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作者：严志祎北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的本课题旨在观察Apelin及其受体APJ在肝郁脾虚证模型小鼠下丘脑的表达情况及逍遥散的调节作用。对APJ/Apelin系统作用机理进行研究,探索APJ/Apelin系统与应激的关系,为肝郁脾虚证候生物学基础的研究提供新的思路。Apelin及其受体... 详细信息

研究目的本课题旨在观察Apelin及其受体APJ在肝郁脾虚证模型小鼠下丘脑的表达情况及逍遥散的调节作用。对APJ/Apelin系统作用机理进行研究,探索APJ/Apelin系统与应激的关系,为肝郁脾虚证候生物学基础的研究提供新的思路。Apelin及其受体APJ参与了神经、内分泌、免疫、消化、循环等多系统的生理活动,同时在心血管、中枢神经系统、体液平衡、胃肠功能、摄食与饮水等多种生物功能中有一定的调节作用,其作为神经肽在下丘脑的室旁核与视上核表达丰富,参与下丘脑的各项生理活动。本课题通过复制C57BL/6J小鼠肝郁脾虚模型,从动物行为、宏观表征、客观指标等方面对动物模型进行评价,并观察肝郁脾虚模型小鼠下丘脑内Apelin及其受体APJ的改变及逍遥散的调节作用,通过组间对比了解逍遥散与对照组药物对小鼠的防治效果。以APJ/Apelin的表达为切入点,运用组织化学和细胞分子生物学技术从组织形态、蛋白和基因表达水平来检测肝郁脾虚证小鼠下丘脑Apelin和APJ受体的表达情况及逍遥散的干预对其表达的影响,从方证相关的角度研究肝郁脾虚证候与下丘脑APJ/Apeli n系统表达的关系。研究方法在课题组前期实验基础上,选用成年C57BL/6J小鼠80只,10-12周龄,随机分为4组,每组20只,分别为：正常对照组,模型组,逍遥散组,氟西汀组。适应性喂养7天后,采用慢性束缚+饮食失节+过度疲劳的复合应激方法制作肝郁脾虚证小鼠21天模型。每种刺激方法累计使用2-3次,造模持续21天。运用荷兰Noldus公司的行为学设备(Etho Vision 3.0行为学分析系统)对模型小鼠应激、抑郁等相关表现进行观察,行为学主要包括：小鼠宏观表征,旷场实验和糖水偏好实验等,以此对动物模型进行评价。取全脑制备石蜡切片,采用免疫组织化学方法观察逍遥散对模型小鼠下丘脑组织形态的影响以及Apelin及其受体APJ的表达水平。冰上取下丘脑,Western blot检测Apelin及其受体APJ的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测Apelin及其受体APJ基因的表达。结果成功复制了肝郁脾虚证小鼠模型,采用实时荧光定量PCR检测小鼠下丘脑Apelin/APJ mRNA水平的变化,结果显示模型组、逍遥散组和氟西汀组三组小鼠下丘脑Apelin的 mRNA相对表达量之间无明显差异,都明显低于正常组小鼠下丘脑Apelin的 mRNA相对表达量(P<0.01)。模型组小鼠下丘脑APJ受体nRNA表达明显低于正常组、逍遥散组和氟西汀组(P<0.01)。Western blot方法检测了小鼠下丘脑Apelin及APJ受体蛋白表达情况,结果显示模型组和逍遥散组小鼠下丘脑Apelin含量明显低于正常组(P<0.01),模型组小鼠下丘脑APJ受体含量低于正常组和逍遥散组(P<0.05),同时氟西汀组小鼠下丘脑Apelin和APJ受体含量都低于正常组(P<0.05)。通过免疫组织化学方法观察各组小鼠下丘脑视上核与室旁核Apelin及APJ受体蛋白的表达,结果显示在下丘脑视上核中,Apelin在正常组、逍遥散组和氟西汀组中的阳性表达细胞个数显著多于模型组(P<0.01);在下丘脑室旁核中,Apelin在逍遥散组中的阳性表达细胞个数多于正常组、模型组和氟西汀组,且具有显著差异(P<0.01)。在下丘脑视上核中,正常组、逍遥散组和氟西汀组Apelin的平均光密度值大于模型组,且差异显著(P<0.01),同时逍遥散组与氟西汀组Apelin的平均光密度值大于正常组(P<0.05,P<0.01);在下丘脑室旁核中,逍遥散组Apelin的平均光密度值显著大于正常组、模型组和氟西汀组(P<0.01)。在下丘脑视上核中,APJ受体在逍遥散组中的阳性表达细胞个数明显少于正常组和模型组(P<0.05),同时APJ受体在氟西汀组中的阳性表达细胞个数明显少于其余三组(P<0.01);在下丘脑室旁核中,APJ受体在模型组中的阳性表达细胞个数多于正常组、逍遥散组和氟西汀组,差异具有统计学意义(P<0.05)。在下丘脑视上核中,逍遥散组与氟西汀组小鼠APJ受体的平均光密度值低于正常组与模型组(P<0.05),而正常组与模型组之间无明显差异;在下丘脑室旁核中,模型组小鼠APJ受体的平均光密度值大于正常组(P<0.05),同时显著大于逍遥散组与氟西汀组(P<0.01),氟西汀组小鼠APJ受体的平均光密度值小于正常组(P<0.05)。结论当肝郁脾虚证发生时,会伴随有下丘脑中Apelin/APJ系统的变化,这种变化为Apelin蛋白表达的下调和mRNA的上调及APJ受体蛋白和mRNA的表达的上调,且逍遥散对这一神经肽系统具有调节作用。对于Apelin/APJ系统在肝郁脾虚证中的一系列变化以及逍遥散对其更全面的调节机制仍有待深入研究。

关键词： Apelin APJ受体肝郁脾虚证下丘脑逍遥散

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浅谈表观遗传现象与中医“治未病”思想

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中医杂志 2018年第19期59卷 1652-1655,1670页

作者：许亚辉严志祎李杰陈家旭河南中医药大学基础医学院北京中医药大学

表观遗传指的是不改变基因DNA序列,但基因的表达却发生了可遗传的变化,强调基因和环境的相互作用;中医"治未病"思想是建立在"天人合一"的基础上,重视外界环境致病因素对人体的作用,所以二者在人体-环境-疾病之间的联系上不谋而合,均可... 详细信息

表观遗传指的是不改变基因DNA序列,但基因的表达却发生了可遗传的变化,强调基因和环境的相互作用;中医"治未病"思想是建立在"天人合一"的基础上,重视外界环境致病因素对人体的作用,所以二者在人体-环境-疾病之间的联系上不谋而合,均可为预防和治疗疾病提供支持。从注重先天固根本、顺应自然以养生、调养性情以养神、调摄饮食存正气四方面探讨表观遗传现象与中医"治未病"思想的有机融合方式,从而开拓中医养生和疾病治疗新途径。

关键词：表观遗传治未病顺应自然调养性情

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2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型的建立及评价

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中国应用生理学杂志 2015年第1期31卷 23-26,I0003页

作者：李娜刘群李晓娟白晓晖刘玥芸金钟晔景玉霞严志祎陈家旭北京中医药大学基础医学院北京100029 新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830054

目的:建立2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型并进行评价,为进一步研究该病提供动物模型。方法:将24只Wistar大鼠随机分为3组(n=8):正常组(N组)、2型糖尿病组(T组)、2型糖尿病合并抑郁症组(T+D组)。采用高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌... 详细信息

目的:建立2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型并进行评价,为进一步研究该病提供动物模型。方法:将24只Wistar大鼠随机分为3组(n=8):正常组(N组)、2型糖尿病组(T组)、2型糖尿病合并抑郁症组(T+D组)。采用高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法制备2型糖尿病模型,在其基础上再用21 d慢性束缚的方法建立2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型。21 d慢性束缚后做口服葡萄糖耐受试验(OGTT)和胰岛素耐受试验(ITT);利用行为学设备对大鼠旷场实验进行分析,了解大鼠的抑郁程度;取材后用ELISA法检测大鼠血清5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA),验证评价模型是否成功。结果:在ITT和OGTT中,T组和T+D组的血糖在180 min后没有恢复到正常水平;旷场行为学分析表明T+D组大鼠5 min内最大移动距离,中央区滞留时间和中央区滞留次数降低;T+D组血清中5-HT和DA含量降低。结论:本实验利用高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量STZ及21 d慢性束缚的方法,成功复制2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型,适用于后续研究。

关键词： 2型糖尿病合并抑郁症大鼠模型链脲佐菌素胰岛素耐受试验口服葡萄糖耐受试验 5-羟色胺多巴胺旷场实验

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基于血清药物化学和网络药理学的藏族药七十味珍珠丸安全性评价

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中国中药杂志 2023年第9期48卷 2538-2551页

作者：严志祎宗咏花张程斐吴丽丽秦灵灵刘铜华北京中医药大学东方医院北京100078 西藏藏医药大学藏医系西藏拉萨850000 北京中医药大学教育部中医养生学重点实验室北京100029

采用血清药物化学和网络药理学探讨七十味珍珠丸入血活性成分抑制复方中佐太组分肝肾毒性的相关机制,为七十味珍珠丸的临床安全应用提供依据。通过色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)鉴定小鼠七十味珍珠丸含药血清中的小分子化合物。综合运用TCMS... 详细信息

采用血清药物化学和网络药理学探讨七十味珍珠丸入血活性成分抑制复方中佐太组分肝肾毒性的相关机制,为七十味珍珠丸的临床安全应用提供依据。通过色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)鉴定小鼠七十味珍珠丸含药血清中的小分子化合物。综合运用TCMSP、HERB、PubChem、GeneCards、SuperPred等多个数据库,检索七十味珍珠丸入血活性成分,预测其作用靶点,并与数据库检索到的汞毒性肝肾损伤相关靶点交集比对,筛选出七十味珍珠丸抑制佐太组分潜在汞毒性的作用靶点。采用Cytoscape软件构建七十味珍珠丸入血活性成分-靶点网络,使用STRING数据库构建交集靶点蛋白蛋白互作(PPI)网络,通过DAVID数据库对靶点基因进行GO功能与KEGG通路富集分析,构建活性成分-靶点-通路网络,并筛选出关键成分和靶点进行分子对接验证。结果显示,七十味珍珠丸含药血清中共鉴定出活性成分44种,其中13种可能是原型药物成分,作用于肝肾汞毒性的潜在靶点70个。通过PPI网络拓扑分析,得到12个关键靶点基因(HSP90AA1、MAPK3、STAT3、EGFR、MAPK1、APP、MMP9、NOS3、PRKCA、TLR4、PTGS2、PARP1)和6个子网络。通过对4个包含关键靶点基因的子网络进行GO功能与KEGG通路富集分析,构建活性成分-靶点-关键通路网络,并进行分子对接验证,发现牛磺脱氧胆酸、N-乙酰-L-亮氨酸、D-泛酸半钙等活性成分可能通过作用于MAPK1、STAT3、TLR4等主要靶点,调控代谢、免疫、炎症以及氧化应激相关的生物学功能及通路,从而抑制七十味珍珠丸中佐太成分潜在的汞毒性。因而推测,七十味珍珠丸的入血活性成分可能具有一定的减毒功效,抑制佐太潜在的汞毒性,发挥减毒增效的作用。

关键词：七十味珍珠丸佐太血清药物化学网络药理学分子对接

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基于复合应激的肝郁脾虚证小鼠模型的建立与评价

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中华中医药杂志 2016年第5期31卷 1840-1844页

作者：刘燕邹小娟丁秀芳严志祎陈家旭湖北中医药大学武汉430065 北京中医药大学北京100029

目的:建立复合应激方法诱导的肝郁脾虚证小鼠模型并对其进行评价。方法:80只CS7BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组和氟西汀组,每组20只。除正常组外其余各组小鼠均以复合应激方法进行造模,观察小鼠宏观表征、体质量、摄食量、... 详细信息

目的:建立复合应激方法诱导的肝郁脾虚证小鼠模型并对其进行评价。方法:80只CS7BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组和氟西汀组,每组20只。除正常组外其余各组小鼠均以复合应激方法进行造模,观察小鼠宏观表征、体质量、摄食量、行为学和血清D-木糖含量,并对小鼠的肝郁脾虚的程度进行评价。结果:1宏观表征:与正常组比较,模型组小鼠其精神状态出现易怒最后转变为低落,斗争减少,毛发凌乱无光泽,扎堆少动,灌胃抵抗减弱,出现便溏等,且体质量和摄食量均显著减少(P<0.05),逍遥散对模型小鼠的宏观表征有一定的改善作用。2旷场实验:与正常组比较,模型组小鼠中央区进入次数和总运动距离显著减少(P<0.01),与模型组比较,逍遥散组和氟西汀组中央区停留时间明显降低(P<0.05,P<0.01),总运动距离明显增加(P<0.01,P<0.05)。3新环境抑制进食实验:各组小鼠新环境抑制进食时间无显著差异。4高架十字迷宫实验:与正常组比较,模型组小鼠开放臂停留时间比例显著减少(P<0.01),与模型组比较,逍遥散组小鼠开放臂停留时间比例显著增加(P<0.05);5血清D-木糖含量:与正常组比较,模型组小鼠血清D-木糖含量显著减少(P<0.05),与模型组比较,逍遥散组小鼠血清D-木糖含量显著增加(P<0.01),且高于氟西汀组(P<0.05)。结论:本研究采用复合应激方法制作小鼠肝郁脾虚证模型的初步尝试是成功的。

关键词：肝郁脾虚证复合应激动物模型评价逍遥散

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逍遥散对慢性束缚应激抑郁模型大鼠JAK/STAT信号通路的影响

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中华中医药杂志 2016年第5期31卷 1700-1704页

作者：李晓娟白晓晖李娜刘群严志祎马庆宇周岩陈家旭北京中医药大学北京100029 中国中医药出版社北京100029 北京大学首钢医院康复医学科北京100144

目的:研究逍遥散对慢性束缚应激抑郁模型大鼠杏仁核肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及JAK/STAT信号通路的影响,以期探讨逍遥散抗抑郁的机制。方法:雄性SD大鼠随机分正常组、模型组、氟西汀组和逍遥散组,每组7只。除正常组外,其余各组每天随机... 详细信息

目的:研究逍遥散对慢性束缚应激抑郁模型大鼠杏仁核肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及JAK/STAT信号通路的影响,以期探讨逍遥散抗抑郁的机制。方法:雄性SD大鼠随机分正常组、模型组、氟西汀组和逍遥散组,每组7只。除正常组外,其余各组每天随机时间点束缚3h,连续21d,建立慢性束缚应激抑郁模型。在造模同时,氟西汀组灌胃氟西汀水溶液0.2mg·100g-1·d-1,0.1m L/kg;逍遥散组灌服逍遥散混悬液5.98g·kg^(-1)·d^(-1),0.1m L/kg;模型组灌服等体积去离子水。造模结束后,记录旷场实验中的修饰次数、穿格数和直立次数;ELISA法检测杏仁核TNF-α、gp130、total-Jak2及total-STAT3含量。结果:1修饰次数和穿格数:模型组均少于正常组(P<0.05),而氟西汀组和逍遥散组均多于模型组(P<0.05)。2杏仁核TNF-α、gp130及total-STAT3含量:模型组均高于正常组(P<0.05),而氟西汀组和逍遥散组均低于模型组(P<0.05)。3各组大鼠杏仁核total-Jak2含量比较,差异无统计学意义。结论:逍遥散能够改善慢性束缚应激模型的抑郁样行为,其机制可能与调节杏仁核TNF-α表达及JAK/STAT信号通路有关。

关键词：逍遥散慢性束缚应激抑郁模型杏仁核肿瘤坏死因子-α JAK/STAT信号通路

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逍遥散对慢性应激抑郁大鼠海马一氧化氮合酶表达的影响

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中华中医药杂志 2019年第12期34卷 5679-5683页

作者：许亚辉吴佳佳严志祎李杰陈家旭河南中医药大学基础医学院郑州450046 北京中医药大学北京100029 北京中医药大学中医学院北京100029

目的:探讨逍遥散对慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁大鼠海马一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,以期探讨逍遥散抗抑郁的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组和逍遥散组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠每天... 详细信息

目的:探讨逍遥散对慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁大鼠海马一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,以期探讨逍遥散抗抑郁的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组和逍遥散组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠每天用CUMS法造模,连续21d,建立CUMS大鼠抑郁模型,在每次造模前30min,给除正常组外的各组大鼠灌胃给药。造模结束后,行糖水偏好实验进行模型评价,并通过Western blot方法从蛋白水平检测各组大鼠海马nNOS、iNOS、eNOS蛋白表达情况,并观测逍遥散对其调节作用。结果:模型组大鼠糖水消耗率显著低于正常组、氟西汀组和逍遥散组(P<0.01),模型组大鼠海马nNOS、iNOS蛋白表达量显著高于正常组(P<0.01),而eNOS蛋白表达量显著低于正常组(P<0.01),逍遥散组和氟西汀组nNOS、iNOS表达均低于模型组(P<0.01),而eNOS表达均高于模型组(P<0.01)。结论:逍遥散能够改善CUMS抑郁模型大鼠的抑郁状态,其机制可能与调节海马内nNOS、iNOS、eNOS蛋白表达量有关。

关键词：逍遥散慢性不可预知性温和应激抑郁海马一氧化氮合酶机制

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浅议从肝论治子宫肌瘤

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中华中医药杂志 2021年第2期36卷 915-917页

作者：陈剑北赵宗耀张曼闫秋莹严志祎侯雅静陈家旭北京中医药大学北京100029 北京中医药大学中医学院中医诊断系北京100029

子宫肌瘤是妇科领域常见的良性肿瘤,随着社会生活节奏加快,加之女性特殊的生理特点,其发病率呈上升趋势,在中医学中属"癥瘕"的范畴。笔者从癥瘕源流入手,结合肝脏的生理病理特点,从肝主疏泄、肝主藏血、肝与免疫调节3个角度分析肝与子... 详细信息

子宫肌瘤是妇科领域常见的良性肿瘤,随着社会生活节奏加快,加之女性特殊的生理特点,其发病率呈上升趋势,在中医学中属"癥瘕"的范畴。笔者从癥瘕源流入手,结合肝脏的生理病理特点,从肝主疏泄、肝主藏血、肝与免疫调节3个角度分析肝与子宫肌瘤发病的相关性,并对子宫肌瘤的病因病机及中医治疗进行浅析,以期能为现代治疗子宫肌瘤提供新思路、新方法。

关键词：肝子宫肌瘤癥瘕

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慢性束缚应激抑郁症大鼠模型的复制及逍遥散对海马色氨酸代谢途径的调节作用

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环球中医药 2017年第11期10卷 1198-1202页

作者：焦海燕严志祎姜幼明刘玥芸陈家旭北京中医药大学中医学院硕士研究生100029

目的通过慢性束缚应激方法复制大鼠抑郁症模型,并观察海马色氨酸代谢途径的变化与逍遥散的调节作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、逍遥散组与氟西汀组。采用21天慢性束缚应激的方法复制大鼠抑郁症模型,通过大鼠体重变... 详细信息

目的通过慢性束缚应激方法复制大鼠抑郁症模型,并观察海马色氨酸代谢途径的变化与逍遥散的调节作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、逍遥散组与氟西汀组。采用21天慢性束缚应激的方法复制大鼠抑郁症模型,通过大鼠体重变化、糖水偏好实验、新环境抑制进食实验、旷场试验对模型进行评价。采用ELISA法测定各组大鼠海马色氨酸(tryptophan,Trp)与5-羟色胺(5-HT)的含量。结果模型组大鼠糖水偏好量和新环境进食时间与正常组大鼠相比有显著差异(P<0.01);旷场试验的中央区进入次数、中央区停留时间以及总穿格次数与正常组相比均有统计学差异(P<0.01,P<0.05)。ELISA结果显示,模型组大鼠海马5-HT含量显著低于正常组(P<0.01),而逍遥散组和氟西汀组海马5-HT含量明显高于模型组(P<0.05,P<0.01);模型组大鼠海马中色氨酸的含量较正常组明显增加(P<0.01)。结论在慢性束缚应激抑郁症大鼠海马中存在色氨酸代谢途径的异常,这与抑郁症的发病密切相关,且逍遥散能够通过对海马色氨酸代谢的调节起到一定的抗抑郁作用。

关键词：抑郁症色氨酸代谢途径 5-羟色胺逍遥散

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肝郁与生殖功能异常关系研究进展

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中华中医药杂志 2016年第3期31卷 935-938页

作者：王鑫杏刘燕陈家旭刘玥芸马庆宇李晓娟严志祎王明晶河南中医学院基础医学院郑州450008 湖北中医药大学基础医学院武汉430065 北京中医药大学基础医学院北京100029

中医藏象理论中,肝主疏泄,肾主生殖,男子精液的贮藏与施泄,女子的按时排卵与行经,是肝肾二脏之气的疏泄与闭藏作用相互协调的结果。随着中医肝藏象学说研究的深入和生殖健康在当今社会受到越来越多的关注,近年来对肝郁与生殖功能异常关... 详细信息

中医藏象理论中,肝主疏泄,肾主生殖,男子精液的贮藏与施泄,女子的按时排卵与行经,是肝肾二脏之气的疏泄与闭藏作用相互协调的结果。随着中医肝藏象学说研究的深入和生殖健康在当今社会受到越来越多的关注,近年来对肝郁与生殖功能异常关系的研究日益深化。文章将近年国内外有关肝郁与生殖功能异常关系的理论、临床、实验方面的研究成果及文献进行综述,并对研究中存在的一些问题进行讨论,提出今后的研究思路与建议。

关键词：肝气郁结生殖功能研究进展

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