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基于液滴蒸发分子梳技术的DNA分子拉伸及其图案动力学机制研究

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基于液滴蒸发分子梳技术的DNA分子拉伸及其图案动力学机制研究

作者：万梦娇西北大学

学位级别：硕士

针对溶液中的单分子DNA的可视化和操纵技术,有助于研究DNA分子的物化性质及其应用,加深了人类对生命基元的探索和对生命基本原理的认识。另外,基于单分子DNA的有序2D/3D结构,可以作为微纳传感器件的构成单元,开展微检测技术在生命科学... 详细信息

针对溶液中的单分子DNA的可视化和操纵技术,有助于研究DNA分子的物化性质及其应用,加深了人类对生命基元的探索和对生命基本原理的认识。另外,基于单分子DNA的有序2D/3D结构,可以作为微纳传感器件的构成单元,开展微检测技术在生命科学领域的研究。分子梳技术是一种简单高效的、借助界面力拉伸操纵处于溶液中的DNA分子的技术。本文结合高分辨荧光成像系统和高精度接触角分析系统,研究了在液滴蒸发分子梳法中,缓冲液和DNA分子浓度对DNA液滴蒸发和DNA分子拉伸结果的影响,以及DNA蒸发形成的自组装图案。主要研究内容如下:首先,利用液滴蒸发法在聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面实现了对DNA分子的完全拉伸操纵。用高分辨荧光成像显微技术研究了 DNA分子在蒸发液滴内的定向移动,以及缓冲液浓度、溶液酸碱性、基底平整度与疏水性对DNA拉伸结果的影响。其次,利用高精度接触角分析系统研究了在不同缓冲液和DNA分子浓度下,DNA液滴的动态蒸发过程。实验发现,在DNA液滴蒸发过程中存在两种关键的蒸发模式:常接触角模式和常接触面积模式,并且这两种模式均受到缓冲液和DNA分子浓度的影响。其中,常接触角模式只存在于低浓度下,随着浓度升高此模式逐渐被混合模式所取代。常接触角模式的存在有利于实现DNA分子均匀拉伸。常接触面积模式在各种浓度普遍存在,在高浓度下,常接触面积模式持续时间更长,在这种情况下,拉伸的DNA分子容易形成一种环状分布图案。通过实验和理论分析,可以将DNA环状图案的形成归因于“咖啡环”效应和分子梳原理的共同作用。最后,对DNA液滴蒸发形成的一种“DNA多边形网状图案”进行初步研究,统计并分析了这种图案的特点和规律。

关键词：分子梳缓冲液浓度蒸发模式 DNA环状图案咖啡环效应 DNA网状图案

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pH值对模拟体液中羟磷灰石晶体生长的调控

岩石矿物学杂志 2015年第6期34卷 950-956页

作者：万梦娇王长秋孟繁露鲁安怀李艳造山带与地壳演化教育部重点实验室北京大学地球与空间科学学院北京100871

在37℃时,配制了与人体血液等钙磷比的模拟体液（SBF）,在不同pH值下合成了含钙磷酸盐。通过X射线电子衍射（XRD）、傅立叶红外吸收光谱（FTIR）、扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）对磷酸盐的物相组成、微观形貌进行了表... 详细信息

在37℃时,配制了与人体血液等钙磷比的模拟体液（SBF）,在不同pH值下合成了含钙磷酸盐。通过X射线电子衍射（XRD）、傅立叶红外吸收光谱（FTIR）、扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）对磷酸盐的物相组成、微观形貌进行了表征。结果表明,pH=5.9时,能生成晶型较完好的磷酸氢钙（DCPD）、磷酸八钙（OCP）和羟磷灰石（HA）的混合物,其中DCPD片状晶体长约10μm,宽约3μm;OCP片状晶体长约200 nm,宽50~100 nm;HA棒状晶体长约200 nm,宽约10 nm,HA柱状晶体长40~50 nm,宽约20 nm。pH=5.9~6.4时,HA晶体的长径比随pH值增加而增大,晶体沿c轴生长。pH〉6.4时,产物为HA,且其长径比随pH值的增加而减小。pH=5.9~8.9时,HA的结晶度随pH值增加而降低。实验时空气中的CO2溶入矿化液,形成的CO2-3能进入HA晶格,形成与生物成因成分特征相符的碳羟磷灰石。

关键词：模拟体液羟磷灰石磷酸八钙磷酸氢钙 pH值

利多卡因固体脂质纳米粒对人神经细胞的毒性作用

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中华麻醉学杂志 2015年第9期35卷 1047-1049页

作者：冷福建乐林莉文刚万梦娇徐恒余凌湖北省妇幼保健院麻醉科武汉市430070

目的探讨利多卡因固体脂质纳米粒对人神经细胞的毒性作用.方法采用高压匀质法制备利多卡因固体脂质纳米粒.离体培养入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,计数并调整细胞密度为5×105个/ml,以每孔100μl接种于96孔板.采用随机数字表法,将细胞分... 详细信息

目的探讨利多卡因固体脂质纳米粒对人神经细胞的毒性作用.方法采用高压匀质法制备利多卡因固体脂质纳米粒.离体培养入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,计数并调整细胞密度为5×105个/ml,以每孔100μl接种于96孔板.采用随机数字表法,将细胞分为10组（n=30）,对照组（C组）：常规培养;不同浓度利多卡因组（L1-4组）：利多卡因终浓度依次为1.000％、0.500％、0.250％、0.125％;不同浓度利多卡因固体脂质纳米粒组（L-SLN1-4组）：利多卡因终浓度依次为1.000％、0.500％、0.250％、0.125％;空白固体脂质纳米粒组（SLN组）.于细胞孵育前（C组于相应时点）、培养或孵育1、12和24 h（T0-3）时分别随机取6孔,采用MTT法检测细胞存活率;于T3时光学显微镜下观察细胞形态.结果与T0时比较,L1-4组和L-SLN12组孵育各时点、L-SLN3组T2.3时、L-SLN4组T3时细胞存活率降低（P＜0.05）,SLN组和C组细胞存活率差异无统计学意义（P＞0.05）.与T1时比较,L1-4组和L-SLN1-3组T2.3时、L-SLN4组T3时细胞存活率降低（P＜0.05）;与T2时比较,L1-4组和L-SLN1-4组T3时细胞存活率降低（P＜0.05）.与C组比较,L1-4组和L-SLN12组各时点、L-SLN3组T2.3时、L-SLN4组T3时细胞存活率降低（P＜0.05）,SLN组细胞存活率差异无统计学意义（P＞0.05）.与相应利多卡因浓度的L-SLN14组比较,L1-4组各时点细胞存活率降低（P＜0.05）.L-SLN1-4组细胞形态改变较L1-4组明显减轻.结论利多卡因固体脂质纳米粒对人神经细胞具有毒性作用,但该作用弱于利多卡因溶液.

关键词：纳米囊利多卡因药物毒性

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武汉出新规严管“绿色忽悠” 003

湖北日报

作者：邹汉青万梦娇

本报讯（记者邹汉青、实习生万梦娇）在待开发楼盘的空地上预先建成大片临时性花园绿地，并用于楼盘宣传，诱使购房者“上钩”后又随意变更用途。　　昨日，市政府常务会审议并原则通过的《武汉市城市绿线管理办法》，向开发商忽悠购...

本报讯（记者邹汉青、实习生万梦娇）在待开发楼盘的空地上预先建成大片临时性花园绿地，并用于楼盘宣传，诱使购房者“上钩”后又随意变更用途。　　昨日，市政府常务会审议并原则通过的《武汉市城市绿线管理办法》，向开发商忽悠购房者的这一惯用套路说“不”。

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江城ETC迈出重要步伐 003

湖北日报

作者：严运涛万梦娇

本报讯（记者严运涛、实习生万梦娇）取消年票，按次收费。酝酿已久的武汉路桥收费改革迈出重要一步。记者昨获悉，来自山东和北京的两家公司中标武汉ETC的系统集成项目。　　根据武汉建设网4月1日的公示，山东中创软件股份有限公司...

本报讯（记者严运涛、实习生万梦娇）取消年票，按次收费。酝酿已久的武汉路桥收费改革迈出重要一步。记者昨获悉，来自山东和北京的两家公司中标武汉ETC的系统集成项目。　　根据武汉建设网4月1日的公示，山东中创软件股份有限公司和北京瑞华赢科技发展有限公司在半年?

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76例1岁以下小儿的围术期死亡病例分析

中国现代医生 2015年第29期53卷 66-69页

作者：孔微微万梦娇李军温州医科大学附属第二医院麻醉科浙江温州325027

目的分析1岁以下小儿围术期死亡病例的临床特点，探讨减少围术期死亡率的措施。方法选择2011年1月～2013年12月温州医科大学附属第二医院1岁以下小儿术后死亡病例（76例）的临床资料，采用描述性流行病学方法对患者的年龄、出生体重、... 详细信息

目的分析1岁以下小儿围术期死亡病例的临床特点，探讨减少围术期死亡率的措施。方法选择2011年1月～2013年12月温州医科大学附属第二医院1岁以下小儿术后死亡病例（76例）的临床资料，采用描述性流行病学方法对患者的年龄、出生体重、术前并发症、ASA（American society of anesthesiologists）分级、最终诊断，死亡时间、死亡原因进行回顾性分析。结果76例术后死亡病例中新生儿占63．2％，其出生体重为（2．18±0．85）kg。86．8％的患儿术前有合并症；麻醉ASA分级Ⅲ、Ⅳ级分别占32．9％及40．8％。73．7％患儿在术后3d内死亡，其中MODS（multiple organ dysfunction syndrome）、心力衰竭、ARDS（acute respiratory distress syndrome）是术后死亡的主要原因，占死亡例数的69．2％。结论小儿围术期死亡的危险因素是月龄、极低出生体重、术前合并疾病及高麻醉ASA分级。做好孕期保健和胎儿监测工作，加强术后抗感染、呼吸机支持治疗及对症治疗是减少1岁以内小儿围术期死亡率主要措施。

关键词：新生儿婴儿风险因素死亡原因围手术期

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葛根总黄酮自微乳的制备工艺及体外释放研究

时珍国医国药 2022年第11期33卷 2658-2661页

作者：吕志阳陈静陈璟宋文沁万梦娇顾雪梅杨雨微南京中医药大学翰林学院江苏泰州225300

目的优化葛根总黄酮自微乳的制备工艺,并进行体外释放度评价。方法测定葛根总黄酮在乳化剂、助乳化剂和油相中的饱和溶解度进行辅料初步筛选,伪三元相图筛选油相质量分数和Km的范围,以油相质量分数(A)、乳化剂/助乳化剂的质量比Km(B)... 详细信息

目的优化葛根总黄酮自微乳的制备工艺,并进行体外释放度评价。方法测定葛根总黄酮在乳化剂、助乳化剂和油相中的饱和溶解度进行辅料初步筛选,伪三元相图筛选油相质量分数和Km的范围,以油相质量分数(A)、乳化剂/助乳化剂的质量比Km(B)为响应因子,以粒径和载药量为考察指标,采用星点设计-响应面法确定最佳处方工艺,透析袋法测定葛根总黄酮自微乳的释放情况。结果筛选得PEG40氢化蓖麻油为乳化剂、二乙二醇单乙基醚为助乳化剂、油酸聚乙二醇甘油酯为油相,油相质量分数为22%,Km为1.5,制得葛根总黄酮自微乳平均粒径(11.88±0.25)nm, PDI为0.044,载药量(78.74±0.36)mg/g, 4h葛根素体外累积释放率达90.2%。结论葛根总黄酮自微乳粒径小,载药量高,外观良好,性质稳定,显著提高主要成分中葛根素的体外溶出度,有望提高其口服生物利用度。

关键词：葛根总黄酮自微乳伪三元相图星点设计-效应面法释放度

1岁以下小儿围术期早期死亡风险因素流行病学调查

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温州医科大学学报 2016年第1期46卷 44-47页

作者：孔微微王孝庆王中苏万梦娇解康杰谢作楷上官王宁连庆泉李军温州医科大学附属第二医院麻醉科浙江温州325027 浙江省肿瘤医院麻醉科浙江杭州310022

目的:研究1岁以下小儿围术期早期(≤3 d)死亡相关风险因素的临床流行病学特征。方法:遴选2011年至2013年温州医科大学附属第二医院76例新生儿及婴儿手术后死亡病例的临床资料,对其性别、出生孕周、年龄、出生体质量、术前体质量、术前... 详细信息

目的:研究1岁以下小儿围术期早期(≤3 d)死亡相关风险因素的临床流行病学特征。方法:遴选2011年至2013年温州医科大学附属第二医院76例新生儿及婴儿手术后死亡病例的临床资料,对其性别、出生孕周、年龄、出生体质量、术前体质量、术前是否存在合并症(心血管、呼吸、血液、肝肾等疾病)、术前意识状态、电解质紊乱情况、营养情况、美国麻醉医师协会(ASA)分级、手术部位、手术类型、手术持续时间、手术分级共15项可能的风险因素进行回顾性分析及统计学处理。结果:对新生儿及婴儿的出生体质量、术前合并呼吸系统疾病、ASA分级、意识状态与死亡时间行spearman秩相关分析,结果P值均小于0.05。以上4种风险因素经logistic逐步回归分析,只有术前合并呼吸系统疾病及麻醉ASA分级2个风险因素保留。受试者工作特征曲线(ROC)分析显示,与新生儿及婴儿围术期早期(≤3 d)死亡时间高度相关的风险因素是术前合并呼吸系统疾病(ROC曲线下面积为0.643)和麻醉ASA分级(ROC曲线下面积为0.694)。结论:术前合并呼吸系统疾病和麻醉ASA分级是新生儿及婴儿围术期早期死亡的有效预测因子,且ASA分级相对预测作用更强。

关键词：新生儿婴儿围术期死亡风险因素

C6TSEDRVAJZ小分子化合物组合诱导人胎盘成纤维细胞分化为上皮样细胞

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南方医科大学学报 2025年

作者：代振佳高群伟应梦娇王澳洪娟王春景郭俣刘长青刘高峰蚌埠医科大学生命科学学院蚌埠医科大学安徽省神经再生技术与医用新材料工程研究中心蚌埠医科大学检验医学院

目的利用小分子化合物组合将人胎盘成纤维细胞（HPFs）重编程为化学诱导上皮样细胞（ciEP-Ls）。方法常氧条件下培养HPFs细胞，通过免疫荧光、PCR和染色体核型分析鉴定HPFs。生理性低氧条件下（37℃，5%O2）,HPFs在含有小分子化合物C6... 详细信息

目的利用小分子化合物组合将人胎盘成纤维细胞（HPFs）重编程为化学诱导上皮样细胞（ciEP-Ls）。方法常氧条件下培养HPFs细胞，通过免疫荧光、PCR和染色体核型分析鉴定HPFs。生理性低氧条件下（37℃，5%O2）,HPFs在含有小分子化合物C6TSEDRVAJZ（CHIR99021、616452、TTNPB、SAG、EPZ5676、DZNep、Ruxolitinib、VTP50469、Afuresertib、JNK-IN-8、EZM0414）的培养基中进行诱导，诱导期间每日定时观察细胞形态。通过免疫荧光法、Western blotting和PCR技术检测上皮细胞标志物的表达水平。对诱导细胞进行染色体核型分析，并计算诱导效率。结果 HPFs免疫荧光结果显示，表达成纤维表面标记物CD34和Vimentin，不表达上皮表面标志物；PCR结果显示，成纤维特异性基因S100A4、COL1A1高表达，且具有人正常二倍体核型。在低氧条件下诱导1 d后，部分HPFs细胞形态发生改变，由多突的纺锤形变成圆形或多边形，具有ciEP-Ls形态特征。诱导处理完成第4天，免疫荧光和Western blotting结果显示，诱导细胞能够高表达上皮细胞特征性标志物E-Cadherin和Lin28A。PCR结果表明，细胞显著表达上皮标志物Smad3,GLi3,PAX8,WT1,KRT19和KRT18，而成纤维细胞表面标记物表达均下调，且诱导细胞具有人正常二倍体核型，HPFs重编程效率为（64.53±2.80～68.10±3.60）%。结论小分子组合C6TSEDRVAJZ在低氧条件下成功将HPFs诱导为ciEP-Ls，且具有较高的诱导效率。

关键词：化学重编程小分子诱导成纤维细胞上皮样细胞