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功能性鼻内窥镜手术后使用不同填塞物的初步尝试和体会

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功能性鼻内窥镜手术后使用不同填塞物的初步尝试和体会

2019年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术大会

作者：严毛晓蒋骅浙江大学医学院附属第二医院

背景:功能性鼻内窥镜手术(Functional endonasal sinus surgery,FESS)的发展方向是精准、微创和快速康复。随着鼻内窥镜手术技术和器械材料方面的进展,以及日间手术的推广,传统的术后鼻腔填塞的观念正在改变。为了改善患者术后生活质量...

背景:功能性鼻内窥镜手术(Functional endonasal sinus surgery,FESS)的发展方向是精准、微创和快速康复。随着鼻内窥镜手术技术和器械材料方面的进展,以及日间手术的推广,传统的术后鼻腔填塞的观念正在改变。为了改善患者术后生活质量,我们尝试了明胶海绵或多聚糖止血粉等可吸收材料进行术后填塞,取代纱条或膨胀海绵等传统填塞方法。目的:探讨FESS术后使用可吸收材料填塞的安全性和术后生活质量。方法:回访2017年6月至2018年10月间行FESS术后可吸收材料填塞病例,对照组为FESS术后膨胀海绵填塞病例。可吸收材料组术后使用每侧创面1片明胶海绵或止血粉喷洒,术后第二天出院;对照组术后2-5天抽除膨胀海绵后出院。对上述患者进行问卷调查,评价术后1-3天期间短期生活质量,使用的量表为汉化版鼻腔鼻窦结果测量22条表(Sinonasal outcome test-22,SNOT-22)。回顾两组术后出血情况,对出血程度进行量化评分。结果:回访完成SNOT-22量表共60份,可吸收材料组和膨胀海绵组各30份,Lund-Mackay鼻窦CT评分均介于2分-24分,两组间分布无明显差异。可吸收材料组的SNOT-22评分显著低于膨胀海绵组,P0.05。结论:相比传统的鼻腔填塞方法,FESS术后使用少量的可吸收材料填塞可显著提高术后生活质量,而并不增加术后出血风险。讨论:FESS术后仅用少量可吸收材料填塞是安全可行的,能显著改善患者术后生活质量,并缩短患者的平均住院日。明胶海绵或多聚糖止血粉等可吸收材料的另一个优点,它无需像纳西棉等可降解材料需术后短期内做鼻腔清理,减少了患者的术后痛苦并简化了术后康复过程。可吸收材料填塞有效的前提是术中减少对鼻腔正常组织如中鼻甲的不必要损伤,并充分、细致的做好术中止血。

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Ad-ERα-36-Fc-GFP的制备及鉴定

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生物工程学报 2022年第3期38卷 1086-1095页

作者：谢雨琼李春春李晓烨陈丽红严毛晓曹江浙江大学医学院附属第二医院临床研究中心浙江杭州310009 浙江大学医学院附属第二医院耳鼻咽喉科浙江杭州310009

ERα-36是雌激素受体α新亚型,促进肿瘤细胞增殖、侵袭及耐药,可作为治疗靶点,但目前仅有小分子靶向药物研发。利用重组腺病毒携带诱饵受体,可进行靶向ERα-36的基因治疗探索。首先通过基因工程技术,构建可表达由Igκ信号肽引导分泌的... 详细信息

ERα-36是雌激素受体α新亚型,促进肿瘤细胞增殖、侵袭及耐药,可作为治疗靶点,但目前仅有小分子靶向药物研发。利用重组腺病毒携带诱饵受体,可进行靶向ERα-36的基因治疗探索。首先通过基因工程技术,构建可表达由Igκ信号肽引导分泌的重组融合蛋白ERα-36-Fc的穿梭质粒pDC316-Igκ-ERα-36-Fc-GFP;利用AdMax;腺病毒包装系统进行Ad-ERα-36-Fc-GFP腺病毒的包装、鉴定及扩增;感染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231并进行表达及功能验证。结果表明成功制备Ad-ERα-36-Fc-GFP重组腺病毒,可高效感染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,表达并分泌ERα-36-Fc重组蛋白,显著抑制EGFR/ERK信号通路。Ad-ERα-36-Fc-GFP腺病毒的制备为进一步开展靶向ERα-36的肿瘤基因治疗研究奠定基础。

关键词： Ad-ERα-36-Fc-GFP 腺病毒制备诱饵受体基因治疗

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喉癌术后发声和吞咽功能评价

喉癌术后发声和吞咽功能评价

浙江省医学会耳鼻咽喉科学分会成立60周年庆典暨2011年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会

作者：严毛晓陈建福林刃舆叶凡温州医学院附属第一医院耳鼻咽喉科

目的喉癌术后对发音和吞咽功能的评价,是评价不同功能性喉保留手术效果的有效方法。国际上对术后功能评价方法的研究越来越深入,各种新的评价方法不断涌现,本文就近年来国内外在该领域的研究进展做一综述。

关键词：

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喉癌术后发声和吞咽功能评价

国际耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011年第1期35卷 51-54页

作者：严毛晓陈建福林刃舆叶凡温州医学院附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科 325000

喉癌术后对发音和吞咽功能的评价，是评价不同功能性喉保留手术效果的有效方法。国际上对喉癌术后功能评价方法的研究越来越深入，各种新的评价方法不断涌现。本文就近年来国内外在该领域的研究进展做一综述。

关键词：喉肿瘤(Laryngeal Neoplasms)I喉切除术(Laryngectomy) 发声 (Phonation) 吞咽(Deglutition)

双途径重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3的载体构建及对喉癌细胞增殖的抑制作用研究

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双途径重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3的载体构建及对...

2019年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术大会

作者：陈嘉严毛晓凌奕曹江杨蓓蓓浙江大学医学院附属第二医院

目的:构建双途径诱导喉癌细胞凋亡的腺病毒载体,同时从抑制增殖和促进凋亡两条通路抑制肿瘤细胞增殖,实现特异高效诱导细胞凋亡的目的。方法:利用网络资源设计针对人EGFR的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至前期实验...

目的:构建双途径诱导喉癌细胞凋亡的腺病毒载体,同时从抑制增殖和促进凋亡两条通路抑制肿瘤细胞增殖,实现特异高效诱导细胞凋亡的目的。方法:利用网络资源设计针对人EGFR的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至前期实验成功构建的腺病毒表达质粒pDC312-SLPI-revCasp3-pA上,得到腺病毒穿梭质粒pDC312-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3-pA,与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3。将Ad-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3感染喉癌Hep-2细胞后,Western blot检测EGFR的表达,观察细胞形态改变,MTT检测细胞增殖情况,评估EGFR人工microRNA的作用效果,同时检测活化型Caspase-3的表达情况。结果:重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR-revCasp3对喉癌细胞Hep-2的增殖有较强的抑制作用,且抑制率随MOI的提高而增强。流式细胞仪检测结果显示Ad-SLPI-EGFRamiR-revCasp3在MOI50时能显著诱导Hep-2凋亡,并且明显高于其他单药组。而当与DDP合用时,能显著提高其抑制率。Cetuximab在体外环境中以500μg/ml的高浓度仍只能诱导少量的细胞凋亡。Ad-EC MOI50感染Hep-2细胞72hr后能使EGFR下调,Caspase-3激活,PARP剪切,而与DDP 0.25μg/ml合用使得上述效果更充分,余治疗组效果不明显。在Ad-EC组,Ad-EC+DDP组未见ERK1/2通路明显活化,与对照组相比pERK1/2稍有下调,提示在喉癌中,EGFR的下游分子之一是ERK1/2,并和Ad-EC的诱导凋亡作用相关。Ad-EC,AdEC+DDP组未见pAKT水平上调,而Ad-GFP、DDP、Cetuximab组可见pAKT上调,提示Ad-EC能阻止AKT的活化,从而抑制喉癌细胞凋亡。结论:Ad-SLPI-EGFRamiR-SLPI-revCasp3双途径重组腺病毒载体构建成功,与传统化疗药物或靶向药物联合使用可更高效特异地抑制喉癌细胞增殖,促进喉癌细胞凋亡。

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重组FGFR1蛋白的制备及对喉癌抑瘤效果的初步研究

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重组FGFR1蛋白的制备及对喉癌抑瘤效果的初步研究

2019年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术大会

作者：陈嘉李英严毛晓曹江杨蓓蓓浙江大学医学院附属第二医院上海交通大学医学院附属仁济医院

目的:制备新型靶向药物重组蛋白FGFR1,研究其对喉癌的抑瘤作用。方法:获取编码FGFR1胞外区Ig2和Ig3结构的基因片段,插入真核表达质粒pSectag2A,构建重组质粒pSectag2A-FG FR1,将重组质粒转染HEK-293T细胞系,筛选稳定转染的FGFR1-293T细...

目的:制备新型靶向药物重组蛋白FGFR1,研究其对喉癌的抑瘤作用。方法:获取编码FGFR1胞外区Ig2和Ig3结构的基因片段,插入真核表达质粒pSectag2A,构建重组质粒pSectag2A-FG FR1,将重组质粒转染HEK-293T细胞系,筛选稳定转染的FGFR1-293T细胞系,重组蛋白FGFR1可被分泌至胞外,收集FGFR1-293T细胞培养基,用镍柱纯化出带有6×His标签的重组FGFR1蛋白,检测重组蛋白FGFR1对Hep-2细胞增殖的抑制作用。结果:pSectag2A-FGFR1重组质粒构建、重组蛋白FGFR1表达纯化及体外抑瘤效果。研究pSectag2A-FGFR1 (Ig2+Ig3)经BamHⅠ/HindⅢ双酶切,电泳可见约5.16kb、591bp条带,重组质粒构建成功。FGFR1-293T细胞经RT-PCR验证,电泳条带大小约591bp,与预期FGFR1 Ig2+Ig3 591bp目标条带位置相符。获得的蛋白FGFR经收集纯化后进行Western Blot检测,抗6×His的抗体测得阳性条带,大小约40kD,蛋白收集纯化成功,鉴定正确。CCK-8结果显示,Hep-2细胞增殖抑制率随着FGFR1蛋白浓度的增加而升高,低浓度咪唑对细胞增殖几乎无影响,但是,高浓度咪唑会影响细胞增殖。去除咪唑后,相应浓度的重组蛋白FGFR1对Hep-2的细胞增殖抑制率为与去除咪唑前的抑制率相近。说明重组蛋白FGFR1对喉癌Hep-2细胞具有增殖抑制作用。结论:成功建立FGFR1-293T稳定转染细胞系,初步验证了其表达的重组FGFR1蛋白能够有效的抑制喉癌Hep-2细胞增殖。

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EGFR,FGFR联合靶向药物治疗喉癌的实验研究

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EGFR,FGFR联合靶向药物治疗喉癌的实验研究

2019年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术大会

作者：陈嘉李英严毛晓曹江杨蓓蓓浙江大学医学院附属第二医院上海交通大学医学院附属仁济医院

目的:研究EGFR,FGFR联合靶向药物对喉癌的抑制作用。方法:分别使用Gefitinib单药、AZD4547单药、Gefitinib和AZD4547两药联合应用处理喉癌Hep-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞凋亡百分比,Transwell检测细胞迁移情...

目的:研究EGFR,FGFR联合靶向药物对喉癌的抑制作用。方法:分别使用Gefitinib单药、AZD4547单药、Gefitinib和AZD4547两药联合应用处理喉癌Hep-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞凋亡百分比,Transwell检测细胞迁移情况,Western Blot检测增殖及凋亡相关蛋白的表达水平。建立裸鼠荷瘤模型,检测各组小分子抑制剂药物单药或联合使用在体内的抑瘤效果,并观察其对裸鼠的毒副作用。结果:AZD4547和Gefitinib对细胞增殖抑制率随药物浓度的升高而增高。两药联合使用时在一定浓度范围内高于二者单独用药组的细胞增殖抑制率。AZD4547及Gefitinib联合使用后,总细胞凋亡比例高于两药单独使用时的凋亡比例之和;较低浓度组两药联用时,Hep-2细胞的早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡比例均高于较高浓度组单药使用时的凋亡比例。两药联合作用后,剪切后的PARP明显增多,提示药物联用组导致蛋白水平的凋亡比其它三组明显。AZD4547或Gefitinib单药用药后p-Akt及p-ERK均下调,而药物联用组比单药组p-Akt及p-ERK下调更为明显,且两药联合使用对Akt途径及ERK途径的抑制具有协同作用。***结果显示:AZD4547或Gefitinib单药作用后,Hep-2细胞迁移能力减弱。两药联用后,迁移细胞数较对照组及单药组均减少。AZD4547及Gefitinib单独用药及药物联用时,在瘤体大小、瘤重等方面均体现了较好的治疗效果,高浓度单药使用时疗效比低浓度用药时疗效显著,药物联用时比单独用药疗效显著。但是,药物联用组及单药高浓度组均出现裸鼠死亡,提示AZD4547和Gefitinib联合应用副作用明显。结论:靶向EGFR和FGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂Gefitinib和AZD4547分别对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制、迁移能力抑制及细胞凋亡的促进有一定作用,联合用药较单药使用效果更为显著,同时,联合用药也导致更严重的毒副作用。

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靶向EGFR的人工microRNA的腺病毒构建及鉴定

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靶向EGFR的人工microRNA的腺病毒构建及鉴定

2016年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会

作者：陈嘉陈萍张守德凌奕严毛晓杨蓓蓓曹江浙江大学医学院附属第二医院耳鼻咽喉科浙江大学医学院附属邵逸夫医院中心实验室浙江大学医学院附属邵逸夫医院耳鼻咽喉科浙江大学医学院附属第二医院临床研究中心

目的构建靶向EGFR的人工microRNA的病毒载体,用于抑制肿瘤细胞增殖,实现特异高效诱导细胞凋亡的目的。方法利用网络资源设计针对人EGFR的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至腺病毒表达质粒pDC312-SLPI-pA上,得到腺病...

目的构建靶向EGFR的人工microRNA的病毒载体,用于抑制肿瘤细胞增殖,实现特异高效诱导细胞凋亡的目的。方法利用网络资源设计针对人EGFR的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至腺病毒表达质粒pDC312-SLPI-pA上,得到腺病毒穿梭质粒pDC312-SLPI-EGFR amiR-pA,与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad-SLPI-EGFR amiR。将AdSLPI-EGFR amiR感染喉癌Hep-2细胞后,观察细胞形态改变,MTT检测细胞增殖情况,Western blot检测EGFR的表达,以评估EGFR人工microRNA的作用效果。结果 DNA测序结果显示,针对人EGFR的人工microRNA克隆构建正确。Ad-SLPI-EGFR amiR感染后,Westem blot结果显示,感染Ad-SLPI-micro EGFR的Hep-2细胞EGFR表达水平下降。显微镜下见喉癌细胞变圆,皱缩,部分呈串珠状、浮起。MTT结果提示喉癌细胞增殖明显抑制。结论成功构建了可用针对人EGFR的人工microRNA表达的腺病毒载体,能有效调控喉癌Hep-2细胞中EGFR的表达,抑制肿瘤细胞增殖。

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国外喉癌患者术后生存质量研究进展

国际耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011年第5期35卷 289-292页

作者：叶凡陈建福林刃舆方潇碧严毛晓温州医学院附属第一医院耳鼻咽喉科 325000

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，发病率在全世界差异很大。喉癌的治疗目前仍以外科手术为主，但手术治疗显著影响了患者的生理、心理和社会功能。生存质量量表的评价是衡量喉癌术后生存质量的重要方法。本文仅就国外喉癌患者术后生存... 详细信息

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，发病率在全世界差异很大。喉癌的治疗目前仍以外科手术为主，但手术治疗显著影响了患者的生理、心理和社会功能。生存质量量表的评价是衡量喉癌术后生存质量的重要方法。本文仅就国外喉癌患者术后生存质量的研究进行综述。

关键词：喉肿瘤(Laryngeal Neoplasms) 生存质量(Quality ofLife)