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FMDV非结构蛋白3ABC单克隆抗体制备及其生物传感器的初步研究

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FMDV非结构蛋白3ABC单克隆抗体制备及其生物传感器的初步研究

作者：侯向玉重庆理工大学

学位级别：硕士

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的感染性强、传播途径广、持续性感染且易突变的人畜共患疾病,主要侵害偶蹄目动物牛、羊、猪等。目前在口蹄疫诊断技术中血清学检测在临床较普遍,其中病毒中和试验（Virus neutr... 详细信息

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的感染性强、传播途径广、持续性感染且易突变的人畜共患疾病,主要侵害偶蹄目动物牛、羊、猪等。目前在口蹄疫诊断技术中血清学检测在临床较普遍,其中病毒中和试验（Virus neutralization test,VNT）诊断FMD准确可靠,但需要动用活毒,对实验室的要求比较高,正向间接血凝试验（Indirect Hemagglutination Assay,IHA）对环境比较敏感,外界的条件影响检测结果。液相阻断酶联免疫吸附试验（Liquid-phase blocking enzyme-linked immunosorbent assay,LPB-ELISA）适合于大批量血清样品的检测,但操作繁琐耗时,检测灵敏度有限。因此探索一种快速、灵敏、简单方便的检测技术对口蹄疫的防控有十分重要的意义。我国目前主要采取疫苗防控策略,在疫苗加工过程中,非结构蛋白（Non-structural protein,NSPs）会被除去,所以免疫动物体内不会产生针对NSPs的抗体,只会诱导产生针对（Structural protein,SPs）的抗体。而当感染FMDV并出现病毒复制后,无论表现为临床还是亚临床症状,动物体内会产生针对SPs和NSPs的两种抗体。研究表明,口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白抗体的检测是区分感染动物和接种疫苗动物的可靠诊断方法,其中非结构蛋白3ABC是最可靠的FMD感染“指示器”。MXene具有过渡金属碳化物的金属导电性,允许PtPd NPs纳米材料共价结合,再与高比表面积、可调孔径的共价有机骨架材料（Covalent Organic Frameworks,COFs）组合优化可以提高电化学生物传感器的灵敏度。另外,作为类石墨烯材料的二硫化钼（Molybdenum disulfide,MoS）,具有比表面积大、可调节谐带宽窄等优点,可以使极大角度光纤光栅（Excessively tilted fiber grating,Ex-TFG）生物传感器的检测限变宽。本研究旨在制备出特异性强、活性高的FMDV 3ABC单克隆抗体,并以此试剂为原料,构建基于PtPd NPs/MXene/COFs的电化学生物传感器和基于MoS集成Ex-TFG的光纤生物传感器,用于口蹄疫抗体的快速检测,为口蹄疫的诊断提供新的检测技术。本文研究内容:（1）FMDV 3ABC单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定。将酵母真核表达系统表达的3ABC重组蛋白与等体积弗氏佐剂混合,充分乳化后作为免疫原,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠。使用PEG法进行细胞融合,采用间接ELISA法对融合细胞及亚克隆后的细胞上清进行重复筛选,采用BALB/c小鼠体内诱生法制备腹水,利用Protein A柱纯化,并对纯化后的抗体进行生物特性鉴定。（2）基于PtPd NPs/MXene/COFs复合材料修饰玻碳电极的FMDV 3ABC抗体电化学生物传感器构建。采用氢氟酸刻蚀法制备二维材料MXene,使用氧化还原法制备PtPd NPs/MXene,通过溶剂热法合成COFs;材料表征成功后,在裸玻碳电极上依次滴加材料溶液进行传感器修饰,材料通过共价结合方式固定到传感器上,然后FMDV3ABC抗原的羧基与材料上的羟基发生脱水缩合而固定到传感器上,检测不同浓度的FMDV 3ABC抗体样品,借助电化学工作站检测出电极上的感应电流情况,从而实现口蹄疫抗体快速检测。（3）基于MoS集成Ex-TFG生物传感器的FMDV 3ABC抗体快速检测方法研究。采用MoS修饰极大角度倾斜光纤光栅（Ex-TFG）生物传感器,经过光纤表面预处理、羟基化、硅烷化以及MoS修饰等一系列修饰过程,使Ex-TFG表面带有巯基,由于MoS表面硫原子缺失而形成缺陷位点能够与巯基结合,然后再通过MoS的高疏水性将FMDV 3ABC抗原固定在光纤表面,将制备得到的生物传感器用于检测FMDV 3ABC抗体,并对该传感器的性能进行评价。结果:（1）成功制备FMDV 3ABC单克隆抗体。细胞融合率达到94.10%,阳性率为29.86%。经过两次亚克隆,获得3株稳定分泌3ABC抗体的单克隆细胞株,命名为1-4D、3-6H、4-8F。选取其中效价最高的4-8F细胞株进行二次亚克隆,其亚型鉴定为Ig G1亚类。对腹水型单抗进行纯化,纯化后的单抗纯度较高,浓度最高可达1.1923 mg/m L,并且纯化后的FMDV 3ABC单克隆抗体能够与重组FMDV 3ABC抗原特异性结合,其效价为1:128 000。（2）成功构建基于PtPd NPs/MXene/COFs修饰的电化学生物传感器。该传感器3ABC抗体的检测范围为100 fg/m L到100 ng/m L之间,检测限为

关键词： FMDV3ABC 单克隆抗体 PtPd NPs/MXene/COFs复合材料电化学生物传感器 MoS2 Ex-TFG生物传感器

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大碰撞与地球内部神秘的团块

Science Bulletin 2024年第3期69卷 293-294页

作者：鲍习源 Department of Earth Planetaryand Space SciencesUniversity of CaliforniaLos Angeles CA 90095USA

Deep within the Earth’s mantle,above the core-mantle boundary(CMB),lie two enigmatic structures known as Large Low-Velocity Provinces(LLVPs).Revealed from global seismic tomography,a technique akin to medical computed tomography(CT)scans but for the Earth,the LLVPs take almost antipodal regions in the lowermost mantle,one beneath the Pacific Ocean,one beneath Africa[1].Each of the two vast regions occupies roughly the size of a continent laterally and extends 500–1500 km above the CMB[2,3].They are characterized by anomalous seismic properties,i.e.,seismic waves noticeably decelerate upon encountering these *** has led to numerous questions about their origin,composition,and role in Earth’s geodynamic processes,and also has intrigued Earth scientists especially geophysicists for decades.

关键词：地球内部 mantle Earth

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差异化整合:县级政府政策执行的有效策略

农业经济问题 2024年

作者：张健培向玉琼温瑜中国人民大学公共管理学院南京农业大学公共管理学院暨南大学公共管理学院

在中国科层体系中,县级政府处于承上启下的关键枢纽,在政策执行过程中发挥着重要作用。既有研究聚焦于特定场景的执行策略,忽视了复杂政策的场景多样性与策略差异性。本文基于政策整合的理论视角,根据整合界面与整合方式的不同,区分了... 详细信息

在中国科层体系中,县级政府处于承上启下的关键枢纽,在政策执行过程中发挥着重要作用。既有研究聚焦于特定场景的执行策略,忽视了复杂政策的场景多样性与策略差异性。本文基于政策整合的理论视角,根据整合界面与整合方式的不同,区分了县级政府政策执行的四种策略:统领式整合、嵌入式整合、互惠式整合与吸纳式整合,进而以W县农村生活垃圾治理为例,分析县级政府如何通过差异化整合提升政策执行效能。研究发现,政策整合的本质是对政策关系的调适,决策者基于不同的互动场域,灵活选择合适的整合策略,提升了政策执行的集体认同感、资源配置力与组织适应性。不同的整合策略不分优劣,是县级政府根据具体情境所作出的理性选择,体现了党政统合与共同创造的双重逻辑。提升政策执行效能,县级政府需要根据问题场景,合理选择执行策略,调适多元主体关系,提升资源配置效益。

关键词：政策整合政策执行县级政府垃圾治理

交互式统合治理:政府数字平台的运作逻辑——基于“越秀越有数”平台实践的分析

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理论探讨 2024年第3期 55-64页

作者：向玉琼朱仁森南京农业大学公共管理学院江苏南京210095

人工智能、云计算等数字技术的发展改变了社会生产方式与人的行动模式,以数字技术驱动和科层组织支撑为特征的政府数字平台日益成为社会治理的重要载体。基于“越秀越有数”平台的案例分析发现,在党组织统领下,政府数字平台的行动主体... 详细信息

人工智能、云计算等数字技术的发展改变了社会生产方式与人的行动模式,以数字技术驱动和科层组织支撑为特征的政府数字平台日益成为社会治理的重要载体。基于“越秀越有数”平台的案例分析发现,在党组织统领下,政府数字平台的行动主体、运作界面与服务资源等要素组成了一个彼此关联的有机整体。在情境反馈机制的作用下,治理要素之间建构起交互共生的关系,进而使得平台在回应复杂社会需求时呈现“交互式统合治理”的运作逻辑。遵循这种逻辑的数字平台既具有宏观组织贯通体系所带来的统筹稳定,又具有中观行动调适机制所带来的灵活普惠,因而能有效回应中国社会统筹兼顾秩序与活力的治理命题。在一定程度上,理解平台也即理解转型中的中国社会治理。

关键词：政府数字平台交互式统合治理秩序与活力 “越秀越有数”平台数字政府

嵌入—激发:农村人居环境治理中社会动员促成合作行动的逻辑

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农业经济问题 2024年第6期 118-131页

作者：向玉琼赵焱鑫南京农业大学公共管理学院南京210095

农村生态环境治理具有高度复杂性,需要政府和社会多元主体参与其中,而如何通过社会动员促成合作行动,则是一个重要议题。本文以首批106个全国村庄清洁行动先进县为案例,通过扎根理论的质性研究方法对文本资料进行逐级编码,探究专项整治... 详细信息

农村生态环境治理具有高度复杂性,需要政府和社会多元主体参与其中,而如何通过社会动员促成合作行动,则是一个重要议题。本文以首批106个全国村庄清洁行动先进县为案例,通过扎根理论的质性研究方法对文本资料进行逐级编码,探究专项整治行动背景下社会动员如何促成政府与村民间的合作行动。研究发现:“嵌入—激发”是社会动员促成合作行动的总体逻辑。其中,社会动员包括环境营造、建制规范、知识引导、激励强化以及协商对话五种路径,其核心作用机制为嵌入式动员与层层激发。政府一方面基于行政嵌入、制度嵌入、知识嵌入、利益激励以及关系嵌入等方式嵌入乡村社会,另一方面在“规则驱动—理性引导与情感同化—道德内化”的层层递进链条下激发村民的合作行动意识。社会动员可形成权威推进式、情感激励型、力量整合型三种模式,而“嵌入—激发”在不同模式中有不同的体现。“嵌入—激发”框架揭示出社会动员促成合作行动过程中的双重机制,为人居环境整治行动提供了有益的政策启示。

关键词：农村人居环境治理社会动员嵌入—激发合作行动

论习近平新时代中国特色社会主义思想的方法体系

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山东社会科学 2024年第4期 31-38页

作者：曹晓习高奇山东大学马克思主义学院

习近平新时代中国特色社会主义思想的方法体系是以习近平同志为核心的党中央在治国理政实践中创造性运用马克思主义世界观和方法论解决中国具体实际问题而形成的一个内涵丰富、逻辑严密的方法系统,其中的方法论、思维方法、工作方法上... 详细信息

习近平新时代中国特色社会主义思想的方法体系是以习近平同志为核心的党中央在治国理政实践中创造性运用马克思主义世界观和方法论解决中国具体实际问题而形成的一个内涵丰富、逻辑严密的方法系统,其中的方法论、思维方法、工作方法上下贯通、彼此关联,构成和谐统一的有机整体,并呈现出时代性、实践性、人民性、开放性、创新性、系统性、战略性等鲜明特征。这一方法体系赋予了马克思主义方法论以新的时代内涵和实践价值,是马克思主义中国化时代化的重要成果,是习近平新时代中国特色社会主义思想的重要组成部分,是新时代中国共产党人认识世界、改造世界,带领人民以中国式现代化全面推进中华民族复兴伟业的精神武器和科学手段。

关键词：习近平新时代中国特色社会主义思想方法体系形成条件系统结构鲜明特色

综合执法权下沉乡镇街道的实践样态、现实困境与法治回应

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行政法学研究 2024年第4期 136-146页

作者：郭胜习湖南师范大学法学院湖南长沙410081

既有的“行政委托论”和“法律法规授权论”无法有力解释“综合执法权交由乡镇街道行使”的执法体制改革,有必要对此作出法治回应。理论层面,澄清“行政授权理论”内涵外延,明确“法律法规规定+行政命令决定”的职权转移模式才属于“行... 详细信息

既有的“行政委托论”和“法律法规授权论”无法有力解释“综合执法权交由乡镇街道行使”的执法体制改革,有必要对此作出法治回应。理论层面,澄清“行政授权理论”内涵外延,明确“法律法规规定+行政命令决定”的职权转移模式才属于“行政授权”的范畴,法律法规授权与行政授权属于相互并列的两个概念;实践层面,从组织法角度对乡镇街道进行概括性赋权,纾解单行法律法规授权局限性与综合行政执法需求概括性之间的紧张关系;明确执法权下沉权力清单的间接效力,赋予乡镇街道必要的选择空间,合理配置下沉执法权;完善执法权下沉的评估制度与审批程序,建立双向互动机制。

关键词：综合执法改革执法权下沉职权转移行政授权

场域重塑与跨域交互:党建引领社区治理共同体构建的内生逻辑——基于X市H社区“红色四邻工作法”的案例研究

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中共天津市委党校学报 2024年第4期26卷 57-66页

作者：向玉琼李天聪南京农业大学公共管理学院江苏南京210095

传统社区一元线性的治理模式难以回应居民多元化的现实诉求,需要创新社区治理模式,党建引领吸纳多元治理要素建设社区治理共同体成为一种成功实践。根据场域理论,社区治理共同体可视为元场域,具体可划分为网格场域、协商场域、互助场域... 详细信息

传统社区一元线性的治理模式难以回应居民多元化的现实诉求,需要创新社区治理模式,党建引领吸纳多元治理要素建设社区治理共同体成为一种成功实践。根据场域理论,社区治理共同体可视为元场域,具体可划分为网格场域、协商场域、互助场域、文化场域四类子场域。每一子场域重塑过程可从核心行动者、场域内优势资本行动者、被调整对象的惯习衍变等维度进行阐释,其中基层党组织作为核心行动者引领各类场域重塑的方式存在差异。网格场域中基层政府赋能社区网格,党组织整合下沉治理资源。协商场域中基层党组织与社会组织共同搭建民主协商平台。互助场域中基层党组织引导发展社会资本。文化场域中基层党组织联合辖区单位开展文化建设。基层党组织这一核心行动者推动各子场域之间跨域互动,整合子场域网络,构建社区治理共同体。

关键词：场域理论党建引领社区治理共同体基层治理

滋肾育胎丸联合低分子肝素钠、小剂量阿司匹林治疗血栓前状态导致复发性流产的疗效分析

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青海医药杂志 2024年第6期 44-48页

作者：向玉青海红十字医院生殖中心

目的：探讨滋肾育胎丸联合低分子肝素钠、小剂量阿司匹林治疗血栓前状态导致复发性流产的临床效果。方法：收集2020年10月—2022年10月我院收治的血栓前状态导致复发性流产患者78例作为观察对象，采用随机数字表法分为观察组与对照组各3... 详细信息

目的：探讨滋肾育胎丸联合低分子肝素钠、小剂量阿司匹林治疗血栓前状态导致复发性流产的临床效果。方法：收集2020年10月—2022年10月我院收治的血栓前状态导致复发性流产患者78例作为观察对象，采用随机数字表法分为观察组与对照组各39例。对照组应用低分子肝素钠及小剂量阿司匹林进行治疗，观察组在对照组基础上联合滋肾育胎丸进行治疗，比较两组患者的临床疗效、治疗前后血清β-绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、雌二醇(E2)、孕酮、凝血-纤溶指标[D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、狼疮抗凝物质(LA)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)]变化以及同型半胱氨酸(HCY)、蛋白S(PS)、蛋白C(PC)水平变化。结果：观察组治疗总有效率为94.87%，高于对照组(P<0.05)。治疗后，两组患者β-HCG、孕酮、E2水平均升高，且观察组[β-HCG(223 610.87±3741.68)m I U/m L、孕酮(22.34±5.31)n g/m L、E2(2 398.33±427.66) pg/m L]，均高于对照组(P<0.05)。治疗后，两组患者D-D、FIB、LA水平均低于治疗前，且观察组[D-D(115.31±31.45)μg/L、FIB(2.31±0.32)g/L、LA(2.31±0.32)μmol/L]均低于对照组(P <0.05);AT-Ⅲ水平高于治疗前，且观察组[AT-Ⅲ(107.37±15.26)%]高于对照组(P <0.05)。治疗后，两组患者HCY水平低于治疗前，且观察组[HCY(10.34±2.54)μmol/L]低于对照组，PS、PC水平高于治疗前，且观察组[PS(98.08±15.02)%、PC(95.21±10.98)%]均高于对照组(P<0.05)。结论：对血栓前状态导致的复发性流产患者采用滋肾育胎丸联合低分子肝素钠、小剂量阿司匹林治疗，可提高临床疗效，改善患者性激素水平和血液高凝状态，降低HCY水平，提高PS、PC水平，值得临床推广应用。

关键词：滋肾育胎丸低分子肝素钠阿司匹林血栓前状态复发性流产