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酵母双杂交筛选雄激素受体辅助调节因子267-α(ARA267-α)的相互作用蛋白

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北京大学学报（医学版） 2004年第5期36卷 514-518页

作者：汪欣买铁军牛亦农王建伟郭应禄北京大学第一医院普外科北京100034 北京大学第一医院泌尿外科北京100034

目的 :通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子 2 6 7 α(androgenreceptor associatedcoregulator2 6 7 α,ARA2 6 7 α)有相互作用的蛋白质 ,为研究ARA2 6 7 α的生理功能寻找证据和方向。方法 :以能表达ARA2 6 7 α中 4个PH... 详细信息

目的 :通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子 2 6 7 α(androgenreceptor associatedcoregulator2 6 7 α,ARA2 6 7 α)有相互作用的蛋白质 ,为研究ARA2 6 7 α的生理功能寻找证据和方向。方法 :以能表达ARA2 6 7 α中 4个PHD(planthomeodomain)和 1个SET[Su(var) 3 9,Enhancer of zeste,Trithorax]结构域的pGBKT7 PHD SET重组质粒为“诱饵” ,采用酵母融合 (yeastmating)方法筛选预转化的人脑cDNA文库。挑选阳性酵母菌落进行质粒提取、限制性内切酶分析和DNA测序。将测序结果在GenBank中进行核苷酸序列同源性比对 ,确定它们所对应的基因。通过再次酵母双杂交排除假阳性相互作用。结果 :筛选cDNA文库共获得约 6 0 0个阳性酵母菌落 ,随机挑选其中的6 5个菌落提取混合质粒。经过在氨苄青霉素培养盘中筛选 ,共得到 4 3个文库pACT2 cDNA质粒。选取 35个酶切片段不同的文库pACT2 cDNA质粒进行测序 ,测序结果比对揭示 ,35个cDNA插入片段来源于 16种不同的基因。酵母双杂交证实其中RanBPM是ARA2 6 7 α的假阳性作用蛋白。结论 :通过筛选cDNA文库发现ARA2 6 7 α可以与多个不同的蛋白质相互作用 ,这提示ARA2 6 7 α可能是一个具有多种生理功能的蛋白分子 ,而RanBPM极可能是一个转录因子。

关键词： ARA 辅助调节因子雄激素受体筛选菌落 DNA质粒相互作用蛋白酵母双杂交 cDNA文库测序

包皮环切联合药物治疗老年前列腺炎的效果观察

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中国老年学杂志 2013年第17期33卷 4265-4266页

作者：买铁军钟伟刘景波张鹏煤炭总医院泌尿外科北京100028

许多老年前列腺炎患者同时合并有包皮过长甚至包茎。本文拟观察包皮环切对老年性前列腺炎的效果。1资料与方法1．1一般资料及诊断标准2008年1月至2010年12月我院泌尿外科门诊就诊的老年男性患者109例，年龄64～95岁，平均78岁，以尿频... 详细信息

许多老年前列腺炎患者同时合并有包皮过长甚至包茎。本文拟观察包皮环切对老年性前列腺炎的效果。1资料与方法1．1一般资料及诊断标准2008年1月至2010年12月我院泌尿外科门诊就诊的老年男性患者109例，年龄64～95岁，平均78岁，以尿频、尿急、尿痛、下腹区坠痛、会阴区胀痛、排尿困难为主诉症状，部分患者有发热、乏力、肌肉一关节酸痛等全身症状。临床表现为急性细菌性前列腺炎和慢性细菌性前列腺炎急性发作。既往史：大部分患者有程度不一的前列腺增生症病史，无严重内科疾患如糖尿病、高血压等病史。

关键词：慢性细菌性前列腺炎包皮环切联合药物治疗老年性老年男性患者急性细菌性前列腺炎前列腺增生症包皮过长

高龄老年女性回肠、乙状结肠双膀胱瘘1例报告并文献复习

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临床泌尿外科杂志 2011年第2期26卷 156-157页

作者：买铁军钟伟宋立伟李涛煤炭总医院泌尿外科北京100028 煤炭总医院普外科

目的:探讨高龄老年女性回肠、乙状结肠双膀胱瘘的临床特点。方法:回顺性分析1例双膀胱瘘高龄老年女性患者临床资料。结果:膀胱部分切除及瘘道切除术后1个月门诊复查,患者排尿、排便均正常。结论:对于既往有腹部手术史、妇产科疾病史,有... 详细信息

目的:探讨高龄老年女性回肠、乙状结肠双膀胱瘘的临床特点。方法:回顺性分析1例双膀胱瘘高龄老年女性患者临床资料。结果:膀胱部分切除及瘘道切除术后1个月门诊复查,患者排尿、排便均正常。结论:对于既往有腹部手术史、妇产科疾病史,有反复尿频、尿急、尿痛症状,同时合并有气尿、粪尿的老年女性患者,应该注意排除多发肠膀胱瘘的可能。

关键词：老年女性膀胱

雄激素受体相关蛋白267-α酵母双杂交诱饵重组质粒的构建及转化

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中华实验外科杂志 2003年第9期20卷 815-816页

作者：买铁军汪欣张志文师长进辛殿旗郭应禄北京大学泌尿研究所 100034 北京大学医院普外科北京大学第一医学部生理教研室

目的　构建和转化雄激素受体相关蛋白 2 67 α(ARA2 67 α)的酵母诱饵重组质粒 ,为通过酵母双杂交研究ARA2 67 α的功能奠定基础。方法　用PCR扩增ARA2 67 α全长cDNA中编码PWWP和PHD SET蛋白结构域的两个基因片段 ;将基因片段与 pGBKT... 详细信息

目的　构建和转化雄激素受体相关蛋白 2 67 α(ARA2 67 α)的酵母诱饵重组质粒 ,为通过酵母双杂交研究ARA2 67 α的功能奠定基础。方法　用PCR扩增ARA2 67 α全长cDNA中编码PWWP和PHD SET蛋白结构域的两个基因片段 ;将基因片段与 pGBKT7载体定向重组 ;用酶切和测序鉴定重组质粒 ;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入AH 10 9酵母菌株。结果　成功构建pGBKT7 PWWP和 pGBKT7 PHDSET重组质粒。分别转化有 2种重组质粒和pGBKT7空载体的3种AH10 9酵母都能在SD/ Trp/X α gal培养基中长成白色菌落 ,但都不能在SD/ His/ Trp/2 .5mmol/L 3 AT/X α gal和SD/ Ade/ Trp/X α gal培养基中生长 ,在SD/ Trp液中培养 16h后 ,A60 0均值分别为 0 .8、0 .9、0 .9。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活HIS3、ADE2和MEL1酵母报告基因表达的活性 ,也没有酵母毒性作用。

关键词：雄激素受体相关蛋白267—α 酵母双杂交技术诱饵重组质粒

雄激素受体辅助调节因子267-a的相互作用蛋白——死亡受体6的鉴定

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中国科学（C辑） 2004年第2期34卷 165-172页

作者：买铁军汪欣张志文辛殿祺那彦群郭应禄北京大学第一医院泌尿外科北京大学泌尿外科研究所北京100034 北京大学第一医院普外科北京100034 北京大学医学部生理教研室北京100083

为了研究新发现的雄激素受体辅助调节因子267-a(androgenreceptor-associatedcoregulator267-a,ARA267-a)的功能,以含有编码ARA267-a中4个PHD和1个SET结构域的cDNA片段构建诱饵重组表达质粒,采用酵母双杂交系统从人脑cDNA文库中筛选与之有相互作用的蛋白质.在筛选文库的阳性克隆中,经过DNA测序和在GenBank中的同源核苷酸序列比对,发现死亡受体-6(deathreceptor-6,DR6)是ARA267--PHD-SET的相互作用蛋白之一.通过再次酵母双杂交、体外免疫共沉淀和哺乳动物细胞双杂交证实DR6的胞内区可以与ARA267-a的PHD-SET结构域相结合.DR6是肿瘤坏死因子受体家族成员之一,它的胞内区含有死亡结构域,参与细胞凋亡信号的传导.这个研究结果提示:有ARA267-a参与的雄激素-雄激素受体通路与有DR6参与的细胞凋亡通路之间可能通过ARA267-a和DR6的相互作用而产生交叉联系.

关键词：雄激素受体辅助调节因子267-α 死亡受体-6 酵母双杂交系统鉴定核受体 cDNA 肿瘤坏死因子

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蛋白组学技术在泌尿学研究中的应用

现代泌尿外科杂志 2004年第2期9卷 119-121页

作者：买铁军郭应禄北京大学第一医院泌尿外科研究所，北京100034

1 从基因组学到蛋白组学人类基因组计划的实施使人类获得了空前数量的DNA序列信息资源[1].人们利用基因组学技术在DNA和RNA水平开展了基因与各种疾病关系的研究,取得了很大的成就.与此同时,研究人员也逐渐认识到作为细胞结构和功能主要... 详细信息

1 从基因组学到蛋白组学人类基因组计划的实施使人类获得了空前数量的DNA序列信息资源[1].人们利用基因组学技术在DNA和RNA水平开展了基因与各种疾病关系的研究,取得了很大的成就.与此同时,研究人员也逐渐认识到作为细胞结构和功能主要执行者的蛋白质虽由基因编码,但两者之间却不是线性对应关系[2]:基因组在很大程度上是相对稳定的,而蛋白质的质和量却随细胞类型和细胞内外环境的变化而处于不断变化的动态过程; mRNA的剪接、翻译后修饰(如磷酸化、去磷酸化、糖基化、水解等)等转录后调控机制会改变蛋白质的类型、数量和活性形式.因此从DNA的序列分析中,我们不能预测出哪种蛋白质会表达、何时表达、表达的量有多少.所以,若想对疾病的本质进行更深入的了解,就必须对蛋白质的功能进行全面系统的研究.不断完善的蛋白质研究技术以及随基因组计划发展起来的生物信息学数据库和分析软件,为大规模研究蛋白组提供了可行性的技术支持,蛋白组学由此应运而生[3].

关键词：蛋白组学泌尿学基因组学凝胶蛋白质质谱分析生物信息学分析

Clusterin前导序列抗前列腺癌细胞凋亡作用的研究

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中华泌尿外科杂志 2004年第6期25卷 404-407页

作者：牛亦农辛殿祺丁义杨风光买铁军周利群潘柏年那彦群郭应禄北京大学第一医院北京大学泌尿外科研究所100034

目的　探讨clusterin前导序列在抗前列腺癌细胞凋亡中的作用。　方法　培养转染全长clusterin序列的LNCaP细胞 (简称A)及缺少前导序列clusterin的LNCaP细胞 (简称B)为试验组 ,培养野生型 (简称L)及转染PIRES2 EGFP永久表达载体的LNCaP... 详细信息

目的　探讨clusterin前导序列在抗前列腺癌细胞凋亡中的作用。　方法　培养转染全长clusterin序列的LNCaP细胞 (简称A)及缺少前导序列clusterin的LNCaP细胞 (简称B)为试验组 ,培养野生型 (简称L)及转染PIRES2 EGFP永久表达载体的LNCaP细胞 (简称M)为对照组 ,RT PCR法检测 4组细胞的clusterinmRNA水平。以TNF α进行诱导 ,检测L组细胞clusterinmRNA的变化 ,MTT及ELISA法检测 4组细胞的增殖活性与凋亡情况。　结果　B、A组细胞clusterinmRNA水平均显著高于L、M组 (P均 0 .0 5 )。TNF α作用 2h时 ,与对照组 (A =12732 .0± 5 1.1)相比L组细胞clusterinmRNA有一过性升高 (A =15 6 4 2 .0± 6 4 .3) ,t =- 77.10 6 ,P <0 .0 1;12、2 4hmRNA显著降低 (A =1170 5 .3± 30 .7,984 8.0± 6 7.4 ,t=2 4 .890 ,4 8.0 2 0 ,P均 <0 .0 1) ;TNF α作用 2 4h后 ,A组细胞存活比例 (0 .75 97± 0 .0 2 5 1)显著高于B组细胞 (0 .6 6 97± 0 .0 185 )及对照组 (0 .6 80 8± 0 .0 2 2 2 ,0 .6 991± 0 .0 2 91) ,P均 <0 .0 1;A组细胞凋亡程度 (A =0 .32 6 5± 0 .0 387)显著低于B组细胞 (A =0 .5 6 5 0± 0 .0 32 4 )及对照组 (A =0 .5 892± 0 .0 4 18,0 .6 2 36± 0 .0 311。

关键词： Clusterin前导序列前列腺癌细胞凋亡癌细胞肿瘤

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原发性输尿管恶性肿瘤28例早期诊治分析

中国煤炭工业医学杂志 2009年第8期12卷 1184-1186页

作者：钟伟祝志臻李哲买铁军煤炭总医院北京市100028

目的提高原发性输尿管恶性肿瘤的早期诊治水平。方法总结13年间收治的28例原发性输尿管恶性肿瘤患者。男∶女为18∶10,平均年龄61岁。左侧20例,右侧5例,双侧2例,单侧多中心1例。肉眼血尿占64.3%,镜下血尿占35.7%。超声提示肾盂积水23例... 详细信息

目的提高原发性输尿管恶性肿瘤的早期诊治水平。方法总结13年间收治的28例原发性输尿管恶性肿瘤患者。男∶女为18∶10,平均年龄61岁。左侧20例,右侧5例,双侧2例,单侧多中心1例。肉眼血尿占64.3%,镜下血尿占35.7%。超声提示肾盂积水23例、输尿管低回声占位15例。IVU提示肾盂积水16例、输尿管充盈缺损6例。成功逆行肾盂造影检查26例,输尿管充盈缺损23例。螺旋CT扫描阳性率为78.6%(22/28)。IVU显示不清8例患者MRU检查均显示患侧肾积水并见充盈缺损。结果28例均行手术治疗,11例行肿瘤局部输尿管切除术,8例行肾切除加输尿管部分切除,5例行输尿管下段切除膀胱移植术,4例行肾、输尿管全长加膀胱袖状或膀胱部分切除。术后病理报告移行细胞癌26例,腺癌1例,鳞癌1例。前7年的13例中,失访2例,存活2,3,5,6,8年者分别为1,3,4,1,2例,>5年生存率为63.6%。后6年的15例中,失访1例,术后存活1,3,5,7,10年者分别为2,3,5,3,1例,>5年生存率为64.2%。结论超声是发现肾积水的敏感方法,尤其在体检中能早期发现,肾积水成为早期诊断输尿管肿瘤的重要线索。IVU、螺旋CT是追查肾积水的基本检查,逆行肾盂造影是诊断输尿管癌不可缺少的有创深入检查,MRU可弥补IVU和逆行肾盂造影检查的缺陷。本组患者由于发现较早,肿瘤分期分级低,5年生存率较高。

关键词：输尿管肿瘤癌原发性早期诊断

人肾透明细胞癌中ki-67 bcl-2 bax p53表达及癌细胞自发凋亡率的临床意义

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山西医药杂志 2004年第2期33卷 108-110页

作者：买铁军胥枫林刘俊生山西医科大学第二医院 030001

目的　探讨人肾透明细胞癌中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3表达及癌细胞自发凋亡率的临床意义。方法　选取 4 8例档存的肾透明细胞癌石蜡包埋标本 ,采用免疫组织化学方法检测癌细胞中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3的表达 ,采用缺口末端标... 详细信息

目的　探讨人肾透明细胞癌中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3表达及癌细胞自发凋亡率的临床意义。方法　选取 4 8例档存的肾透明细胞癌石蜡包埋标本 ,采用免疫组织化学方法检测癌细胞中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3的表达 ,采用缺口末端标记法 ( TU NEL )检测癌细胞的自发凋亡率。结果　 ki- 6 7表达率 ( PI)为 0 .15 %～ 36 .4 % ,随TNM分期的增高而增高。癌细胞自发凋亡率 ( AI)为 0 .2 %～ 15 .4 % ,随 TNM分期的增高有上升趋势。各因子之间关系分析 :1高 bax表达组的癌细胞凋亡率高 ;2 p5 3阴性组的 AI高 ,bax高 ,PI低 ;3未发现 bcl- 2与其他因子间有相关关系。预后分析 :PI、AI、p5 3、bax、bcl- 2 / bax、TNM是预后因素 ,PI、p5 3是独立预后因素。结论　细胞增生状态、细胞凋亡状态以及凋亡调控因子的表达情况是影响肾透明细胞癌发生。

关键词：人肾透明细胞癌 ki-67 bcl-2 bax p53 癌细胞自发凋亡率检测