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人乳头瘤病毒16型致瘤基因E6在昆虫细胞中表达及其蛋白抗原特性的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第6期18卷 444-448页

作者：栾怡于修平赵蔚明贾继辉山东医科大学微生物学教研室

目的研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）相关肿瘤患者的ＨＰＶ１６Ｅ６抗体水平及其流行病学意义；探讨用杆状病毒－昆虫细胞表达载体系统表达的ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白的抗原性。方法用ＰＣＲ从ＨＰＶ１６基因组中扩增出ＨＰＶ１６Ｅ６完整基因，... 详细信息

目的研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）相关肿瘤患者的ＨＰＶ１６Ｅ６抗体水平及其流行病学意义；探讨用杆状病毒－昆虫细胞表达载体系统表达的ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白的抗原性。方法用ＰＣＲ从ＨＰＶ１６基因组中扩增出ＨＰＶ１６Ｅ６完整基因，克隆至转移载体ｐＶＬ１３９３中，重组质粒ＤＮＡ与线性杆状病毒ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ－９，经噬斑筛选获得带有编码Ｅ６基因的重组杆状病毒株，并在昆虫细胞中表达。结果Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和高效液相色谱法检测ＨＰＶ１６Ｅ６表达蛋白，其分子量约为１８０００。免疫印迹检测显示其能与兔抗ＨＰＶ１６Ｅ６多抗特异性结合。酶联免疫吸附试验表明此重组蛋白能被人ＨＰＶ１６阳性血清所识别。结论昆虫细胞表达的ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白，具有良好的抗原性。

关键词：乳头瘤病毒 E6基因基因表达抗原特性

用指示基因法定量分析副粘病毒包膜糖蛋白所致的细胞融合

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第2期15卷 179-181页

作者：王志玉于修平山东大学(西校区)病毒学研究室济南250012

目的　建立一种定量分析副粘病毒包膜糖蛋白融合细胞功能的方法。方法　将vTF 7重组痘苗病毒感染BHK2 1细胞后 ,分别转染待测基因DNA和pG1NT7β galDNA ,16h后将两个细胞群混合 ,37℃ 15h后用NP 40裂解细胞 ,取上清进行显色反应 ,在SOFT... 详细信息

目的　建立一种定量分析副粘病毒包膜糖蛋白融合细胞功能的方法。方法　将vTF 7重组痘苗病毒感染BHK2 1细胞后 ,分别转染待测基因DNA和pG1NT7β galDNA ,16h后将两个细胞群混合 ,37℃ 15h后用NP 40裂解细胞 ,取上清进行显色反应 ,在SOFTMAX软件支持下用ELISA自动测定仪在 5 70nm测吸光度A值。结果　指示基因法与细胞计数法有密切相关关系 ,r =0 9890 (P <0 0 1) ;与面积判断法的符合率达 10 0 %。最佳主要反应条件包括 :16mmol L底物浓度 ;显色反应 2 0～2 5min ;1μgDNA转染量 ;每种细胞群接种 1× 10 5 个。结论　指示基因法是一种非常敏感、特异、可重复性好的细胞融合定量分析方法 ,可用于副粘病毒细胞融合作用功能的研究 ,并可作为其他病毒细胞融合作用研究的参考。

关键词：副粘病毒细胞融合定量分析

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人乳头瘤病毒研究的新进展

中国病毒学 1996年第4期11卷 301-312页

作者：于修平卞继峰山东医科大学微生物学教研室

人乳头瘤病毒研究的新进展于修平，卞继峰（山东医科大学微生物学教研室，济南２５００１２）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＨｕｍａｎＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｒｕｓｅｓ￥ＹｕＸｉｕｐｉｎｇ；ＢｉａｎＪｉｆｅｎｇ（Ｄｅｐａ... 详细信息

人乳头瘤病毒研究的新进展于修平，卞继峰（山东医科大学微生物学教研室，济南２５００１２）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＨｕｍａｎＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｒｕｓｅｓ￥ＹｕＸｉｕｐｉｎｇ；ＢｉａｎＪｉｆｅｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌ...

关键词：人乳头瘤病毒人体病毒学肿瘤病毒

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病毒衣壳装配和核酸包装机制的研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 1999年第3期13卷 298-300页

作者：卞继峰于修平山东医科大学分子生物学实验室济南250012

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地高辛甙元标记核酸技术

国外医学（微生物学分册） 1992年第4期15卷 152-154页

作者：曹岩娜于修平山东医科大学

地高辛甙元标记核酸技术是近几年发展的一种非放射性标记方法。它是通过一手臂将地高辛甙元连接至dUTP,经分子杂交后,用羊抗地高辛抗体的Fab片段与碱性磷酸酶的复合物作为检测系统。其检测灵敏度可与放射性同位素标记相媲美,其检测特异... 详细信息

地高辛甙元标记核酸技术是近几年发展的一种非放射性标记方法。它是通过一手臂将地高辛甙元连接至dUTP,经分子杂交后,用羊抗地高辛抗体的Fab片段与碱性磷酸酶的复合物作为检测系统。其检测灵敏度可与放射性同位素标记相媲美,其检测特异性优于生物素标记探针检测系统。本文介绍了地高辛甙元标记核酸的方法,杂交后的检测、应用,并对其灵敏度与特异性进行了评价。

关键词：地高辛甙元标记核酸技术

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人乳头瘤病毒致癌机制的研究进展

中国病毒学 2004年第5期19卷 531-534页

作者：卞继峰于修平山东大学医学院分子生物学实验室山东济南250012

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位,每年约有50万宫颈癌新发病例,其中80%在发展中国家,我国每年约有新发病例13.15万,占世界新发病例的28.8%.近年来宫颈癌发病年龄趋向年轻化,从原来的40～50岁提前到35岁左右[1].……

关键词：人乳头瘤病毒肿瘤

人乳头瘤病毒16型E_7开放读码框编码免疫反应表位的定位

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病毒学杂志 1990年第3期3卷 245-251页

作者：于修平 Steve A.Jenison 山东医科大学微生物教研室济南250012 西亚图Fred

用核酸外切酶Ⅲ和s1核酸酶,逐步缺失能在原核细胞中有效表达人乳瘤病毒16型E_7开放读码框的质粒P16E_7TNP1,获得了一系列DNA逐渐缩短的质粒。它们能在大肠杆菌中表达产生一组从羧基端往氨基端逐步减少的融合蛋白,用Western blot方法检... 详细信息

用核酸外切酶Ⅲ和s1核酸酶,逐步缺失能在原核细胞中有效表达人乳瘤病毒16型E_7开放读码框的质粒P16E_7TNP1,获得了一系列DNA逐渐缩短的质粒。它们能在大肠杆菌中表达产生一组从羧基端往氨基端逐步减少的融合蛋白,用Western blot方法检测相应融合蛋白与阳性血清的免疫反应。分析实验结果,编码免疫反应表位的核酸序列于619至644之间。

关键词：人乳头瘤病毒开放读码框表位

建立设有内对照的Real-time PCR方法检测人血清中细小病毒B19

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中华实验和临床病毒学杂志 2010年第6期24卷 479-481页

作者：李萌邹小辉王敏于修平鲁茁壮洪涛山东大学医学院济南250012 中国疾控中心病毒病预防控制所

目的建立设有内对照的TaqMan探针Real-time PCR方法 ,用于检测人血清中细小病毒B19.方法人工合成2段DNA序列,克隆到T载体,线性化后进行DNA定量,分别作为模板标准品和内对照;合成1对引物和不同荧光素标记的2条探针,2条探针分别能与阳... 详细信息

目的建立设有内对照的TaqMan探针Real-time PCR方法 ,用于检测人血清中细小病毒B19.方法人工合成2段DNA序列,克隆到T载体,线性化后进行DNA定量,分别作为模板标准品和内对照;合成1对引物和不同荧光素标记的2条探针,2条探针分别能与阳性模板或内对照结合,建立设有内对照的B19 Real-time PCR检测方法 .对方法的稳定性进行了评价,并应用于人血清B19病毒检测.结果获得了B19检测标准DNA和内对照DNA,确定了内对照的添加量,建立了使用内对照的Real-time PCR检测方法 .对160份血清标本进行了检测,检出2份阳性标本,病毒DNA浓度分别为2.1 × 105Geq/ml和3.6×103Geq/ml.结论成功建立了人细小病毒B19 Real-time PCR检测方法 ,可用于人血清B19检测;由于使用了内对照,该方法有利于排除假阴性检测结果 .

关键词：聚合酶链反应细小病毒B19,人血清学试验内对照