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基于复杂网络分析针灸治疗炎性肠病的选穴规律

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针刺研究 2024年第3期49卷 315-323页

作者：王佳居王渊刘奇王强刘鹏许磊何玲乔海法陕西中医药大学针灸推拿学院陕西咸阳712046 陕西省针药结合重点实验室陕西咸阳712046 陕西省中医药重点实验室陕西咸阳712046 西安电子科技大学生命科学技术学院西安710071

目的:利用复杂网络技术分析针灸治疗炎性肠病(IBD)的选穴和腧穴配伍规律,为针灸治疗IBD选穴组方提供参考。方法:检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普资讯中文期刊服务平台、PubMed、Embase数据库中针灸治疗IBD的临床研究文献,筛... 详细信息

目的:利用复杂网络技术分析针灸治疗炎性肠病(IBD)的选穴和腧穴配伍规律,为针灸治疗IBD选穴组方提供参考。方法:检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普资讯中文期刊服务平台、PubMed、Embase数据库中针灸治疗IBD的临床研究文献,筛选文献并提取针灸处方,建立针灸治疗IBD数据库。运用Microsoft Excel 2021软件统计腧穴的使用频次、频率、归经和特定穴使用情况,运用SPSS Modeler 18.0软件对处方进行关联规则分析,运用Gephi 0.9.5软件绘制腧穴共现网络图、k-core网络图、社团分析图。结果:共纳入156篇符合标准的文献,包含175条针灸处方,涉及75个腧穴,腧穴使用累计使用频次为1378次,平均每个处方约8个腧穴。天枢、足三里、关元、中脘、脾俞为针灸治疗IBD使用频次前5位的腧穴,足阳明胃经、足太阳膀胱经和任脉为使用频次前3位的经脉,募穴为使用频次最高的特定穴,足三里-天枢为针灸治疗IBD的高频穴对。运用复杂网络中的k-core层次分析优化腧穴处方,可得到天枢、足三里、关元、中脘、脾俞、大肠俞、上巨虚、肾俞、气海、三阴交、命门、行间、阴陵泉、内庭、太冲、下巨虚、水分、神阙、肝俞、胃俞、合谷、曲池22个核心腧穴,进行社团分析后可以分为3类核心腧穴群。结论:通过复杂网络分析发现针灸治疗IBD的选穴原则以胸腹部局部选穴为主,同时注重远近配穴,根据辨证分型加减腧穴,对特定穴中的募穴应用广泛。以上结论可为针灸治疗IBD提供选穴思路。

关键词：炎性肠病针灸复杂网络社团分析

电针刺激耳穴对小鼠丧失可控应激诱发学习记忆损害行为的作用机制研究

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中国康复医学杂志 2024年第4期39卷 471-479,499页

作者：李宁娆任维尹伶伶易招弟乔海法李永丰陕西中医药大学针灸推拿学院针药结合创新中心陕西省咸阳市712046 陕西师范大学现代教学技术教育部重点实验室

目的:观察丧失可控应激是否会诱发学习记忆损害行为,探讨针刺治疗学习记忆损害行为的作用机制。方法:结合经典抑郁症动物模型——习得性无助(learned helplessness,LH)模型的范式并在此基础上进行了改进,即小鼠前3天能够通过学习控制斯... 详细信息

目的:观察丧失可控应激是否会诱发学习记忆损害行为,探讨针刺治疗学习记忆损害行为的作用机制。方法:结合经典抑郁症动物模型——习得性无助(learned helplessness,LH)模型的范式并在此基础上进行了改进,即小鼠前3天能够通过学习控制斯金纳箱中的有效鼻触器来主动躲避足底电击;后3天有效鼻触器功能丧失,小鼠从而丧失了对足底电击的控制,建立丧失可控应激(loss of controllable stress,LOC)小鼠模型。同时,设计无足底电击的对照组(control of non-foot-shock,Control)。建模完成后,利用新物体识别箱和Morris水迷宫检测学习记忆行为的变化,并电针刺激耳穴,观察对学习记忆损害行为的改善。随后,利用高尔基染色观察腹侧前额叶(ventral prefrontal cortex,vPFC)神经元结构的变化,免疫组化染色观察vPFC脑区C-fos的表达,Western Blot检测I型囊泡谷氨酸转运体蛋白(vesicular glutamate transporter I,VGLUT1)、突触蛋白I(synapsin I,SYN-1)的表达及针刺后相应指标的变化。结果:LOC组小鼠在经历认知挫败后造成了学习记忆功能的损害;针刺能够改善其记忆的获取及巩固;vPFC谷氨酸能(glutamate,Glu)神经元显著激活,VGLUT1、突触小泡蛋白(synaptophysin,SYN)表达水平降低,且耳迷走神经刺激能够显著降低其活动水平,调控VGLUT1、SYN蛋白的表达。结论:耳穴刺激通过调控v PFC中神经元结构的变化及VGLUT1、SYN蛋白表达改善丧失可控应激诱发的学习记忆损害行为。

关键词：耳穴刺激学习记忆损害腹侧前额叶 Ⅰ型囊泡谷氨酸转运体突触蛋白I

电针通过调节小鼠腹外侧眶皮层中谷氨酸能神经元缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为

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针刺研究 2024年

作者：高佳佳刁志君袁伟薛思梦杨晓航吴宇蔚乔海法陕西中医药大学国医大师研究院陕西中医药大学针灸推拿学院陕西省咸阳市神经生物学(针灸)重点实验室

目的：探讨电针“阳陵泉”与“悬钟”穴位能否缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为，以及电针缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为是否与腹外侧眶皮层（VLO）中谷氨酸能神经元有关。方法：实验采用C57BL/6J小鼠，采用腓总... 详细信息

目的：探讨电针“阳陵泉”与“悬钟”穴位能否缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为，以及电针缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为是否与腹外侧眶皮层（VLO）中谷氨酸能神经元有关。方法：实验采用C57BL/6J小鼠，采用腓总神经结扎建立神经病理性疼痛模型。足底触觉测痛仪和足底热痛觉测痛仪分别检测小鼠的机械缩足阈值（MWT）和缩足潜伏期（PWL）；旷场、高架十字迷宫、强迫游泳及悬尾等行为学实验检测小鼠的焦虑和抑郁样行为；通过VLO注射rAAV-VGLUT1-CRE-WPREs和rAAV-Ef1a-DIO-hM3Dq-mCherry-WPREs或rAAV-Ef1a-DIO-hM4Di-mCherry-WPREs化学遗传学病毒，腹腔注射氯氮平-N-氧化物（Clozapine-N-oxide， CNO）特异调节VLO中谷氨酸能神经元的活动水平，观察小鼠的焦虑和抑郁样行为。结果：与假手术组相比，腓总神经结扎组小鼠术后第3天的MWT（P＜0.001）和PWL（P＜0.001）显著降低，一直持续到第28天；与假手术组相比，腓总神经结扎组术后第21天，小鼠在旷场中的中央区域停留时间（P＜0.001）显著减少，在高架十字迷宫中进入开臂次数百分比（P＜0.05）和开臂时间百分比（P＜0.05）显著减少，在强迫游泳（P＜0.01）和悬尾测试（P＜0.05）中的不动时间显著增加；与腓总神经结扎组相比，腓总神经结扎+电针组小鼠焦虑和抑郁样行为均减轻（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）；与腓总神经结扎+hM3Dq+盐水组相比，腓总神经结扎+hM3Dq+CNO组小鼠的焦虑和抑郁样行为均减轻（P＜0.05，P＜0.01）；与腓总神经结扎+hM4Di+电针+盐水组相比，腓总神经结扎+hM4Di+电针+CNO组小鼠的焦虑和抑郁样行为均增加（P＜0.001，P＜0.05）。结论：电针“阳陵泉”与“悬钟”可能通过调节VLO中谷氨酸能神经元的活动缓解神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为。

关键词：腹外侧眶皮层神经病理性疼痛谷氨酸能神经元电针焦虑和抑郁样行为

心肌缺血小鼠体表穴位敏化与垂体腺苷酸环化酶激活多肽的关系研究

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针刺研究 2024年

作者：胡瑞斌刘永斌杨雪左燕吴宇蔚薛思梦乔海法刁志君陕西省中医药管理局针灸神经生物学重点实验室陕西中医药大学针灸推拿学院陕西省针药结合重点实验室

目的：从分子生物学的角度，研究在内脏疼痛动物模型中，体表穴位敏化与垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）表达的关系、效应及机制。方法：C57BL/6J小鼠随机分为对照组和模型组，每组28只。模型组小鼠腹腔注射160 mg/kg的异丙肾上腺素... 详细信息

目的：从分子生物学的角度，研究在内脏疼痛动物模型中，体表穴位敏化与垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）表达的关系、效应及机制。方法：C57BL/6J小鼠随机分为对照组和模型组，每组28只。模型组小鼠腹腔注射160 mg/kg的异丙肾上腺素（ISO）构建心肌缺血（MI）的内脏疼痛模型，对照组注射相同剂量的0.9%氯化钠溶液。造模后6 d，各组小鼠尾静脉注射EB染料，观察体表渗出点数量及分布规律；机械痛觉阈值测量评估小鼠左侧前、后足及体表敏化区的痛敏变化水平；HE染色法评估小鼠心脏组织形态病理改变；Western blot和免疫荧光染色法检测体表穴位敏化后相应脊髓节段、背根神经节（DRG）和皮肤中PACAP的表达。结果：与对照组相比，模型组小鼠心脏组织肥厚增大，心肌细胞有明显炎性细胞浸润和纤维化表现；体表EB渗出点数量显著增多（P<0.01），且主要集中分布在脊髓T1～T5节段支配区域，且该区域EB渗出点痛觉阈值较非渗出点显著降低（P<0.01）；同时，模型组小鼠T1～T5节段脊髓、及其中DRG神经元和体表支配区皮肤中PACAP蛋白水平和阳性表达显著增多（P<0.05，P<0.001）。结论：通过腹腔注射ISO构建小鼠MI模型，可导致小鼠心脏组织病变并在体表出现心源性牵涉痛敏现象。其脊髓T1～T5节段、及该节段所对应的体表支配区域和DRG神经元中PACAP表达显著增高，可能是导致中枢和外周敏化的原因之一，进而促进体表局部产生神经源性炎性反应，介导穴位敏化发生。

关键词：心肌缺血穴位敏化垂体腺苷酸环化酶激活多肽

电针耳甲区耳穴对创伤后应激障碍小鼠前扣带回皮层谷氨酸能神经元兴奋性水平的影响

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针刺研究 2024年

作者：左燕刘永斌袁子焉杜瑞冰吴宇蔚薛思梦刁志君乔海法陕西中医药大学国医大师研究院陕西省中医药管理局针灸神经生物学重点实验室陕西省针药结合重点实验室陕西中医药大学针灸推拿学院

目的：从神经元内在兴奋性和神经元功能可塑性的角度探讨耳甲区耳穴与大脑前扣带回皮层（ACC）谷氨酸能神经元交流对话的生物学机制，为阐明针刺耳穴治疗情志类疾病的神经机制提供实验证据。方法：C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模... 详细信息

目的：从神经元内在兴奋性和神经元功能可塑性的角度探讨耳甲区耳穴与大脑前扣带回皮层（ACC）谷氨酸能神经元交流对话的生物学机制，为阐明针刺耳穴治疗情志类疾病的神经机制提供实验证据。方法：C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、假电针组、电针组，每组5只。使用单程长时刺激（SPS）与足底电击（FS）相结合的方法构建创伤后应激障碍（PTSD）小鼠模型。造模1周后，电针组小鼠麻醉后于双侧耳甲区“心”部位进行电针刺激，每天30 min，连续7 d；假电针组小鼠给予同样麻醉，但不进行电针干预。造模2周后，以旷场实验、高架十字迷宫实验评估小鼠焦虑样行为表现；全细胞膜片钳技术记录ACC谷氨酸能神经元内在兴奋性水平的改变。结果：与对照组比较，模型组小鼠旷场中心区域停留时间、移动距离及高架十字迷宫开臂停留时间百分比、进入开臂次数百分比均减少（P<0.001，P<0.01），ACC谷氨酸能神经元基强度升高（P<0.01），放电数目减少（P<0.05，P<0.01，P<0.001）。与模型组比较，电针组小鼠旷场中心区域停留时间、移动距离及高架十字迷宫开臂的停留时间百分比、进入开臂次数百分比均增加（P<0.001，P<0.01），ACC谷氨酸能神经元基强度降低（P<0.05），放电数目增加（P<0.05）。与假电针组相比，电针组小鼠旷场中心区域停留时间、移动距离及高架十字迷宫开臂的停留时间百分比、进入开臂次数百分比均增加（P<0.001，P<0.01），ACC谷氨酸能神经元基强度降低（P<0.01），放电数目增加（P<0.05）。结论：电针耳甲区耳穴可有效减轻PTSD小鼠焦虑样行为表现，其机制可能是通过提升由创伤性应激经历减弱的ACC谷氨酸能神经元内在兴奋性水平实现的。

关键词：电针耳甲区耳穴创伤后应激障碍前扣带回皮层神经元内在兴奋性

神经示踪染料DiI影响溃疡性结肠炎小鼠背根神经节神经元电学特性

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中国疼痛医学杂志 2024年第5期30卷 331-340页

作者：雒炜刘永斌刘坤刘允高昕妍乔海法陕西中医药大学针灸推拿学院咸阳712046 中国中医科学院针灸研究所机能研究室北京100700

目的:探究在神经示踪结合膜片钳全细胞记录的实验中,示踪染料DiI是否会对小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元兴奋性产生影响。方法:采用SPF级雄性C57BL/6J小鼠,经5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导溃疡性结... 详细信息

目的:探究在神经示踪结合膜片钳全细胞记录的实验中,示踪染料DiI是否会对小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元兴奋性产生影响。方法:采用SPF级雄性C57BL/6J小鼠,经5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,在T12~L2皮节多点注射DiI逆向示踪躯体感觉神经元,分离全组织DRG并进行全细胞膜片钳记录。结果:HE染色结果显示模型诱导成功。膜片钳记录未经标记的小鼠DRG神经元,模型组小鼠膜电位兴奋性高于正常组小鼠。两组小鼠示踪后,正常示踪组和模型示踪组DiI+神经元兴奋性均低于本组DiI-神经元;与两未示踪组的神经元相比较,两示踪组的DiI-神经元兴奋性分别升高。结论:本实验结果明确了示踪剂DiI会降低DRG神经元的兴奋性,提示相关实验设计中应注意示踪剂的应用对神经元兴奋性的影响,以保证实验结果的可靠性。

关键词：神经示踪背根神经节兴奋性 DiI 膜片钳

降钙素基因相关肽在胃溃疡模型小鼠穴位敏化中的作用研究

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上海针灸杂志 2024年第1期43卷 81-88页

作者：杨雪郑璇袁伟吴宇蔚刁志君薛思梦乔海法陕西中医药大学咸阳712046 陕西省针药结合重点实验室咸阳712046 陕西省中医药管理局咸阳712046

目的从分子生物学的角度,探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在慢性胃溃疡模型小鼠穴位敏化过程中的作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组15只,将冰乙酸溶液于胃小弯近幽门处注射到胃壁肌层近... 详细信息

目的从分子生物学的角度,探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在慢性胃溃疡模型小鼠穴位敏化过程中的作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组15只,将冰乙酸溶液于胃小弯近幽门处注射到胃壁肌层近黏膜下层构建慢性胃溃疡模型,随后在小鼠尾静脉上注射伊文思蓝,观察穴位敏化点的体表分布规律;HE染色法观察胃部组织在造模前后的病理形态变化;通过体表痛敏行为学实验,观察小鼠痛觉阈值的改变;蛋白质印迹法、免疫荧光染色法检测穴位敏化后脊髓、背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)和皮肤中的CGRP表达。结果通过向小鼠胃部注射冰乙酸可诱导其形成符合胃溃疡典型病理特征的动物模型;对照组EB渗出点较少,模型组EB渗出点分散于脊髓T_(1)~T_(13)节段支配区域,其中以T_(9)~_(T11)区域最为集中,且其伊文思蓝渗出点压痛阈较造模前显著降低(P<0.01)。穴位敏化后模型组的脊髓、DRG和皮肤中的CGRP蛋白和荧光蛋白阳性表达显著高于对照组(P<0.01)。结论冰乙酸诱导小鼠形成胃溃疡后,其胃部组织病变所对应的体表敏化区、相应的脊髓T9~T11节段和DRG神经元中CGRP表达增高,可能是引起外周和中枢痛觉敏化,使体表局部出现神经源性炎性反应,介导穴位敏化的原因。

关键词：胃溃疡穴位敏化痛阈降钙素基因相关肽小鼠

对药“远志-石菖蒲”中LDH抑制成分的虚拟筛选及其治疗癫痫作用研究

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辽宁中医药大学学报 2024年

作者：王咏琪赵泽丰年梦乔海法杨晓航钱明成陕西中医药大学陕西省针药结合重点实验室陕西中医药大学针灸推拿学院常州大学制药与生命科学学院

目的该文对“远志-石菖蒲”中潜在作用于乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）靶点的活性物质进行研究，阐明其药效物质基础。方法该文采用以药效团为基础的虚拟筛选手段，通过收集已出版文献中报道的具有抑制LDH活性的化合物信息... 详细信息

目的该文对“远志-石菖蒲”中潜在作用于乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）靶点的活性物质进行研究，阐明其药效物质基础。方法该文采用以药效团为基础的虚拟筛选手段，通过收集已出版文献中报道的具有抑制LDH活性的化合物信息，建立基于LDH配体的HipHop药效团模型，收集文献中报道的“远志-石菖蒲”中的成分并建立化合物库，对“远志-石菖蒲”中的成分与药效团进行匹配，随后使用分子模拟对接手段对匹配到的8种小分子化合物与LDH靶点（PDBID：4ZVV）进行对接。采用戊四唑（pentylenetetrazol，PTZ）点燃模型对活性单体细叶远志苷A（36）调节癫痫动物体内LDH的作用进行评价。结果通过文献检索建立包含“远志-石菖蒲”中所包含化学成分132种的化合物库，随后通过测试集验证选出优选药效团06用于对“远志-石菖蒲”化合物库的虚拟筛选，经过匹配后得到8种“远志-石菖蒲”中潜在的LDH抑制成分。通过分子模拟对接分析了8种化合物与LDH的作用情况，对得分最高的化合物细叶远志苷A（36）癫痫相关靶标的调控作用进行研究发现，该化合物能够下调海马区PTZ诱导的LDH表达升高，进而对LDH/HSP90轴产生调控作用起到治疗癫痫效果。结论通过虚拟筛选手段得出的“远志-石菖蒲”中的细叶远志苷A（36）能够对LDH/HSP90轴产生调控作用起到治疗癫痫效果。

关键词：远志-石菖蒲 LDH 虚拟筛选活性评价

胃溃疡小鼠体表穴位敏化与垂体腺苷酸环化酶激活肽作用关系研究

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中国中西医结合杂志 2024年第4期44卷 432-439页

作者：刘永斌龙梦阳杨雪吴宇蔚薛思梦乔海法刁志君陕西中医药大学针灸推拿学院陕西712046 陕西中医药大学国医大师研究院陕西712046 陕西省针药结合重点实验室陕西712046 陕西省中医药管理局针灸神经生物学重点实验室陕西712046

目的从分子生物的角度,探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)在胃溃疡小鼠穴位敏化过程中的表达、效应及机制。方法将58只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=28)和模型组(n=30),模型组在胃窦小弯近幽门处注射60%冰乙酸到胃壁肌层近黏膜下... 详细信息

目的从分子生物的角度,探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)在胃溃疡小鼠穴位敏化过程中的表达、效应及机制。方法将58只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=28)和模型组(n=30),模型组在胃窦小弯近幽门处注射60%冰乙酸到胃壁肌层近黏膜下层构建胃溃疡小鼠模型,对照组以相同方法注射同等剂量生理盐水。术后第6天,在小鼠尾静脉注射伊文思蓝(EB)染色液后观察其体表渗出点数量、分布范围和规律;机械痛及热痛阈值测量评估小鼠痛敏变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠胃体组织病理学形态变化;蛋白印迹法和免疫荧光染色法观察穴位敏化后小鼠脊髓T9~T11节段内的背根节(DRG)神经元、体表支配区皮肤及该节段脊髓背角中PACAP的表达情况。结果与对照组比较,模型组胃体组织破坏,出现嗜酸性粒细胞增加、炎性细胞浸润等病理学特征;模型组体表EB渗出点的数量明显增多,且主要分布在脊髓T6~L1段支配区域,其中以T9~T11区域最为集中;该区域敏化点机械痛阈值降低(P<0.01)。穴位敏化后,模型组脊髓T9~T11节段内的DRG神经元、体表支配区皮肤及该节段脊髓背角浅层中PACAP蛋白和阳性表达增多(P<0.01)。结论胃溃疡小鼠中与内脏疼痛信息传导有关的脊髓T9~T11节段内DRG神经元上PACAP表达水平增高,进而分别通过增加脊髓背角浅层和体表支配区皮肤中PACAP的表达,分别从中枢和外周两方面,促进体表局部产生神经源性炎性反应,介导穴位敏化的发生。

关键词：穴位敏化胃溃疡垂体腺苷酸环化酶激活肽