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重组人IL-4大肠杆菌表达与纯化

生物工程学报 2006年第6期22卷 962-967页

作者：邱燕孙九如黄阳滨黄智华陈霖杰刘勇林跃鑫福建师范大学生命科学学院福州350007 上海新生源生物医药有限公司上海201203

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因,以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式。采用5L发酵罐培养工程菌,发酵液... 详细信息

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因,以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式。采用5L发酵罐培养工程菌,发酵液OD600为0.6时诱导3.5h收集菌体,检测目的蛋白的表达量。收集的菌体经压榨破菌获得包涵体,通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhIL-4进行纯化。采用人红细胞白血病细胞(TF-1)测定纯化的rhIL-4的生物活性。测序表明目的基因已插入载体pET30a(+)中,重组蛋白以包涵体形式表达,单位体积重组蛋白的表达量达200mg/L发酵液,建立了对包涵体形式表达的rhIL-4纯化方法,最终得率为40mg/L发酵液,纯度大于98%,回收率为20%以上。免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为IL-4,N端氨基酸序列测定结果与理论相符,生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×106AU/mg。这为rhIL-4进一步产业化研究建立了基础。

关键词： rhIL-4 大肠杆菌发酵纯化

银鲫口服嗜水气单胞菌疫苗的免疫和免疫组化研究

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水生生物学报 2007年第1期31卷 125-130页

作者：李新华沈锦玉尹文林潘晓艺沈智华浙江省淡水水产研究所湖州313001

室内恒温条件下(水温24±1℃)分别用微胶囊疫苗与全细胞疫苗口灌免疫银鲫,口灌免疫后每周取血和前、中、后肠肠黏膜,间接ELISA检测其抗体效价。结果发现:微胶囊疫苗组鱼血清抗体效价较高,峰值为1∶80,且维持时间较长;各肠段的黏膜抗体中... 详细信息

室内恒温条件下(水温24±1℃)分别用微胶囊疫苗与全细胞疫苗口灌免疫银鲫,口灌免疫后每周取血和前、中、后肠肠黏膜,间接ELISA检测其抗体效价。结果发现:微胶囊疫苗组鱼血清抗体效价较高,峰值为1∶80,且维持时间较长;各肠段的黏膜抗体中,后肠黏膜抗体效价最高,微胶囊疫苗组峰值达1∶320,前肠的肠黏膜抗体效价也有一定的水平为1∶40;肠道免疫组化试验也得到相似结果:在不同时间对前、中、后肠切片进行免疫组化染色,从光镜下观察到肠黏膜外层和黏膜下层都有阳性着色,以包裹全菌苗为最多,未包裹菌苗较少。同时进行两组疫苗的池塘网箱免疫试验,结果表明:微胶囊疫苗组与全细胞疫苗组的相对百分成活率分别为61.1%和50%,微胶囊疫苗组略高于全细胞疫苗组;口服免疫后两组鱼血清中均能产生较高的抗体效价,在30d左右抗体效价最高达1∶512,能维持较长时间约8—10个月,但两者差异不显著。

关键词：嗜水气单胞菌海藻酸钠口服免疫免疫组化

莫尔格勒河下游河道走廊湿地和多联生态库塘的设计与效果分析

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莫尔格勒河下游河道走廊湿地和多联生态库塘的设计与效果分析

第十九届中国水论坛

作者：蒋艳方金鑫黄智华中国水利水电科学研究院云南省水文水资源局丽江分局

莫尔格勒河下游河道的水质超标因子为化学需氧量和高锰酸盐指数(劣V类),为了减缓污染水体入流对海拉尔的影响,在莫尔格勒河下游河道构建近自然的河道走廊湿地和多联生态库塘系统,将河床改造为混合生态填料床,利用"基质-水生植物-微生物... 详细信息

莫尔格勒河下游河道的水质超标因子为化学需氧量和高锰酸盐指数(劣V类),为了减缓污染水体入流对海拉尔的影响,在莫尔格勒河下游河道构建近自然的河道走廊湿地和多联生态库塘系统,将河床改造为混合生态填料床,利用"基质-水生植物-微生物-底栖动物"复合湿地生态系统,提高河道走廊湿地的系统温度和稳定运行效果,解决自然湿地在低温条件下由于植物枯亡、动物休眠以及微生物活性下降所带来的运行性能大幅度下降的问题。经估算化学需氧量和高锰酸盐指数削减量约808.49～1616.98t/a和65.60～131.21t/a,可使呼和诺尔下的水质达到地表水Ⅴ类,逐步恢复受损河流生态系统结构与功能。

关键词：莫尔格勒河水质浓度河道走廊湿地多联生态库塘混合生态填料床水生植物底栖动物

来源： cnki会议评论

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遗传闭包的最大度问题

新疆师范大学学报（自然科学版） 2007年第3期26卷 24-25,28页

作者：王娜杜智华新疆师范大学数理信息学院数学系新疆乌鲁木齐830054

文章讨论了两种特殊超图的最大度与其遗传闭包最大度之间的关系,并举出在一般超图中最大度与其遗传闭包最大度无必然联系的一个例子.

关键词：超图遗传闭包最大废

皖南地区幽门螺杆菌根除失败的相关危险因素分析

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右江民族医学院学报 2019年第6期41卷 629-632,641页

作者：胡智华牛小平皖南医学院弋矶山医院

目的比较皖南地区不同四联治疗方案根除幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的效果,探讨Hp根除失败的危险因素。方法选取我院消化内科门诊就诊305例经14C尿素呼气试验(14C urea breath test,14C-UBT)检测阳性的患者作为研究对象,随机分... 详细信息

目的比较皖南地区不同四联治疗方案根除幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的效果,探讨Hp根除失败的危险因素。方法选取我院消化内科门诊就诊305例经14C尿素呼气试验(14C urea breath test,14C-UBT)检测阳性的患者作为研究对象,随机分成4组,使用不同的四联疗法根除Hp:方案A为艾司奥美拉唑+克拉霉素+阿莫西林+胶体果胶铋,方案B为雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林+胶体果胶铋,方案C为艾司奥美拉唑+丽珠维三联制剂(替硝唑+克拉霉素+枸橼酸铋钾),方案D为雷贝拉唑+丽珠维三联制剂,疗程均为14 d。治疗结束后4周,采用14C-UBT复查Hp。分析比较不同根除方案、年龄、性别、居住地、职业、刷牙次数、月收入、文化程度、饮酒、高血压、糖尿病、胃镜下表现、吸烟等因素对Hp根除率的影响。结果260例成功根除,45例根除失败。随着刷牙次数的增多Hp根除率呈现上升的趋势,但差异无统计学意义(P=0.826)。不同的治疗方案根除率存在差异,质子泵抑制剂(proton pump inhibitors,PPI)种类对Hp根除率无明显影响(P>0.05),抗生素的选择对Hp根除率影响较大,PPI+阿莫西林+克拉霉素+胶体果胶铋联用方案根除率明显高于PPI+丽珠维三联制剂(P0.05)。Logistic回归分析显示不同的Hp根除方案及吸烟是Hp根除失败的独立危险因素(P<0.05)。结论不同的Hp根除方案、吸烟是影响皖南地区Hp根除率的独立危险因素。

关键词：幽门螺杆菌根除危险因素

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复方柴胡注射液的气相色谱分析

中国药学杂志 1984年第8期 59-60页

作者：王智华洪筱坤周强林光伟上海中医学院中药系分析化学教研组

复方柴胡注射液是常用的中药针剂,以北柴胡Bupleurum chinese D.C.、华细辛Asarum sie-boldi Miq.的挥发油为主要成分,主要用于伤风和流行性感冒等上呼吸道感染引起的发热。但在临床应用中存在着疗效不稳定的缺点,这是由于该针剂的标示... 详细信息

复方柴胡注射液是常用的中药针剂,以北柴胡Bupleurum chinese D.C.、华细辛Asarum sie-boldi Miq.的挥发油为主要成分,主要用于伤风和流行性感冒等上呼吸道感染引起的发热。但在临床应用中存在着疗效不稳定的缺点,这是由于该针剂的标示量是以每ml注射液所对应的生药g数来说明,实难正确地表示其质量。

关键词：复方柴胡注射液中药北柴胡华细辛竹叶柴胡相对值批号

微粒体环氧化物水解酶基因多态性与肺癌易感性的Meta分析

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微粒体环氧化物水解酶基因多态性与肺癌易感性的Meta分析

全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议

作者：李坤尹智华周宝森中国医科大学流行病教研室辽宁省高校肿瘤病因与预防重点实验室

目的微粒体环氧化物水解酶(microsomal epoxide hydrolase,mEH)是一种重要的生物转化Ⅱ相代谢酶,广泛参与了多种环境致癌物如多环芳烃,杂环胺等的代谢。编码mEH酶的EPHX1基因113密码子T→C转换使酪氨酸Tyr被组氨酸His取代,导致了酶活性...

目的微粒体环氧化物水解酶(microsomal epoxide hydrolase,mEH)是一种重要的生物转化Ⅱ相代谢酶,广泛参与了多种环境致癌物如多环芳烃,杂环胺等的代谢。编码mEH酶的EPHX1基因113密码子T→C转换使酪氨酸Tyr被组氨酸His取代,导致了酶活性降低40-50%,而139密码子A→G转变使组氨酸His由精氨酸Arg代替,结果引起酶活性升高25%。虽然EPHX1基因多态与肺癌易感性的关系目前已有多篇文献报道,但研究结果仍存在争议,本研究拟通过Meta分析的方法综合评价EPHX1 Tyr113His,His139Arg位点基因多态及mEH酶活性与肺癌的关联性。方法以"lung cancer","EPHX1","microsomalepoxide hydrolase",and"polymorphism"英文检索词和"肺癌"、"微粒体环氧化物水解酶"、"基因多态"中文关键词检索中外文献数据库有关EPHX1基因多态与肺癌易感性关系的病例对照研究,按照制定的纳入标准筛选文献并提取第一作者,发表年份,种族,对照人群来源,病例组与对照组113Tyr/His,139 His/Arg的等位基因频率,基因型频率和表达的mEH酶活性等相关数据。文献异质性用Q检验和I值综合判断,采用固定效应模型或随机效应模型对OR值进行合并,并进行敏感性分析和发表偏倚的评价。结果共纳入16篇符合标准的文献,其中研究Tyr113His位点15篇,累积包括2,819例病例和6,367例对照,His139Arg位点16篇,累积包括3,127例病例和6,621例对照,有7篇文献研究了mEH酶活性。分析结果显示,Tyr113His位点病例组C等位基因频率显著低于对照组人群(28.4%vs.31.3%),P=0.008,与EPHX1-113Tyr/Tyr型相比,携带Tyr/His+His/His型发生肺癌的风险明显降低(OR=0.82,95%CI:0.75-0.91,P<0.001);而His139Arg位点病例组的G等位基因频率为21.8%,明显高于对照组的18.7%,P=0.026,且携带EPHX1-139His/Arg+Arg/Arg型发生肺癌的风险是His/His型携带者的1.26倍(OR=1.26,95%CI:1.04-1.52,P=0.016);mEH高代谢活性和中间代谢与低代谢活性相比肺癌发生风险的OR值分别为1.57、1.25。结论 EPHX1 Tyr113His位点突变基因型可能是肺癌的保护因素,而His139Arg位点突变基因型则能够增加肺癌的易感性,mEH酶可能随着活性的升高患肺癌的风险增加。

关键词：

来源： cnki会议评论

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孟鲁司特对于小儿支气管哮喘的辅助治疗研究

四川生理科学杂志 2021年第10期43卷 1714-1716页

作者：王智华彭媛内江市东兴区人民医院药剂科四川内江641100 川北医学院附属医院药剂科四川南充637000

目的:小儿支气管哮喘应用孟鲁司特辅助沙丁胺醇等药物治疗的效果观察。方法:选取2019年10月至2020年10月接收的小儿支气管哮喘患儿84例,随机分为对照组(布地奈德+沙丁胺醇)和观察组(布地奈德+沙丁胺醇+孟鲁司特),各42例,经过2周治疗后,... 详细信息

目的:小儿支气管哮喘应用孟鲁司特辅助沙丁胺醇等药物治疗的效果观察。方法:选取2019年10月至2020年10月接收的小儿支气管哮喘患儿84例,随机分为对照组(布地奈德+沙丁胺醇)和观察组(布地奈德+沙丁胺醇+孟鲁司特),各42例,经过2周治疗后,对比两组患儿治疗有效性、治疗前后内皮素(Endothelin 1,ET-1)、半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)水平及不良反应发生率。结果:观察组治疗有效率95.42%,高于对照组的78.57%,两组有统计学差异(P0.05。结论:小儿支气管哮喘应用孟鲁司特辅助治疗可降低炎性反应,疗效确实,且安全性较好,值得借鉴。

关键词：小儿支气管哮喘孟鲁司特沙丁胺醇炎性反应安全性

内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳

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中国脊柱脊髓杂志 2012年第4期22卷 292-296页

作者：姚女兆王文军王麓山晏怡果李学林欧阳智华南华大学附属第一医院脊柱外科湖南省衡阳市 421001

目的：探讨内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳的临床可行性及其疗效。方法：2006年1月至2009年12月采用内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳患者13例，男8例，女5例；年龄17～65岁... 详细信息

目的：探讨内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳的临床可行性及其疗效。方法：2006年1月至2009年12月采用内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳患者13例，男8例，女5例；年龄17～65岁，平均46．8岁。JeffersonⅡ型骨折6例，Jefferson Ⅲ型骨折1例，寰枢椎脱位3例，陈旧性齿状突骨折3例。患者均有枕颈部不适和活动受限，术前VAS评分为3．2—4．1分，平均3．8分：2例伴有不同程度脊髓功能损害者，按Frankel分级C级1例，D级1例。随访患者临床症状改善和植骨融合情况。结果：均在内镜辅助下顺利完成手术，13例患者共置入26枚螺钉；手术时间60～130min，平均80min；术中出血110～290ml，平均190ml。术中无脊髓、椎动脉损伤等并发症。术后复查CT显示1枚螺钉位置欠佳，螺钉外斜角偏小且上斜角偏大，螺钉部分进入椎管，但未损伤脊髓，未做处理；25枚位置良好。寰枢关节基本复位，固定可靠。术后随访12～60个月，平均18个月，末次随访时VAS评分降至1．0～2．0分，平均1-3分，与术前比较有统计学差异（P〈0．05）。2例伴颈髓损伤患者的症状均有改善，Frankel分级C级者恢复到D级，D级者恢复到E级。12例患者术后3个月开始出现植骨融合，末次随访时寰枢关节间隙植骨均达到融合；1例患者未见明显植骨融合，但寰枢关节稳定性良好，未出现断钉等并发症。结论1内窥镜辅助下前路经寰枢关节螺钉固定植骨融合术治疗上颈椎不稳是可行的，能取得较好的治疗效果，且在一定程度上克服了传统手术显露困难的缺点，从而减少手术并发症。

关键词：上颈椎不稳经寰枢关节螺钉固定脊柱融合术内窥镜微创