应用Spearman分析治疗前后血清miR-429、TRAF6蛋白变化与灵敏度关系,并比较不同灵敏度病人治疗前血清miR-429、TRAF6蛋白变化,采用受试者操作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血清miR-429、TRAF6蛋白治疗前后变化预测治疗灵敏度的价值,Pearson分析血清miR-429与TRAF6蛋白关系。结果观察组总有效率为95.00%,高于对照组80.00%,差异有统计学意义(P一般>较差(P<0.05);血清miR-429、TRAF6蛋白术后1个月与治疗前差值预测敏感的AUC分别为0.78、0.74;治疗前血清miR-429与TRAF6蛋白呈负相关(P<0.05)。结论血清miR-429、TRAF6与肝癌TACE灵敏度相关,槐耳颗粒可提高miR-429表达,降低TRAF6蛋白,增强肝癌TACE灵敏度,提高疗效。

关键词：肝肿瘤化学栓塞,治疗性肝动脉微RNA-429 肿瘤坏死因子受体相关因子6 灵敏度槐耳颗粒

3-溴丙酮酸对人乳头瘤状甲状腺癌TPC-1细胞迁移和侵袭能力的影响

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实用肿瘤杂志 2020年第3期35卷 210-216页

作者：于敬坤陈俊卯孙雅涵何玛莉张琪王长友华北理工大学附属医院普通外科河北唐山063000 华北理工大学医学实验研究中心河北唐山063000

目的观察3-溴丙酮酸对体外人乳头瘤状甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法分别用含0、20、40、60、80、100、120、140、160、180和200μmol/L 3-溴丙酮酸的细胞培养液培养TPC-1细胞24 h后,MTT检测细胞增殖... 详细信息

目的观察3-溴丙酮酸对体外人乳头瘤状甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法分别用含0、20、40、60、80、100、120、140、160、180和200μmol/L 3-溴丙酮酸的细胞培养液培养TPC-1细胞24 h后,MTT检测细胞增殖活性。含0、100和200μmol/L 3-溴丙酮酸的细胞培养液培养TPC-1细胞24 h或48 h后,划痕实验及transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-9、人源葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)和Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶(membrane-type 1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)的表达水平。结果100、120、140、160、180和200μmol/L 3-溴丙酮酸均抑制TPC-1细胞的增殖活性,呈剂量依赖性(均P<0.01)。3-溴丙酮酸作用于TPC-1细胞24和48 h,随着药物浓度的增高,TPC-1细胞迁移越慢,侵袭细胞越少(均P<0.05)。3-溴丙酮酸作用于TPC-1细胞24和48 h,TPC-1细胞内Glut1、MT1-MMP、MMP-2和MMP-9表达水平均随药物浓度增高而减弱(均P<0.05)。结论3-溴丙酮酸可抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并可能与下调Glut1、MT1-MMP、MMP-2和MMP-9蛋白表达有关。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学腺癌,乳头状/病理学丙酮酸/药理学细胞增殖/药物作用细胞运动/药物作用肿瘤侵润/药物作用葡萄糖转运蛋白质类,易化性基质金属蛋白酶-9 信号传导肿瘤细胞,培养的

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关于3-溴丙酮酸抗癌机制的探讨

吉林医学 2020年第5期41卷 1215-1217页

作者：张然于敬坤刘冠孟聪王长友华北理工大学附属医院普外科河北唐山063000

3-溴丙酮酸是常见的化学药剂,属于强烷化剂,主要用作杀菌剂噻菌灵的中间体;近年来,有相关学者指出3-溴丙酮酸具有抗肿瘤的作用,并已通过实验得到证实。根据相关研究结果,3-溴丙酮酸可通过多种机制实现抗癌作用;就国内外关于3-溴丙酮酸... 详细信息

3-溴丙酮酸是常见的化学药剂,属于强烷化剂,主要用作杀菌剂噻菌灵的中间体;近年来,有相关学者指出3-溴丙酮酸具有抗肿瘤的作用,并已通过实验得到证实。根据相关研究结果,3-溴丙酮酸可通过多种机制实现抗癌作用;就国内外关于3-溴丙酮酸的最新实验结果,探讨3-溴丙酮酸抗癌作用的可能机制,为3-溴丙酮酸在临床上的抗癌新应用提供理论依据。

关键词： 3-溴丙酮酸抗癌机制糖酵解己糖激酶凋亡

二甲双胍联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT-8迁移及侵袭的影响

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中国临床研究 2019年第8期32卷 1019-1024页

作者：随振阳张琪曹文斌于敬坤李明志王长友田炜华北理工大学附属医院普外科河北唐山063000 华北理工大学医学实验研究中心河北唐山063000

目的探讨二甲双胍联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT-8迁移及侵袭的影响,并研究其可能的机制。方法将HCT-8细胞分为四组:对照组、二甲双胍组、奥沙利铂组和联合用药组,分别用不含药物、含20mmol/L二甲双胍、含20μg/ml奥沙利铂以及20mmol/... 详细信息

目的探讨二甲双胍联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT-8迁移及侵袭的影响,并研究其可能的机制。方法将HCT-8细胞分为四组:对照组、二甲双胍组、奥沙利铂组和联合用药组,分别用不含药物、含20mmol/L二甲双胍、含20μg/ml奥沙利铂以及20mmol/L二甲双胍+20μg/ml奥沙利铂的培养基培养。应用MTT法检测二甲双胍联合奥沙利铂对人结肠癌细胞的生长抑制作用;划痕实验和侵袭实验观察结肠癌细胞迁移和侵袭能力的改变;Western blot实验检测迁移、侵袭相关因子基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠癌细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的表达水平。结果MTT结果显示,二甲双胍及二甲双胍联合奥利沙铂均具有抑制HCT-8细胞增殖的作用,并呈时间-剂量依赖性,20mmol/L二甲双胍处理HCF-8细胞48h,抑制率为50%。依对照组→二甲双胍组→奥沙利铂组→联合用药组之序,OD值逐渐降低,HCT-8细胞的迁移和侵袭作用逐渐降低,MMP-2、MMP-9及VEGF蛋白表达量逐渐降低,MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量逐渐降低,且两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍联合奥沙利铂能够显著抑制人结肠癌细胞HCT-8的迁移和侵袭,两者具有协同作用。

关键词：结肠癌细胞二甲双胍奥沙利铂基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 血管内皮生长因子迁移侵袭

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二甲双胍对部分恶性肿瘤细胞增殖能力的影响

华北理工大学学报（医学版） 2019年第1期21卷 20-26页

作者：于敬坤韩学超李明志随振阳王长友华北理工大学附属医院普通外科河北唐山063000 华北理工大学医学实验研究中心河北唐山063000

(1)目的探讨二甲双胍对TPC-1人乳头瘤状甲状腺癌细胞、Eca-109人食管癌细胞、SHSY5Y人神经母细胞瘤细胞、PC-3人前列腺癌细胞、HT-29人结肠癌细胞及HCT-8人结肠癌细胞增殖能力的影响,分析二甲双胍的抗肿瘤作用。(2)方法将6种恶性肿瘤细... 详细信息

(1)目的探讨二甲双胍对TPC-1人乳头瘤状甲状腺癌细胞、Eca-109人食管癌细胞、SHSY5Y人神经母细胞瘤细胞、PC-3人前列腺癌细胞、HT-29人结肠癌细胞及HCT-8人结肠癌细胞增殖能力的影响,分析二甲双胍的抗肿瘤作用。(2)方法将6种恶性肿瘤细胞均匀地种植于96孔板内,37℃、双气、饱和湿度下常规培养;MTT实验检测各肿瘤细胞在不同浓度盐酸二甲双胍作用48小时的细胞增殖能力及1.5mg/mL盐酸二甲双胍作用24小时、48小时、72小时的细胞增殖能力。(3)结果盐酸二甲双胍抑制了TPC-1人乳头瘤状甲状腺癌细胞、Eca-109人食管癌细胞、SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞、PC-3人前列腺癌细胞、HT-29人结肠癌细胞及HCT-8人结肠癌细胞的增殖(P <0.05),且呈剂量及时间依赖性。(4)结论二甲双胍可降低实验中各种肿瘤细胞的增殖能力,抑制细胞增殖,提示二甲双胍可能具有广泛的抗肿瘤作用。

关键词：恶性肿瘤细胞二甲双胍 MTT实验细胞增殖能力

二甲双胍与顺铂联合诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的研究

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中国比较医学杂志 2019年第2期29卷 43-50页

作者：于敬坤李明志随振阳张琪田炜胡琨杨光华张国志王长友华北理工大学附属医院普通外科河北唐山063000 华北理工大学医学实验研究中心河北唐山063000

目的研究二甲双胍联合顺铂对HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT-8人类结肠癌细胞分成二甲双胍组(MET)、顺铂组(DDP)、二甲双胍联合顺铂组(MET+DDP)、空白对照组(CK) 4组,MTT实验观察4组细胞于24 h、48 h、72 h时的... 详细信息

目的研究二甲双胍联合顺铂对HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT-8人类结肠癌细胞分成二甲双胍组(MET)、顺铂组(DDP)、二甲双胍联合顺铂组(MET+DDP)、空白对照组(CK) 4组,MTT实验观察4组细胞于24 h、48 h、72 h时的增殖能力;流式细胞术观察各组细胞48 h的凋亡比例;Western blotting观察各组细胞48 h时凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3(激活型)以及AKT/GSK-3通路蛋白的表达水平。结果该实验中MET+DDP组的细胞增殖能力弱于其它三组(P0. 05)。结论二甲双胍、顺铂可能通过下调AKT/GSK-3信号通路,改变Bcl-2家族蛋白的表达活性从而促进HCT-8人类结肠癌细胞的凋亡,并促进p-caspase-3剪切转化为caspase-3(激活型);二甲双胍与顺铂可协同发挥促HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的作用。

关键词： HCT-8人类结肠癌细胞二甲双胍凋亡 AKT/GSK-3β信号通路

二甲双胍对Eca-109食管癌细胞迁移能力的影响及机制研究

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陕西医学杂志 2019年第2期48卷 139-143,147页

作者：于敬坤韩学超李明志随振阳张琪王长友华北理工大学附属医院普外科唐山063000 华北理工大学医学实验研究中心唐山063000

目的:研究二甲双胍对Eca-109食管癌细胞迁移能力的影响及其可能机制。方法:MTT实验观察在盐酸二甲双胍作用下Eca-109食管癌细胞的增殖能力;划痕实验观察盐酸二甲双胍作用24、48h时Eca-109食管癌细胞的迁移能力;Western blotting观察细... 详细信息

目的:研究二甲双胍对Eca-109食管癌细胞迁移能力的影响及其可能机制。方法:MTT实验观察在盐酸二甲双胍作用下Eca-109食管癌细胞的增殖能力;划痕实验观察盐酸二甲双胍作用24、48h时Eca-109食管癌细胞的迁移能力;Western blotting观察细胞侵袭、迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9及GLUT1、MMP-14的表达。结果:盐酸二甲双胍可在一定程度上抑制Eca-109食管癌细胞的迁移能力,并降低GLUT1、MMP-14、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.05)。结论:二甲双胍可以降低Eca-109食管癌细胞的迁移能力,可能是通过抑制GLUT1、MMP-14、MMP-2、MMP-9通路而实现的。

关键词：食管肿瘤跨细胞迁移细胞增殖细胞侵袭二甲双胍分子药理作用机制

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自噬相关基因与结肠癌耐药性的研究进展

世界最新医学信息文摘 2018年第62期 52-53页

作者：李明志于敬坤陈景志刘春辉王长友华北理工大学附属医院

自噬是生命体中一种普遍而又重要的代谢方式,主要存在于真核细胞中。自噬形式的细胞死亡不同于凋亡,凋亡通常被称为第一类的细胞程序性死亡,自噬则常常被称为第二类的细胞程序性死亡。随着近年来有关于结肠癌耐药性的相关研究越来越多,... 详细信息

自噬是生命体中一种普遍而又重要的代谢方式,主要存在于真核细胞中。自噬形式的细胞死亡不同于凋亡,凋亡通常被称为第一类的细胞程序性死亡,自噬则常常被称为第二类的细胞程序性死亡。随着近年来有关于结肠癌耐药性的相关研究越来越多,已经有非常多的凭证显示结肠癌耐药性的发生发展,在基因水平上与自噬有着一定的相关关系。而其中的一些自噬基因扮演着举足轻重的角色,占据着重要的决定性位置,它们存在于自噬发生发展的每一个环节,亦或是大部分环节,从而改变着结肠癌耐药性的进展与发生。所以下面将随结肠癌耐药性与自噬的关系的研究进展做一综合论述。

关键词：自噬化疗耐药蛋白程序性死亡