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日本血吸虫新基因Sj314C10的表达及功能分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第1期36卷 1-6页

作者：杨柳于三科冯新港苑纯秀沈阳刘金明林矫矫蔡幼民西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农科院上海兽医研究所农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海200232

【目的】筛选新的高效抗日本血吸虫病疫苗。【方法】运用"电子cDNA文库"筛选法和快速cDNA末端扩增技术,对日本血吸虫新基因Sj314C10进行了克隆,构建了原核表达载体pET-28a(+)-Sj314C10,并探索了各种条件对表达蛋白的影响;用生物学软件... 详细信息

【目的】筛选新的高效抗日本血吸虫病疫苗。【方法】运用"电子cDNA文库"筛选法和快速cDNA末端扩增技术,对日本血吸虫新基因Sj314C10进行了克隆,构建了原核表达载体pET-28a(+)-Sj314C10,并探索了各种条件对表达蛋白的影响;用生物学软件初步预测了该基因的编码蛋白,用亲和层析法对表达产物进行纯化并完成了表达产物的抗原性检测及其对动物的保护性研究。【结果】表达产物约50 ku,为包涵体蛋白,温度I、PTG浓度和表达时相的改变对该包涵体蛋白的可溶性表达无显著影响;生物信息学分析表明,Sj314C10编码蛋白与杆状病毒凋亡抑制蛋白的重复结构域有78%的同源性,纯化蛋白抗原性良好;小鼠抗血吸虫尾蚴攻击试验显示,与佐剂对照组相比,蛋白免疫组获得了部分保护作用,这为血吸虫候选分子疫苗的研究增添了新内容。【结论】日本血吸虫Sj314C10基因得到了成功表达,所表达蛋白具有良好的抗原性,对小鼠具有一定的免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫新基因Sj314C10 表达纯化功能分析

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汉中地区奶牛结核病的调查研究

动物医学进展 2007年第7期28卷 111-113页

作者：王云霞于三科翟军军西北农林科技大学动物科技学院

按国标方法和全国第4次结核病流行病学调查方案,对汉中市近几年奶牛和奶牛饲养户进行了结核病检疫和调查,结果表明,奶牛结核病阳性率总体上都呈上升趋势,而且交叉感染比较严重。

关键词：奶牛结核病流行病学调查

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牛结核病的现状及诊断研究进展

中国畜牧兽医文摘 2007年第1期23卷 21-22页

作者：王云霞于三科翟军军

1牛结核病的现状牛结核病是由牛分支杆菌和结核分支杆菌所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病,可通过病畜传染给人和其他动物。在那些还流行牛结核病的国家中,人类始终受到该病的威胁,除非消灭了牛结核病,否则人类结核病的控制是不... 详细信息

1牛结核病的现状牛结核病是由牛分支杆菌和结核分支杆菌所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病,可通过病畜传染给人和其他动物。在那些还流行牛结核病的国家中,人类始终受到该病的威胁,除非消灭了牛结核病,否则人类结核病的控制是不会成功的。

关键词：牛结核病结核分支杆菌动物人和分子生物学诊断技术

柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的克隆表达与免疫保护性试验

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柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的克隆表达与免疫保护性试验

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：彭维刚于三科黄妮胡冰林青宋军科西北农林科技大学动物医学院

【目的】对柔嫩艾美耳球虫(***)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达,检测表达产物的免疫保护性,为鸡球虫的基因工程疫苗的研制奠定基础。【方法】以纯化的***杨凌株孢子化卵囊的总.RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因,测序后进行序列... 详细信息

【目的】对柔嫩艾美耳球虫(***)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达,检测表达产物的免疫保护性,为鸡球虫的基因工程疫苗的研制奠定基础。【方法】以纯化的***杨凌株孢子化卵囊的总.RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因,测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-RB1-a重组质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,对其免疫效果进行评价。【结果】*** RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基,编码205个氨基酸,与报道的*** PAPa46株ORF序列相似性为99.84%,两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明,重组质粒表达产物为42 ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示,RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2%和69.4%,卵囊减少率达到37.22%和30.56%,ACI分别为146.2和1.50.4。【结论】RB1-a基因具有很强的保守性,种间差异不大;重组蛋白具有部分免疫保护效果,该研究为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫杨凌株 RB1-a基因克隆表达免疫保护

来源： cnki会议评论

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布鲁氏菌外膜蛋白免疫蛋白质组学方法的建立

免疫学杂志 2008年第4期24卷 385-388页

作者：吴朔赵忠鹏罗德炎叶艺王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点... 详细信息

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点经胶内酶切、肽提取后用基质辅助激光解析/电子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。每个蛋白点的肽质量指纹图谱用Mascot进行检索后,代表了12个开放阅读框。这些蛋白不全是外膜蛋白,还存在胞浆蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域,还有一个功能未知的蛋白。结论成功建立了布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白双向电泳质谱免疫蛋白质组学

应用ELISA检测紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株虫苗抗体

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中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会

作者：李健宋军科战美娜林青于三科西北农林科技大学动物医学院

将无球虫雏鸡随机分为2组,在9日龄和16日龄分别进行首免和二免。用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清抗球虫抗体的变化情况。结果显示,雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势,并且在二免后第11天出现峰值（0.398）,其后稳定地维持... 详细信息

将无球虫雏鸡随机分为2组,在9日龄和16日龄分别进行首免和二免。用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清抗球虫抗体的变化情况。结果显示,雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势,并且在二免后第11天出现峰值（0.398）,其后稳定地维持在较高水平;对照组抗体水平稳中有降。抗体水平动态变化表明,紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株有较强的免疫保护力。

关键词： ELISA 柔嫩艾美耳球虫抗体

来源： cnki会议评论

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秦岭羚牛寄生虫种类的调查研究

秦岭羚牛寄生虫种类的调查研究

猪带绦虫45W-4B基因在家蚕细胞中的表达

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：孙韵于三科李红梅林青宋军科西北农林科技大学动物医学院

2010年4月～2011年5月在陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心对中心所饲养的30头羚牛(Budorcas taxicolor)进行了寄生虫种类的调查与研究,并且剖检了1头羚牛。对这些羚牛按照年龄分为4组进行了寄生虫学检查。应用饱和盐水漂浮法、沉淀...

2010年4月～2011年5月在陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心对中心所饲养的30头羚牛(Budorcas taxicolor)进行了寄生虫种类的调查与研究,并且剖检了1头羚牛。对这些羚牛按照年龄分为4组进行了寄生虫学检查。应用饱和盐水漂浮法、沉淀法、沉淀一漂浮法、蠕虫幼虫检查法以及蠕虫学完全剖检法等方法进行检查,结果表明在这些羚牛寄生虫的感染率为90.00%,其感染强度不均匀。所获标本及虫卵或卵囊经鉴定共有10种,其中原虫2种、吸虫2种、绦虫2种、线虫4种。隶属5目10科10属。它们是住肉孢子虫(Sarcocystis sp.)、羊仰口线虫(Bunostomum trigonocephalum)、印度槽盘吸虫(Ogmacotyle indica)、矛形歧腔吸虫(Dicrocoelium lanceatum)虫卵、捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、美丽筒线虫(Gongylonema pulchrum)、原圆线虫(Protostrongylus sp.)、贝氏莫尼茨绦虫(Moniezia benedeni)、细颈囊尾蚴(Cysticercus tenuicollis)。

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 527-530页

作者：余招锋才学鹏张志芳于三科陈寅林旭瑷中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018 西北农林科技大学畜牧兽医学院陕西杨凌712100

猪带绦虫45W基因已被认为是预防猪囊虫病的基因工程疫苗候选基因之一。其中4B基因是45W基因家族中高度保守的一个成员(以下称45W-4B)。本试验将重组于pGEM-3Z载体上的4B基因转载到pVL1393转移载体中,通过鉴定获得重组质粒pVL1393-4B,然... 详细信息

猪带绦虫45W基因已被认为是预防猪囊虫病的基因工程疫苗候选基因之一。其中4B基因是45W基因家族中高度保守的一个成员(以下称45W-4B)。本试验将重组于pGEM-3Z载体上的4B基因转载到pVL1393转移载体中,通过鉴定获得重组质粒pVL1393-4B,然后将重组质粒与BmNPV病毒共转染,筛选出重组BmNPV-4B重组病毒,用该重组病毒感染Bm细胞,收集细胞上清,SDS-PAGE电泳鉴定表达蛋白,并经Westernblot检测表明该蛋白能识别囊虫病人(猪)阳性血清,45W-4B蛋白的成功表达对进一步研究45W蛋白的结构和功能以及开发高效猪囊虫基因工程疫苗打下了基础。

关键词：猪囊虫 45W-4B基因家蚕表达

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陕西杨陵地区猪弓形虫病的血清学调查研究

动物医学进展 2000年第2期21卷 57-59页

作者：于三科林青刘永庆王旭宇西北农林科技大学动物科学与动物医学学院陕西杨陵712100

应用间接血凝试验 ( IHA)对采自杨陵区食品公司屠宰点、西北农业大学实验农场种猪场、西北农林科技大学兽医院的 2 14份猪血样进行弓形虫抗体的定性检测 ,包括血清检测法 ( 176份 ) ,滤纸干血滴法 ( 38份 )两种方法。结果检出阳性血样 5... 详细信息

应用间接血凝试验 ( IHA)对采自杨陵区食品公司屠宰点、西北农业大学实验农场种猪场、西北农林科技大学兽医院的 2 14份猪血样进行弓形虫抗体的定性检测 ,包括血清检测法 ( 176份 ) ,滤纸干血滴法 ( 38份 )两种方法。结果检出阳性血样 5份 ,阳性率为2 .34 %。其中来自杨陵区食品公司屠宰点猪血样 136份 ,全部用血清检测法测定结果 ;阳性 5份 ,阳性率为 3.6 8%;来自西北农林科技大学农场种猪场血样 76份 ,38份为血清检测法测定 ,38份用滤纸干血滴法测定 ,未检出阳性 ;来自西北农林科技大学兽医院 2份 ,用血清检测法测定。

关键词：猪弓形虫病血清学间接血凝试验