检索结果-南通市图书馆

中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定

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中国兽医学报 2003年第5期23卷 447-449页

作者：严维巍崔治中王永坤扬州大学牧医学院江苏扬州225009 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆... 详细信息

应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1株 ,在 1.0 m mol/ L IPTG和 37℃的条件下诱导 ,VP6 0 - GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western- blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的 870 0 0相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠 ,所得抗血清应用间接 EL ISA检测 ,与 RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明 ,大肠杆菌中表达的 RHDV VP6

关键词：中国株兔出血症病毒衣壳蛋白 VP60基因大肠杆菌基因表达免疫原性鉴定 RT-PCR ELISA 病毒性出血症

鹅副粘病毒YG_(97)分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2002年第5期24卷 334-337页

作者：刘华雷王永坤朱国强严维巍江苏省家禽科学研究所江苏扬州225003 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

鹅副粘病毒分离株YG97经 10日龄鸡胚增殖后纯化 ,提取病毒的基因组RNA ,采用RT_PCR一次性扩增出与预期设计的 1.9kb大小相符合的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pGEMR_T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒HN... 详细信息

鹅副粘病毒分离株YG97经 10日龄鸡胚增殖后纯化 ,提取病毒的基因组RNA ,采用RT_PCR一次性扩增出与预期设计的 1.9kb大小相符合的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pGEMR_T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆 ,进一步进行了序列测定。序列分析表明所扩增的病毒的HN基因片段的长度为 1981bp ,共编码5 71个氨基酸。同源性分析表明 ,YG97与LaSota毒株核苷酸同源性为 79% ,氨基酸的同源性为 87%。与台湾 1995年分离株Taiwan/ 95核苷酸和氨基酸的同源性分别为 93%、96 % ,说明YG97与Taiwan/ 95亲缘关系较近 ,具有较高的相似性。与国内外部分发表的其它NDV毒株的核苷酸同源性在 80 %～ 84%之间 ,氨基酸的同源性在 87%～ 91%之间。

关键词：鹅副粘病毒 YG97分离株 HN蛋白基因克隆序列分析

兔出血症病毒中国株衣壳蛋白基因的克隆和序列分析

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中国病毒学 2003年第2期18卷 129-133页

作者：严维巍崔治中王永坤扬州大学畜牧兽医学院动物医学系江苏扬州225009 山东农业大学动物科技系山东泰安271018

应用RT-PCR技术,从兔出血症病毒中国分离株WX84中成功扩增出预期大小为1.7kb的特异性条带,将扩增产物提纯后克隆入pGEMR-T载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,获得了该株病毒衣壳蛋白基因的克隆,序列分析表明扩增的中国株RHDV衣壳蛋白基因... 详细信息

应用RT-PCR技术,从兔出血症病毒中国分离株WX84中成功扩增出预期大小为1.7kb的特异性条带,将扩增产物提纯后克隆入pGEMR-T载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,获得了该株病毒衣壳蛋白基因的克隆,序列分析表明扩增的中国株RHDV衣壳蛋白基因片段长度为1 740bp,共编码580个氨基酸。该核酸序列与其它国家报道的多株RHDV序列相互间同源性高达98.2%～99.0%,其推导的氨基酸序列同源性也达98.3%～99.1%,为极度保守片段。

关键词：兔出血症病毒中国株衣壳蛋白基因基因克隆序列分析 RT-PCR 出血症

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鹅副粘病毒病油乳剂灭活苗的研究

中国预防兽医学报 2002年第1期24卷 38-40页

作者：周继宏王永坤田慧芳严维巍庄国宏扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

鹅副粘病毒病是 1997年本组王永坤等首先发现的一种新的鹅的烈性传染病 ,发病率和死亡率分别达 2 7.7%和 18.2 %。为了控制该病的流行传播 ,本课题组在研究该病的病原特性和防制方法的基础上 ,尽快研制了油乳灭活疫苗。从该疫苗的免疫... 详细信息

鹅副粘病毒病是 1997年本组王永坤等首先发现的一种新的鹅的烈性传染病 ,发病率和死亡率分别达 2 7.7%和 18.2 %。为了控制该病的流行传播 ,本课题组在研究该病的病原特性和防制方法的基础上 ,尽快研制了油乳灭活疫苗。从该疫苗的免疫结果观察 ,疫苗在免疫后第七天即可产生抗体 (平均为 2 3 .9) ,15天达到 2 6.7,30天可达到 2 8.8;从免疫保护试验看 ,免疫后 15天 ,用强毒攻击 ,免疫组全部保护 ,而对照组 5只鹅全部发病 ,3只死亡。从区域性中试调查结果来看 ,该苗安全、有效 ,能较好地控制该病的流行。

关键词：鹅禽副粘病毒油乳剂灭活疫苗

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我国部分地区新城疫病毒的流行现状分析

兽医大学学报 2003年第3期23卷 218-221页

作者：刘华雷王永坤严维巍朱国强陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 ... 详细信息

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 9株 NDV的遗传进化树 ,分析其毒株间的遗传进化关系。序列分析表明 ,所扩增的目的片段长度为 5 35 bp,所分离的毒株在分裂位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R- R- Q/ R- K/ R- R- F1 1 7,均相当于 NDV的强毒株。通过遗传进化树分析表明 ,1 6株分离株中有 1 3株为基因型 NDV,说明目前基因型 NDV所引起的新城疫在国内呈流行趋势。

关键词：新城疫病毒流行现状 RT-PCR 基因

番鸭细小病毒M91G27株病毒结构蛋白VP3编码基因的克隆与鉴定

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中国预防兽医学报 2000年第6期22卷 409-411页

作者：余兵王永坤朱国强严维巍扬州大学畜牧兽医学院动物医学系扬州225009

纯化番鸭细小病毒M91G2 7毒株鹅胚尿囊液 ,通过PCR技术 ,从病毒DNA中扩增出病毒结构多肽VP3完整编码基因。将该PCR扩增片段在HincⅡ和SacⅠ位点克隆进pUC18质粒载体 ,酶切分析筛选到含 1.6kb基因片段的重组质粒MP13,进一步对该片段进行... 详细信息

纯化番鸭细小病毒M91G2 7毒株鹅胚尿囊液 ,通过PCR技术 ,从病毒DNA中扩增出病毒结构多肽VP3完整编码基因。将该PCR扩增片段在HincⅡ和SacⅠ位点克隆进pUC18质粒载体 ,酶切分析筛选到含 1.6kb基因片段的重组质粒MP13,进一步对该片段进行序列测定及用CLONE软件分析该序列。结果表明 ,其与国外已报道毒株核苷酸序列有 98.8%的同源性 ,氨基酸序列有 98.1%的同源性。

关键词：番鸭细小病毒 VP3编码基因克隆鉴定

鸡传染性眼炎致病性奇异变形杆菌的分离与鉴定

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中国家禽 1997年第8期19卷 8-10页

作者：庄国宏严维巍周继宏朱国强王永坤扬州大学农学院动物医学系扬州225009

从江苏、安徽、山东等地67例患鸡传染性眼炎病例中分离到13株细菌分离物。经培养特性、形态学观察、生化试验鉴定,13株细菌分离物均属于奇异变形杆菌。该细菌在湿润的营养琼脂表面呈迁徙生长,在鲜血琼脂上不溶血,在麦康凯琼脂上生长良好... 详细信息

从江苏、安徽、山东等地67例患鸡传染性眼炎病例中分离到13株细菌分离物。经培养特性、形态学观察、生化试验鉴定,13株细菌分离物均属于奇异变形杆菌。该细菌在湿润的营养琼脂表面呈迁徙生长,在鲜血琼脂上不溶血,在麦康凯琼脂上生长良好,形成单个菌落。人工感染SPF雏鸡可导致发病死亡,并且能从肝脏和上呼吸道分离到相应的细菌,表明分离的奇异变形杆菌具有一定的致病力,它在鸡传染性眼炎中是不可忽视的病原菌之一。

关键词：鸡病奇异变形杆菌传染性眼炎分离鉴定

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鹅副粘病毒的分子鉴定

上海交通大学学报（农业科学版） 2001年第4期19卷 245-248,261页

作者：严维巍王永坤扬州大学畜牧兽医学院扬州225009

对自患病鹅群分离的一株鹅副粘病毒 (GPV) YG97株经 ,红细胞凝集 (HA)和红细胞凝集抑制 (HI)试验证明与新城疫病毒 (NDV)存在着极大的相关性。应用 RT-PCR技术对 F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定 ,并与多株已报道的 NDV相应片段... 详细信息

对自患病鹅群分离的一株鹅副粘病毒 (GPV) YG97株经 ,红细胞凝集 (HA)和红细胞凝集抑制 (HI)试验证明与新城疫病毒 (NDV)存在着极大的相关性。应用 RT-PCR技术对 F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定 ,并与多株已报道的 NDV相应片段进行序列比较 ,经遗传进化树分析后 ,初步判定其为禽副粘病毒 -I型 ,属基因 VII型 NDV。

关键词：鹅禽副粘病毒基因

鹅细小病毒主要免疫原性蛋白基因的克隆与序列分析

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病毒学报 2002年第3期18卷 259-263页

作者：余兵王永坤刘宝荣朱国强严维巍王建业淮阴检验检疫局江苏淮安223001 扬州大学动物医学系江苏扬州225009

利用PCR技术 ,从纯化鹅细小病毒SYG99-5毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒主要免疫原性蛋白基因。将该PCR扩增片段克隆入 pGEMR-T质粒载体的HincⅡ和SacⅠ位点之间 ,酶切分析筛选并进一步通过Southern杂交验证后 ,获得含 1 6kb基因片段的重... 详细信息

利用PCR技术 ,从纯化鹅细小病毒SYG99-5毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒主要免疫原性蛋白基因。将该PCR扩增片段克隆入 pGEMR-T质粒载体的HincⅡ和SacⅠ位点之间 ,酶切分析筛选并进一步通过Southern杂交验证后 ,获得含 1 6kb基因片段的重组质粒GpG3 。序列测定结果表明 ,该片段与国外已报道的GPVB株苷酸序列有 96 %的同源性 ,氨基酸序列有

关键词：鹅细小病毒免疫原性蛋白克隆序列分析聚合酶链式反应 VP3基因 Southern杂交重组质粒