检索结果-南通市图书馆

作者：于之清中国农业科学院

学位级别：硕士

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)可感染不同年龄段的猪,以种猪繁殖障碍、育肥猪生长缓慢、哺乳仔猪高死亡率为特征。过去30年来,以Bartha-K61为代表的基因缺失疫苗株在我国广泛使用,伪狂犬病已得到有效控制。然而自2011年以来,Barth... 详细信息

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)可感染不同年龄段的猪,以种猪繁殖障碍、育肥猪生长缓慢、哺乳仔猪高死亡率为特征。过去30年来,以Bartha-K61为代表的基因缺失疫苗株在我国广泛使用,伪狂犬病已得到有效控制。然而自2011年以来,Bartha-K61疫苗免疫猪群频繁暴发伪狂犬病,给养猪业造成巨大经济损失。研究证明导致免疫猪群发病的是一种变异的PRV,此病毒的致病力比经典的PRV更强,以Bartha-K61为代表的经典伪狂犬病毒基因缺失疫苗不能针对变异的PRV为猪群提供完全免疫保护。全病毒基因组比较分析发现变异的PRV与经典的PRV相比已形成一个独立的遗传进化分支,糖蛋白B(Glycoprotein B,gB)是PRV最主要的保护性抗原,因此推测gB基因的变异可能是导致经典的伪狂犬病疫苗不能完全保护变异PRV的主要原因。为此,本实验将变异PRV的gB基因和Bartha-K61的gB基因互换以探讨gB基因在变异PRV免疫保护中的作用,为进一步开发针对变异PRV的新型疫苗奠定基础。变异PRV流行毒株与疫苗毒株Bartha-K61的主要保护性抗原蛋白进行生物信息学分析发现,PRV变异株的主要保护性抗原存在不同程度的变异。其中,gB基因进化树里PRV变异毒株聚集在一起形成独立分支,与国外经典毒株以及国内早期流行毒株均相距较远,并且在gB抗原表位区域PRV变异株JS-2012与Bartha-K61存在多处氨基酸缺失和替换。这表明PRV变异毒株的gB蛋白极有可能发生了抗原变异。gB基因互换重组PRV的构建。以经典伪狂犬病疫苗Bartha-K61和本实验室构建的变异PRV基因缺失病毒JS-2012-ΔgE/gI为基础,使用CRISPR/Cas9基因编辑技术结合同源重组互换两者的gB基因,不经过标记基因的插入删除,成功拯救并筛选到重组病毒BJB(Bartha-K61-JS-2012gB)和JBJ(JS-2012-ΔgE/gI-Bartha-K61gB)。重组病毒与亲本毒在体外生物学分析中具有相似的生长特性,且小鼠致病性没有显著差异。这表明成功获得gB替换的重组病毒,为PRV变异毒株gB抗原变异评价分析提供了平台。gB基因互换的重组PRV能够显著改变彼此的免疫原性。将构建的gB互换的重组毒株以及亲本毒株分别制备灭活病毒,免疫小鼠后用变异的PRV JS-2012株进行攻毒试验。结果发现与其亲本毒株Bartha-K61比较,更换了gB基因的重组Bartha-K61(BJB)的免疫保护效率显著提高;相反,与亲本毒株JS-2012-ΔgE/gI比较,更换gB基因的重组JS-2012-ΔgE/gI(JBJ)的免疫保护效率显著下降。这表明gB蛋白是PRV主要保护性抗原,g B基因变异能够显著影响PRV的免疫原性,进一步说明gB基因变异是现有疫苗Bartha-K61不能完全保护猪免于变异PRV攻击的主要原因。糖蛋白C(Glycoprotein C,gC)基因互换重组PRV的构建。生物信息学分析结果显示PRV变异株的保护性抗原gC也与经典PRV差异较大,为探究其抗原变异对PRV交叉免疫保护的影响,在gB互换的基础上,使用CRISPR/Cas9基因编辑技术结合同源重组对gC基因进一步替换,成功构建并筛选到gC和gB双互换的重组病毒BJbcB(含JS-2012 g B和gC基因的重组Bartha-K61)以及gC基因互换的重组病毒JBcJ(含Bartha-K61 gC基因的重组JS-2012-ΔgE/gI)和Bar-Jc(含有JS-2012-gC的Bartha-K61),为下一步研究gC蛋白在保护性免疫中的作用奠定了基础。综上所述,本研究为PRV变异毒株抗原变异分子基础提供了理论基础,证实了gB变异能够导致Bartha-K61和JS-2012-ΔgE/gI抗原性显著变化,且说明了gB变异在Bartha-K61免疫不完全保护现象中发挥了重要作用。同时,本研究提供了一种高效的基因编辑策略以及重组病毒筛选方法,扩宽了CRISPR/Cas9在DNA病毒基因编辑中的应用,并提供了一种新型伪狂犬病病毒基因工程重组疫苗株的开发策略,成功获得重组病毒BJB可作为新型PRV基因工程疫苗候选株。

关键词：猪伪狂犬病病毒 CRISPR/Cas9 抗原变异糖蛋白B 糖蛋白C

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清吴让之扇面作品

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中国书法 2024年第8期 88-89页

作者： (清)吴让之不详

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解剖与组织胚胎学和学生科学素养的形成

解剖与组织胚胎学和学生科学素养的形成

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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会

作者：于之清张清真余燕河南科技学院动物科学学院

本文从学生的视角总结了大学生科研素养的现状和《解剖与组织胚胎学》课程在培养学生科研素养中的作用,以及在后期大学生科研素养提升过程中的问题与对策。

关键词：解剖与组织胚胎学科学素养大学生

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N蛋白磷酸化位点突变影响猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制及亚基因组的转录

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畜牧兽医学报 2019年第12期50卷 2470-2478页

作者：易和友于之清陈耀李琪韦应芳张桂红华南农业大学兽医学院广州510642 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642 佛山科学技术学院佛山528231

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的N蛋白磷酸化修饰是否对病毒的复制及亚基因组的转录产生影响,将XH-GD PRRSV N蛋白的已知磷酸化位点Ser-105和Ser-120分别或同时突变为Ala,... 详细信息

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的N蛋白磷酸化修饰是否对病毒的复制及亚基因组的转录产生影响,将XH-GD PRRSV N蛋白的已知磷酸化位点Ser-105和Ser-120分别或同时突变为Ala,拯救突变病毒,命名为A105、A120、A105-120,测定其生长曲线和亚基因组的转录水平。结果显示:突变病毒在MARC-145的病毒复制速率与滴度显著低于亲本毒株(P<0.01或P<0.05),而在原代PAMs复制速率降低(P<0.01),不影响病毒最终的滴度。突变毒株的基因组RNA(genomic RNA,gRNA)转录水平显著降低(P<0.01或P<0.05),磷酸化位点突变能显著降低长链亚基因组mRNA(subgenomic RNA,sgmRNA)2、3的转录(P<0.01或P<0.05),但短链sgmRNA4、5表达量随时间呈增加趋势。以gRNA表达量为基准对各亚基因组表达量进行整体分析,发现N蛋白磷酸化显著影响了sgmRNA4和sgmRNA5的表达(P<0.01或P<0.05)。结果提示,N蛋白磷酸化位点突变影响PRRSV的复制及亚基因组转录。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白磷酸化亚基因组

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ATGL在鸡胚出壳前后肝脏中的表达变化及延迟喂食的影响

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中国家禽 2015年第6期37卷 4-7页

作者：余燕吴世秀于之清欧长波王秋霞马金友河南科技学院动物科学学院河南新乡453003

研究旨在探索鸡胚出壳前后ATGL m RNA在肝脏中的表达变化及延迟喂食对刚出壳雏鸡ATGL m RNA表达的影响。Ross肉鸡受精蛋120个,分别于孵化的第15（E15）、18（E18）、21胚龄（E21）和出壳后24、48、72、96和120 h,收集鸡胚或雏鸡,采集肝... 详细信息

研究旨在探索鸡胚出壳前后ATGL m RNA在肝脏中的表达变化及延迟喂食对刚出壳雏鸡ATGL m RNA表达的影响。Ross肉鸡受精蛋120个,分别于孵化的第15（E15）、18（E18）、21胚龄（E21）和出壳后24、48、72、96和120 h,收集鸡胚或雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法,检测鸡胚出壳前后ATGL在肝脏中的表达。出壳后剩余的雏鸡随机分为两组,一组正常饲养作对照,另一组饥饿72 h（正常饮水）,然后开始喂食,分别在饥饿的0、24、48、72 h（F0、F24、F48、F72）和开始喂食的4、8、12、24、48 h（SF4、SF8、SF12、SF24、SF48）取6只雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法检测延迟喂食对雏鸡肝脏ATGL表达的影响。从E15~E18,肝脏中ATGL m RNA的表达量随着胚龄的增加迅速增加,E18达到最高,为2.52±1.06（P〈0.05）;到E21出壳时,ATGL m RNA的表达量仅为E18的36.11%。鸡胚出壳后肝脏中ATGL m RNA的表达量持续下降,到出壳后24 h达到最低,为0.11±0.02（P〈0.05）;出壳后48 h的表达量稍高于出壳时水平,而后逐渐接近于出壳水平并趋向稳定。延迟喂食24 h,肝脏ATGL m RNA的表达量显著高于对照组（P〈0.05）。而开始喂食12 h后,肝脏ATGL的表达量显著低于对照组（P〈0.05）,继续喂食,ATGL m RNA的表达量上升。肝脏中ATGL m RNA的表达量随鸡胚和雏鸡的发育而发生变化,而且短时间的喂食变化对肝脏脂肪代谢有较大影响。

关键词： ATGL 肝脏鸡延迟喂食

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动物训练原理的总结与对比剖析

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家畜生态学报 2024年第8期45卷 80-86页

作者：于汝清中国刑事警察学院警犬技术学院辽宁沈阳110000

动物训练活动已经越来越受到人们的喜爱,但是动物训练基础理论的匮乏,严重地制约着动物训练活动领域的发展。该文全面分析并总结动物行为学以及动物心理学试验研究成果,创新性地提出动物训练的试错训练原理、印随训练原理、顿悟训练原... 详细信息

动物训练活动已经越来越受到人们的喜爱,但是动物训练基础理论的匮乏,严重地制约着动物训练活动领域的发展。该文全面分析并总结动物行为学以及动物心理学试验研究成果,创新性地提出动物训练的试错训练原理、印随训练原理、顿悟训练原理、习惯化训练原理、经典性条件反射训练原理、操作性条件反射训练原理,并且对其进行动物训练实操设计,研究分析各个动物训练原理之间的联系和区别,为该领域进一步的发展提供重要理论参考。

关键词：动物训练原理行为心理强化

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