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玉米赤霉烯酮对湖羊睾丸间质细胞毒性及m6A甲基化修饰相关基因表达的影响

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南京农业大学学报 2022年

作者：苏晓彤李慧贤胡康瑶刘亮万永杰南京农业大学动物科技学院羊业科学研究所

[目的]本文旨在探究玉米赤霉烯酮(zearalenone， ZEA)对湖羊睾丸间质细胞(Leydig cells， LCs)的毒性作用。[方法]试验采用湖羊LCs为试验材料，用200 μmol·L-1ZEA 处理8 h，通过Edu法检测细胞增殖情况，qRT-PCR 和Western blot分别检...

[目的]本文旨在探究玉米赤霉烯酮(zearalenone， ZEA)对湖羊睾丸间质细胞(Leydig cells， LCs)的毒性作用。[方法]试验采用湖羊LCs为试验材料，用200 μmol·L-1ZEA 处理8 h，通过Edu法检测细胞增殖情况，qRT-PCR 和Western blot分别检测与细胞增殖和凋亡、氧化应激、m6A甲基化修饰相关基因和蛋白的表达变化。[结果]与对照组相比，ZEA处理组LCs细胞活性和细胞增殖数量极显著下降(P＜0.01)；细胞增殖相关基因pcna相对表达量及其相关蛋白表达水平极显著下降(P＜0.01)；促凋亡基因相对表达量升高(bax、caspase3，P＜0.01；tp53、caspase9，P＜0.05)，其相关蛋白表达水平升高(TP53、CASPASE9，P＜0.01)；抗凋亡基因bcl-2相对表达量及其相关蛋白表达水平显著降低(P＜0.05)；氧化应激相关基因相对表达量上升(cat，P＜0.05；gsh-px、sod2，P＜0.01)，其相关蛋白表达水平上升(SOD2，P＜0.01)；m6A相关基因的相对表达量alkbh5显著降低(P＜0.05)、mettl3和ythdc1极显著升高(P＜0.01)、 ythdf3显著升高(P＜0.05)。[结论]ZEA可抑制湖羊LCs增殖、促进湖羊LCs凋亡，导致LCs发生氧化损伤，产生毒性作用，且其毒性作用可能跟m6A甲基化修饰变化相关。

关键词：

体细胞核移植的不完全核重编程与克隆动物的发育异常

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畜牧与兽医 2008年第8期40卷 98-101页

作者：万永杰张艳丽祝铁钢王锋南京农业大学动物胚胎工程技术中心江苏南京210095

体细胞核完全的重编程是成功生产克隆动物的先决条件,体细胞核的不完全重编程是克隆动物发育异常的主要原因。本文主要通过对DNA甲基化、组蛋白乙酰化、端粒、X染色体失活和印记基因表达几个方面的论述,来探讨造成克隆动物发育异常的原因。

关键词：体细胞核移植核重编程 DNA甲基化组蛋白乙酰化端粒 X染色体失活印记基因

日粮添加酵母硒对夏季湖羊血液指标和睾丸发育及基因表达的影响

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南京农业大学学报 2022年第4期45卷 752-760页

作者：夏雨婷万永杰姜志洋陈琪茆达干南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

[目的]本研究旨在探究夏季日粮添加酵母硒对湖羊血液指标和睾丸发育的影响,解析酵母硒影响睾丸功能的潜在分子机制。[方法]将96只4月龄雄性湖羊按体重相近原则分为对照组(Con,基础日粮)和酵母硒组(Se,基础日粮+酵母硒0.4 g·kg^(-1))。... 详细信息

[目的]本研究旨在探究夏季日粮添加酵母硒对湖羊血液指标和睾丸发育的影响,解析酵母硒影响睾丸功能的潜在分子机制。[方法]将96只4月龄雄性湖羊按体重相近原则分为对照组(Con,基础日粮)和酵母硒组(Se,基础日粮+酵母硒0.4 g·kg^(-1))。预试期1周,正试期4周,记录体重变化;收集血液检测生化、抗氧化与免疫相关指标;采集睾丸组织,测质量和大小及其硒浓度,HE染色观察组织学形态(HE),转录组测序(RNA-seq)分析差异基因。[结果]Se组平均日增重显著高于Con组(P0.05),但Se组睾丸中硒浓度极显著高于Con组(P<0.01)。与Con组相比,Se组血清游离脂肪酸(NEFA)浓度显著升高(P<0.05),血浆IgA、IgG和IgM浓度极显著升高(P<0.01),血清和睾丸组织中GSH-Px活性极显著升高(P<0.01)。HE结果显示生精小管中有精子出现,Se组生精细胞排列更紧密且生精上皮厚度极显著增加(P<0.01)。RNA-seq分析鉴定出2321个差异表达基因,包含671个上调基因和1650个下调基因,通过GO和KEGG功能分析,差异基因主要富集在电子转移链、呼吸链复合体、呼吸链、线粒体膜部分、NADH脱氢酶(泛醌)活性、NADH脱氢酶(醌)活性和产热等通路。[结论]夏季日粮添加酵母硒可促进湖羊的脂质代谢,改善其抗氧化能力和免疫功能,改变湖羊睾丸发育相关基因的表达,为进一步阐明酵母硒缓解夏季高温对湖羊睾丸损伤的分子机制提供科学依据。

关键词：酵母硒湖羊夏季高温血液指标睾丸转录组测序

线粒体DNA损伤及其碱基切除修复的研究进展

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畜牧与兽医 2011年第9期43卷 100-104页

作者：贾若欣周峥嵘万永杰王锋南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

DNA对于细胞有氧代谢和外源性化合物产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)极其敏感。大量研究表明,ROS可引起多种类型的DNA氧化损伤,形成种类繁多的具有致突变作用的碱基氧化产物。线粒体DNA接近线粒体自由基的合成区域,因此氧化... 详细信息

DNA对于细胞有氧代谢和外源性化合物产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)极其敏感。大量研究表明,ROS可引起多种类型的DNA氧化损伤,形成种类繁多的具有致突变作用的碱基氧化产物。线粒体DNA接近线粒体自由基的合成区域,因此氧化应激是诱导线粒体DNA突变的主要因素之一。线粒体DNA突变或损伤与机体衰老及肿瘤等生理及病理过程有关,其修复机制尤其是碱基切除修复是保证线粒体DNA完整性的重要途径。本文就其功能及在线粒体功能障碍相关疾病中的研究热点作一综述。

关键词：线粒体DNA 活性氧碱基切除修复 AP位点 DNA糖苷酶

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螺纹紧固件预紧与防松的研究

工程机械 2011年第8期42卷 50-52+60+8-9页

作者：万永杰湖南中联重科车桥有限公司

在工程机械和其它机械零部件装配件中,采用螺栓连接是最常用的一种紧固结构,如何根据使用工况选取合适的螺栓使被紧固件不松动,确保紧固件正常工作,对螺纹的防松至关重要。通过对螺纹的拧紧和松开时的受力分析推导出螺纹紧固与松开的关... 详细信息

在工程机械和其它机械零部件装配件中,采用螺栓连接是最常用的一种紧固结构,如何根据使用工况选取合适的螺栓使被紧固件不松动,确保紧固件正常工作,对螺纹的防松至关重要。通过对螺纹的拧紧和松开时的受力分析推导出螺纹紧固与松开的关系式。提供一种计算方法,确保螺纹紧固件在工作状态中连接可靠。

关键词：螺纹紧固防松

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基因突变与羊乏情关系的研究

江苏农业科学 2010年第1期38卷 194-197页

作者：祝铁钢王子玉万永杰刘源王锋庞训胜南京农业大学动物胚胎工程技术中心江苏南京210095 衡水学院河北衡水053000

选取了连续10个月未出现发情的湖羊和正常羊作为研究对象,提取其基因组DNA,对ESR基因设计了2对引物并采用PCR-SSCP技术检测,同时对GDF9基因的FecGH和BMP15基因的FecXG和FecXB3个突变位点设计了3对引物进行PCR-RFLP检测,以获取乏情与基... 详细信息

选取了连续10个月未出现发情的湖羊和正常羊作为研究对象,提取其基因组DNA,对ESR基因设计了2对引物并采用PCR-SSCP技术检测,同时对GDF9基因的FecGH和BMP15基因的FecXG和FecXB3个突变位点设计了3对引物进行PCR-RFLP检测,以获取乏情与基因突变的关系。结果发现:引物1、引物2和引物3所扩增产物均为AA型,在引物4对正常羊和繁殖障碍羊进行SSCP结果中发现2种羊的基因型完全相同均为BB型,而在引物5进行扩增并做SSCP分析发现2种羊的基因型为CC型和DD型,正常羊CC基因型所占比例为38%,DD基因型为62%,而繁殖障碍羊的CC基因型所占比例为41%,DD为59%,正常羊和乏情羊都仅存在这2种基因型而且所占比例基本相同,差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明,造成乏情的原因与这几种基因没有直接关系。

关键词：湖羊 ESR FecGH FecXG FecXB PCR-SSCP PCR-RFLP

Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究

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南京农业大学学报 2024年

作者：周磊李东旭冒魏佳刘孜斐时晓丽高雪万永杰南京农业大学动物科技学院南通市启东市农业技术推广中心

[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑（PrimeEditor，PE）对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素Myostatin（MSTN）基因外显子进行敲除，旨在比较两种技术敲除MSTN基因的效率，并验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞... 详细信息

[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑（PrimeEditor，PE）对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素Myostatin（MSTN）基因外显子进行敲除，旨在比较两种技术敲除MSTN基因的效率，并验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊 MSTN基因的三个外显子分别设计sgRNA（single guide RNA， sgRNA）以及pegRNA（prime editing guide RNA， pegRNA），构建出相应的质粒，然后，将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染至湖羊骨骼肌卫星细胞中。24 h后观察细胞荧光，48 h后将细胞消化，使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞，收集细胞获得基因组DNA进行桑格测序，检测两种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因三个外显子敲除的基因编辑工具，质粒测序结果显示序列插入正确；CRISPR/Cas9编辑效率（65%，88%和91%）显著高于先导编辑的编辑效率（57%，29%和33%），而先导编辑的indel比率显著低于常规的CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下，常规CRISPR/Cas9相比于先导编辑对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除有更高的编辑效率。

关键词：基因编辑 CRISPR/Cas9 先导编辑 MSTN 湖羊骨骼肌卫星细胞

前路减压植骨内固定术治疗脊髓型颈椎病46例

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中国实用医药 2014年第15期9卷 99-100页

作者：万永杰河南省开封市第二中医院 475004

目的探讨对脊髓型颈椎病患者实施前路减压植骨内固定术治疗的临床效果。方法回顾性分析在本院住院治疗的脊髓型颈椎病患者55例,应用前路减压植骨内固定术的手术情况及术前、术后3个月、术后6个月的JOA评分。结果 55例患者共121个颈椎节... 详细信息

目的探讨对脊髓型颈椎病患者实施前路减压植骨内固定术治疗的临床效果。方法回顾性分析在本院住院治疗的脊髓型颈椎病患者55例,应用前路减压植骨内固定术的手术情况及术前、术后3个月、术后6个月的JOA评分。结果 55例患者共121个颈椎节段接受手术减压治疗,平均手术时间为(2.4±0.3)h,术中出血量为(217.2±16.3)ml。患者术前JOA评分为(8.02±1.03)分,术后3个月为(12.72±0.88)分,6个月为(13.56±1.04)分,与术前评分相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用前路减压植骨内固定术治疗脊髓型颈椎病效果显著,能够明显改善患者脊椎功能,值得在临床上推广应用。

关键词：脊髓型颈椎病前路减压植骨内固定术 JOA评分改善率

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两种手术方式治疗股骨粗隆间骨折的疗效分析

河南医学研究 2014年第5期23卷 59-61页

作者：万永杰开封市第二中医院骨科河南开封475004

目的:比较髋钉板内固定(DHS)与人工股骨头置换(HA)两种手术方式治疗股骨粗隆间不稳定型骨折的临床疗效。方法:选取2010年1月至2012年6月开封市第二中医院股骨粗隆间不稳定型骨折手术治疗患者72例,根据患者病情及知情同意原则分成两组,... 详细信息

目的:比较髋钉板内固定(DHS)与人工股骨头置换(HA)两种手术方式治疗股骨粗隆间不稳定型骨折的临床疗效。方法:选取2010年1月至2012年6月开封市第二中医院股骨粗隆间不稳定型骨折手术治疗患者72例,根据患者病情及知情同意原则分成两组,分别行DHS手术34例,HA手术38例。记录手术时间、术中失血量、住院时间及术后并发症,并在随访结束时进行Harris评分。结果:DHS组在手术失血量及平均手术时间、住院时间上明显多于HA组(P0.05)。HA组疗效优良率(87.9%)高于DHS组(66.5%),术后并发症发生率(5.3%)明显低于DHS组(15.8%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HA治疗股骨粗隆间不稳定型骨折并发症少、手术时间短、恢复快,临床疗效优于DHS。

关键词：动力髋螺钉内固定人工股骨头置换股骨粗隆间不稳定型骨折