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小棚养殖凡纳滨对虾“滴星病”的研究

上海农业学报 2024年第2期40卷 94-101页

作者：于志君王李宝黎慧史文军赵然万夕和上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 江苏省海洋水产研究所南通226007

为探究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)“滴星病”的发病原因,从濒死的患病对虾肝胰腺中分离纯化得到一株优势菌MRY0520,并对菌株MRY0520进行了形态学观察和生理生化鉴定及分子生物学研究。结果表明:该菌株为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种... 详细信息

为探究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)“滴星病”的发病原因,从濒死的患病对虾肝胰腺中分离纯化得到一株优势菌MRY0520,并对菌株MRY0520进行了形态学观察和生理生化鉴定及分子生物学研究。结果表明:该菌株为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.damselae),人工回感健康的凡纳滨对虾可致其出现与自然发病虾相同的症状。该菌对凡纳滨对虾72 h的半数致死量LD50为2.15×10^(5)CFU∕g,药敏试验结果显示MRY0520对新霉素(30μg∕片)、多西环素(30μg∕片)等多种药物敏感。该菌对凡纳滨对虾具有致病性,可致对虾肝胰腺出现明显的病理变化,甚至死亡。

关键词：凡纳滨对虾美人鱼发光杆菌美人鱼亚种分离鉴定药敏试验

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虾肝肠胞虫极管蛋白3的鉴定

水产学杂志 2024年第1期37卷 22-29,51页

作者：于志君王李宝史文军黎慧胡润豪赵然沈辉管小平万夕和江苏省海洋水产研究所江苏南通226007 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 伊犁悦然生态农业有限公司新疆伊犁835300

为探明极管蛋白在EHP侵染宿主过程中的作用机制及虾肝肠胞虫病的预防和治疗提供新的靶标,通过克隆南美白对虾(Litopenaeus vannamei)肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)极管蛋白3基因(Polar tube protein 3,PTP3),并进行生物信... 详细信息

为探明极管蛋白在EHP侵染宿主过程中的作用机制及虾肝肠胞虫病的预防和治疗提供新的靶标,通过克隆南美白对虾(Litopenaeus vannamei)肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)极管蛋白3基因(Polar tube protein 3,PTP3),并进行生物信息学分析,构建其核心区域部分序列编码的蛋白原核表达载体,诱导表达、纯化,制备多克隆抗体。结果表明,PTP3中最长的开放阅读框片段长3 390 bp,编码1 130个氨基酸,预测蛋白质分子质量为125 k D。该蛋白拥有13个N-糖基化位点和多个O-糖基化位点,未发现信号肽结构域;拥有117个磷酸化位点,其中苏氨酸磷酸化位点最多,为71个;二级结构较为简单,α螺旋占41.77%,是最大量的结构元件;延伸链占12.48%,无规卷曲占39.29%,β转角占6.46%。通过免疫印迹试验验证多抗的特异性,用免疫荧光实验观察极管蛋白在极管弹射时的状态,表明EHPPTP3分布于虾肝肠胞虫弹出的极管上,是新鉴定出的虾肝肠胞虫极管蛋白,确认了EHPPTP3的存在。通过生物信息学分析、序列特征、蛋白表达特征、多抗特异性以及定位特征证实本研究克隆的PTP3即为EHP极管蛋白3(EHPPTP3),是虾肝肠胞虫中新鉴定出的一种极管蛋白。

关键词：南美白对虾肝肠胞虫极管蛋白3 生物信息学分析多克隆抗体

凡纳滨对虾美人鱼发光杆菌的分离鉴定及致病机理的初步研究

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凡纳滨对虾美人鱼发光杆菌的分离鉴定及致病机理的初步研究

作者：于志君上海海洋大学

学位级别：硕士

江苏省如东县小棚养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)于2022年3月出现不明原因的区域性零星死亡,引起经济危机,养殖户命之为“滴星病”。为探究该病的发生原因,对患病对虾进行了病原分离、鉴定及致病性研究,以期为该病的防控提供... 详细信息

江苏省如东县小棚养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)于2022年3月出现不明原因的区域性零星死亡,引起经济危机,养殖户命之为“滴星病”。为探究该病的发生原因,对患病对虾进行了病原分离、鉴定及致病性研究,以期为该病的防控提供科学依据。从濒死的患病对虾肝胰腺中分离纯化得到一株优势菌MRY0520,对菌株MRY0520进行了形态学观察和生理生化鉴定,并利用16S rRNA基因对其进行了分子生物学研究,鉴定该菌株为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.damselae);人工回感健康的凡纳滨对虾可致相同症状并出现死亡,对感染发病的个体进行病原的再分离,发现濒死虾肝胰腺中分离到的优势菌株与MRY0520的形态特征、理化性质及16S rRNA序列一致,确认了该菌株的致病性。该菌对凡纳滨对虾的半数致死量LD为2.15×10 CFU/g;药敏结果显示MRY0520对新霉素(30μg/片)、多西环素(30μg/片)等多种药物敏感。结果表明,引起本次小棚养殖凡纳滨对虾“滴星病”的病原菌为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种,该菌对凡纳滨对虾具有致病性,可致对虾肝胰腺出现明显的病理变化,导致对虾死亡。为了解美人鱼发光杆菌MRY0520的全基因组序列信息,进一步分析其致病机制,通过二代Illumina NovaSeq联合三代PacBio Sequel测序平台,对菌株MRY0520进行全基因组测序,将测序数据进行基因组组装校正、组分预测与功能注释,并利用比较基因组学分析MRY0520与其他菌株的差异。菌株MRY0520基因组大小为4,451,849 bp,GC含量为40.87%;共编码3,663个基因,编码基因总长度为3,691,779 bp,占基因组的83%;含有208个tRNA,22个5S rRNA、20个16S rRNA、20个23S rRNA,以及2个CRISPR和2个基因岛。在Nr、KEGG、GO、COG数据库中分别注释到3655、2399、3121、2780个基因。比较基因组分析结果表明,菌株MRY0520与菌株Phdp-Wu-1具有较高同源性。通过全基因组测序技术揭示了菌株MRY0520的序列信息,为深入了解MRY0520的致病机制提供了理论基础。为进一步研究凡纳滨对虾对美人鱼发光杆菌感染反应的分子机制,揭示其免疫和代谢应答效应,为该类弧菌感染的科学防控提供宝贵的基因数据来源,本文以凡纳滨对虾感染组(注射美人鱼发光杆菌菌悬液)和对照组(注射等量无菌生理盐水)肝胰腺组织作为实验材料,进行Illumina HiSeq 2500测序,对测序原始数据进行拼接、注释并筛选感染条件下的差异表达基因进行分析。经拼接组装共获得222,611,760条Clean reads,各样品Clean reads的Q30均达到90%左右,测序获得的Clean reads与参考基因组的比对效率在86.24%～88.46%,说明转录组数据真实可靠。使用Stringtie对Mapped Reads(比对到参考基因组的Reads)进行拼接,共发掘1693个新基因,分别输入Nr,KEGG,GO数据库对这些新基因进行功能注释,最终共有1196个新基因被注释。其中,共有595个新基因在GO数据库中被注释,占比最多,为49.8%;KEGG数据库注释到的新基因占比最少,为17.9%。基于FDRlog2(2)的筛选条件,共获得1521个差异表达基因,其中763个基因显著上调,758个基因显著下调。功能富集分析发现,差异表达基因多富集在生物过程和代谢途径中。挑选8个差异表达基因,利用Real time RT-PCR验证转录组数据,结果证明基于转录组测序筛选感染条件下的差异表达基因是可信赖的。其中,代谢相关基因如甜菜碱-同型半胱氨酸甲基转移酶基因显著下调,免疫相关基因如热休克蛋白基因显著上调。实验说明美人鱼发光杆菌感染对虾后会影响宿主的代谢过程,刺激宿主的免疫反应。

关键词：美人鱼发光杆菌凡纳滨对虾分离鉴定转录组测序全基因组测序

H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

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病毒学报 2022年第1期38卷 1-7页

作者：朱彤商瑞程凯慧于志君吴家强山东省农业科学院家禽研究所济南250100 山东师范大学生命科学学院济南250014 山东省农业科学院畜牧兽医研究所济南250100

H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于... 详细信息

H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,在病原监测工作中得到了广泛应用。本研究以H13亚型禽流感病毒的HA基因作为靶基因,设计了一对特异性荧光定量PCR检测引物,通过特异性试验、敏感性试验等,建立了H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对海鸥粪便样品进行核酸检测。实验结果发现,该检测方法的灵敏度为1.60×10^(0)拷贝/μL;该检测方法对H1、H3、H5、H6、H7和H9等6个亚型的禽流感病毒无交叉反应;该检测方法的敏感性是常规PCR的10倍;海鸥粪便样品中H13亚型禽流感病毒的核酸检测阳性率为18.8%。我们建立的H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强等特点,该检测方法可用于大量临床样品的快速检测,为H13亚型禽流感病毒监测工作的顺利开展提供了技术支撑。

关键词： H13亚型禽流感病毒荧光定量PCR 检测 HA基因

基于16S rRNA序列分析的动物饮片典型菌污染特征研究

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药物分析杂志 2023年第10期43卷 1737-1750页

作者：于志君李腊梅刘婧江珍玉邓海英武汉科技大学职业危害识别与控制湖北省重点实验室武汉430065 荆门市疾病预防控制中心荆门448000 宜昌人福药业有限责任公司宜昌443005

目的:探讨以动物组织为药用部位的饮片微生物污染模式及典型菌污染特点。方法:收集16味46批常见动物类饮片,依据2020年版《中华人民共和国药典》规定方法,对样品进行需氧菌总数(TAMC)、酵母霉菌总数(TYMC)、耐热菌及规定控制菌检验;采... 详细信息

目的:探讨以动物组织为药用部位的饮片微生物污染模式及典型菌污染特点。方法:收集16味46批常见动物类饮片,依据2020年版《中华人民共和国药典》规定方法,对样品进行需氧菌总数(TAMC)、酵母霉菌总数(TYMC)、耐热菌及规定控制菌检验;采用多因素线性回归分析方法探究与样品微生物污染载量相关的因素;运用16S rRNA序列分析方法鉴定饮片污染典型菌。结果:37.0%的样品TAMC超过10^(4)CFU·g^(-1),32.6%的样品TYMC超过10^(3)CFU·g^(-1),60.9%的样品可检出耐热菌;不含内脏组织动物饮片lg TYMC均值高于含内脏组织饮片(P=0.01),其TYMC检出不合格率高于含内脏组织组(χ^(2)=7.59,P=0.00);采收加工炮制过程中未经热处理样品lg TYMC均值高于热处理组(P=0.02),TYMC检出不合格率高于热处理组(χ^(2)=3.99,P=0.04)。13.0%(6/46)的样品检出耐胆盐革兰阴性菌,8.7%(4/46)的样品耐胆盐革兰阴性菌载量超过10^(4)MPN·g^(-1),8.7%(4/46)样品中检出大肠埃希菌,1批蝉蜕样品中检测到铜绿假单胞菌。样品TAMC载量与耐热菌载量呈相关性(P=0.00)。样品中共分离到55株典型菌,芽胞杆菌属细菌占47.3%,肠杆菌属细菌占23.6%,肠球菌占16.4%,样品中检出蜡样芽胞杆菌、阴沟肠杆菌复合体成员等条件致病菌。结论:含动物组织类饮片微生物负载水平高,耐热菌污染严重,耐胆盐革兰阴性菌污染率低,需氧菌负载与耐热菌负载水平具有相关性,饮片典型菌以芽胞杆菌属细菌污染最常见,但污染频率高的条件致病菌在动物饮片微生物控制中应引起足够重视。

关键词：动物饮片微生物污染典型菌 16S rRNA序列分析细菌鉴定聚类分析

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关于初中音乐教学中学生创新能力的培养初探

新课程 2022年第27期 218-220页

作者：亓雪辉于志君潍坊市实验学校

初中音乐可以说是艺术教学必不可少的组成部分，其不仅可以有效地培养学生的艺术情趣，还能使学生形成自己独特的喜好。在新课改的引领下，当前更注重学生的德、智、体、美、劳全面发展。强调以兴趣为中心，尊重学生的发展规律和心理特... 详细信息

初中音乐可以说是艺术教学必不可少的组成部分，其不仅可以有效地培养学生的艺术情趣，还能使学生形成自己独特的喜好。在新课改的引领下，当前更注重学生的德、智、体、美、劳全面发展。强调以兴趣为中心，尊重学生的发展规律和心理特征，从而实现因材施教、定向培养的教育目标。并且，当前时代的学生见识不同以往，其家长在假期时，往往会让自己的孩子参加一些课外的兴趣辅导机构，希望能培养孩子的兴趣爱好，促进学生的全面发展。教师作为学生的引路人，起到帮助和引导的作用，不要过分干涉学生的想法和思维。教师还应合理地运用互动教学模式，在课堂上根据学生的基本学习情况，合理地转变教学方法，引导学生深入地对知识进行学习与研究。

关键词：初中音乐教学创新能力培养策略

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浅谈中学体育教学中学生的心理健康教育

新课程 2022年第9期 172-173页

作者：于志君亓雪辉潍坊市实验学校

在新课改的引领下,中学体育在中学教学中的地位逐渐提升,得到了大多数家长和学校的关注。如今的中学生对体育课没有正确的认知,只是简单地认为体育课就是放松而已。并且受传统教学观念的影响,之前教师只注重学生最后的测试成绩,却忽略...

在新课改的引领下,中学体育在中学教学中的地位逐渐提升,得到了大多数家长和学校的关注。如今的中学生对体育课没有正确的认知,只是简单地认为体育课就是放松而已。并且受传统教学观念的影响,之前教师只注重学生最后的测试成绩,却忽略了学生对体育课的参与度以及学生是否对体育感兴趣等。

关键词：

槲皮素对胃癌细胞株MGC-803中血管内皮生长因子-C及其受体血管内皮生长因子受体-3表达水平的影响

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槲皮素对胃癌细胞株MGC-803中血管内皮生长因子-C及其受体血管内...

作者：于志君武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分组:胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)和槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)。采用免疫组化方法检测槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中血管内皮生长因子C (vascular endothelial g... 详细信息

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分组:胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)和槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)。采用免疫组化方法检测槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中血管内皮生长因子C (vascular endothelial growth factor C, VEGF-C)及其受体血管内皮生长因子受体-3 (vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法,检测槲皮素对VEGF-C mRNA及其受体VEGFR-3 mRNA表达水平的抑制作用。结果:免疫组化检测结果显示,胃癌细胞组中可见VEGF-C蛋白及VEGFR-3蛋白的大量表达,而槲皮素处理48 h后,VEGF-C蛋白、VEGFR-3蛋白的表达率显著下降,分别与胃癌细胞组相比两组均有显著性差异(P <0.01)。半定量RT-PCR法对人胃癌MGC-803细胞中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA含量的检测结果显示,槲皮素处理48 h后VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA表达水平均有下调,且与胃癌细胞组相比均有显著的统计学意义(P <0.01)。结论:槲皮素具有抑制人胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用,其作用机制可能是通过降低VEGF-C蛋白和VEGFR-3蛋白的表达以及下调VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达而得以实现的。

关键词：槲皮素人胃癌MGC-803细胞 VEGF-C VEGFR-3 淋巴转移

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危机事件中门户网站的图片传播机制研究

危机事件中门户网站的图片传播机制研究

作者：于志君山东师范大学

学位级别：硕士

以盈利为目的的商业门户网站作为互联网信息服务提供商，虽然不具有新闻单位所享有的时政新闻自行采编权，但因其平台本身巨大的传播力，在对危机事件新闻信息进行转载的过程中创造了巨大的点击量，图片的特殊性使得门户网站危机事件图... 详细信息

以盈利为目的的商业门户网站作为互联网信息服务提供商，虽然不具有新闻单位所享有的时政新闻自行采编权，但因其平台本身巨大的传播力，在对危机事件新闻信息进行转载的过程中创造了巨大的点击量，图片的特殊性使得门户网站危机事件图片的传播机制存在异于其他新闻信息之处。本论文从传播学、社会学等学科视角，梳理门户网站中危机事件图片传播的整个过程，分析危机事件图片在传播过程中存在的问题。作为整个危机事件新闻框架的一部分，危机事件图片专题是门户网站图片编辑为网民设置的议题，网民们在不知不觉中被动的接受了危机事件新闻点的重要性排序，而投入到舆论的创造之中。门户网站与网民合力推进了危机事件图片的传播，并最终获得了高的点击量和品牌形象，网民的信息欲求和表达欲求也得以满足。危机事件的偶发性使得危机事件图片在门户网站的传播不具有常规性，本论文的研究对于了解门户网站危机事件图片传播的整个过程有一定的价值和意义，同时，这对于促进门户网站内部之间及其与外部媒介产品的协调运行，具有一定的指导意义。首先，本文对危机事件图片传播的相关研究进行了梳理，总结了当前研究中存在的问题和空白，对论文的基本思路和研究方法进行了阐述。第二，基于互联网上搜集到的相关数据，采用简单的描述性方法来分析门户网站对于危机事件报道的图片选择，以及特定意义的表达。门户网站在危机事件图片传播中的图片选择主要是通过图片来源的选择、图片发布时间的选择以及图片主题的选择三个方面来实现的，这些危机事件图片被赋予了意义表达的符号功能。第三，分析与门户网站危机事件图片报道相关的舆论的形成与舆论场的扩展。每一个小的图片专题后的评论版块都是一个舆论场，由于网络传播海量、瞬时等特点，门户网站的危机事件图片专题不断更新增加，子舆论场也会跟随着不断产生和扩展，活跃于其中的参与者们则在不断的观点碰撞和调和中表现出多样化的特点。第四，从法律法规和道德伦理两个方面，分析危机事件图片传播中门户网站所面临的困境。在门户网站的危机事件图片报道中，主要涉及的是网站二次把关的法规与伦理，这就不仅仅是防止造假照片所能解决的了，门户网站不得不从自身管理、定位及其他方面寻找突破。第五，从技术的视角分析门户网站的危机事件图片如何为受众获得，探讨获知与获取的不同路径，并在此基础上提出合理化建议。面对着数字技术网络技术的飞速发展，特别是移动互联网浪潮的涌来，门户网站危机事件图片报道将面临着策略改进以及新工具新方法使用的挑战。本文以门户网站中的危机事件图片为切入点，借助对新浪和腾讯两个门户网站上的危机事件图片专题进行个案分析，对危机事件中门户网站图片传播的整个过程进行解读，从而为探讨门户网站上危机事件图片的传播机制提供借鉴。本文试图根据所探究的“传播机制”推动门户网站危机事件图片的有效传播，并为传播过程中所遇到的问题提供可行性的建议和策略。

关键词：图片传播危机事件门户网站传播机制