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我国出口羽绒及其制品微生物检测现状分析及对策

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纺织导报 2011年第10期 145-146页

作者：万旺军浙江省检验检疫科学技术研究院萧山分院

我国是世界上最大的羽绒及其制品生产国和出口国,羽绒及其制品产量占世界市场近70%的份额,贸易额占世界总贸易额的40%左右。近年来,随着公共卫生领域各种人畜共患病的出现以及消费者对产品质量要求的不断提高,更加关注涉及卫生安全的检... 详细信息

我国是世界上最大的羽绒及其制品生产国和出口国,羽绒及其制品产量占世界市场近70%的份额,贸易额占世界总贸易额的40%左右。近年来,随着公共卫生领域各种人畜共患病的出现以及消费者对产品质量要求的不断提高,更加关注涉及卫生安全的检测项目。

关键词：微生物检测出口国制品羽绒产品质量要求人畜共患病公共卫生卫生安全

IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因在真核细胞中的表达及应用实验研究

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IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因在真核细胞中的表达及应用实验研究

作者：万旺军浙江大学

学位级别：硕士

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)主要侵害雏鸡中枢免疫器官法氏囊,导致以免疫抑制为主的淋巴细胞衰竭综合症,造成对多种病原的易感性增加和其他疫苗的免疫失败。传统IBD人工免疫主要是弱毒苗和灭活苗免疫,但... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)主要侵害雏鸡中枢免疫器官法氏囊,导致以免疫抑制为主的淋巴细胞衰竭综合症,造成对多种病原的易感性增加和其他疫苗的免疫失败。传统IBD人工免疫主要是弱毒苗和灭活苗免疫,但自80年代以来出现的IBDV变异株和超强毒株给该病的防治带来了困难。DNA疫苗因能诱导机体产生全面的免疫应答而成为疫苗学研究领域的焦点,但由于其诱导产生的免疫应答的效果还不够理想,因此如何增强其免疫效果成为目前DNA疫苗研究的关键问题。本研究小组在前期工作中已证实了IBDV多聚蛋白(VP2/4/3)DNA疫苗具有良好的免疫原性,可诱发机体产生满意的免疫保护效果,而且ChIL-2(Chicken Interleukin 2)能够增强IBDV DNA疫苗免疫效果。在此基础上,本研究通过基因融合技术构建了IBDVVP2/4/3和ChIL-2的融合基因真核表达质粒,利用ChIL-2的分子免疫佐剂效应来增强IBDV DNA疫苗的免疫效果。由于目前对质粒DNA在真核细胞中的表达及影响其表达产物分泌的因素还不甚清楚,因而不能对融合基因表达质粒中基因连接位置进行优化,本研究将ChIL-2分别置于IBDV VP2/4/3的N端及C端,进行了两种方式的基因融合。应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension),分别经三次PCR获得融合基因片段VP2/4/3-IL-2、IL-2-VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得含有IBDV VP2/4/3和ChIL-2融合基因的真核表达载体pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3,从而使IBDVVP2/4/3与ChIL-2基因能够在同一细胞内得到表达,以避免两种质粒共同免疫时可能存在的细胞摄取不成比例,从而高效地发挥ChIL-2的分子免疫佐剂作用。同时在扩增VP2/4/3-IL-2和IL-2-VP2/4/3融合基因时,引物中设计了包含编码15个低疏水性及低电荷效应的氨基酸序列(GS)作为接头,甘氨酸结构简单,易于折叠,对融合蛋白的空间构象影响小,并保持其天然生物学活性。在脂质体介导下,将融合基因真核表达质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3分别转染Vero细胞进行表达。RT-PCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;FITC标记的山羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验(IPA)可检测到特异性的黄绿色荧光。通过SDS-PAGE检测转染72h后的细胞裂解液,pCI-IL-2-VP2/4/3的表达产物在60KD、56KD以及30KD处均可检测到特异性条带,pCI-VP2/4/3-IL-2的表达产物在48KD、44KD和42KD处也可检测到特异性的条带,但均未见与VP4蛋白分子量大小相对应的条带。而后相同的样品进行Western-blot鉴定,以免源IBDV抗血清为一抗,pCI-IL-2-VP2/4/3

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 多聚蛋白(VP2/4/3) 鸡白细胞介素2(ChIL-2) 融合基因真核表达 DNA疫苗免疫原性

基于可见/近红外光谱的鹅鸭混合绒定量检测研究

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光谱学与光谱分析 2012年第4期32卷 974-977页

作者：徐惠荣宋保国万旺军周莹应义斌浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310058 浙江出入境检验检疫局国家级羽毛绒检测重点实验室浙江杭州311208

鹅绒和鸭绒的外观相似但在品质上鹅绒优于鸭绒,各国羽绒毛标准对鹅绒毛中的鸭绒毛含量都有最高限定。传统检测方法为高倍显微镜目测法,该方法劳动强度大,且不适宜大批量样本的分析及现场快速检测。利用可见/近红外光谱结合连续投影算法(... 详细信息

鹅绒和鸭绒的外观相似但在品质上鹅绒优于鸭绒,各国羽绒毛标准对鹅绒毛中的鸭绒毛含量都有最高限定。传统检测方法为高倍显微镜目测法,该方法劳动强度大,且不适宜大批量样本的分析及现场快速检测。利用可见/近红外光谱结合连续投影算法(SPA)特征波长选择的建模方法对鹅绒中混有鸭绒含量进行了定量检测。在450～930nm范围内,通过SPA选择的8个特征波长建立多元线性回归模型,取得了较好的预测结果,相关系数为0.983,校正均方根误差(RMSEC)为5.44%,预测均方根误差(RMSEP)为5.75%,有望用于羽绒毛品质的快速检测。

关键词：羽绒品质定量分析可见/近红外光谱连续投影算法波长选择

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羽绒中水分测定结果不确定度的评定

毛纺科技 2011年第10期39卷 56-58页

作者：万旺军谭蒙浙江省检验检疫科学技术研究院萧山分院国家级羽毛绒检测重点实验室浙江杭州311208

依据EN 1661—2001《羽毛羽绒检验方法水分含量测定》对羽绒中水分含量的测量不确定度进行了分析和评定,建立了烘干法测定羽绒水分的数学模型,并量化不确定度分量,求出合成不确定度和扩展不确定度。结果表明,烘干法测定羽绒中水分含量,... 详细信息

依据EN 1661—2001《羽毛羽绒检验方法水分含量测定》对羽绒中水分含量的测量不确定度进行了分析和评定,建立了烘干法测定羽绒水分的数学模型,并量化不确定度分量,求出合成不确定度和扩展不确定度。结果表明,烘干法测定羽绒中水分含量,其不确定度主要来源于重复测定,其次是仪器的准确性引入的测量不确定度。

关键词：羽绒水分检测不确定度

IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2005年第3期31卷 255-262页

作者：万旺军谢荣辉李龙许健于涟浙江大学生物医学工程系浙江杭州310027 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310009 浙江大学动物预防医学研究所浙江省重点实验室浙江杭州310029

构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础.

关键词：传染性法氏囊病病毒多聚蛋白鸡白细胞介素2 融合基因真核表达

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鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达

西安交通大学学报（医学版） 2004年第4期25卷 339-342页

作者：许健樊拥军李龙万旺军李建荣于涟浙江大学生物医学工程系浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕... 详细信息

目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果　SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论　表明重组鸡IL

关键词：鸡IL-2 pPIC9 毕赤酵母免疫增强剂

OMgp LRR181-228:OMgp神经突起生长抑制功能的主要结构域

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细胞生物学杂志 2004年第5期26卷 533-538页

作者：樊拥军许健李龙张朝政万旺军于涟浙江大学生物医学工程与仪器科学学院浙江大学动物科学学院预防兽医研究所杭州310029

OMgp(oligodendrocyte-myelinglycoprotein)可以通过与MAG、nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而诱使生长锥溃变和抑制神经突起的生长。以前的研究表明,在OMgp与NgR结合抑制神经突起生长的过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列(... 详细信息

OMgp(oligodendrocyte-myelinglycoprotein)可以通过与MAG、nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而诱使生长锥溃变和抑制神经突起的生长。以前的研究表明,在OMgp与NgR结合抑制神经突起生长的过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列(LRR)是必需的。为进一步了解OMgpLRR在神经突起生长中的作用及其结构与功能之间的关系,采用PCR-定点突变法对OMgpLRR结构域分段删除,表达了删除不同基因片段后的OMgpLRR蛋白,通过对表达有NgR的CHO细胞(NgR-CHO)的黏附实验和对原代培养神经细胞的抑制实验对其功能进行了研究。结果显示,分别删除了OMgp25-56、57-133、134-180位氨基酸的OMgpLRR蛋白仍具有结合NgR-CHO和抑制原代培养的神经元突起生长的作用;而删除了第181-228位氨基酸的OMgpLRR蛋白则失去了对原代培养神经元的生长抑制作用,但仍然具有结合NgR的能力。表明OMgp181-228在OMgp的功能中具有重要的意义。删除了第181-228位氨基酸的OMgpLRR蛋白可望作为OMgp的竞争性抑制剂,用于中枢神经系统损伤后神经再生的治疗。

关键词：糖蛋白 OMgp 神经突起生长基因原核表达神经再生

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危险货物包装检测关键点分析与质量控制

包装工程 2016年第13期37卷 81-85页

作者：万旺军高翔陈文王琛浙江出入境检验检疫局国家危险化学品检测重点实验室杭州311208 常州出入境检验检疫局常州213022

目的控制危险货物包装检测关键点来保证性能检验质量。方法根据危险货物包装种类并结合其性能检验过程中的难点,逐一对其6项常规性能测试指标进行分析。结果归纳和提炼了危险货物包装检测的关键点并在实际检测工作中加以应用。结论对于... 详细信息

目的控制危险货物包装检测关键点来保证性能检验质量。方法根据危险货物包装种类并结合其性能检验过程中的难点,逐一对其6项常规性能测试指标进行分析。结果归纳和提炼了危险货物包装检测的关键点并在实际检测工作中加以应用。结论对于危险货物包装检验鉴定机构以及生产企业做好产品质量检验具有较强的现实指导意义。

关键词：危险货物包装检测关键控制点

顶空-气相色谱-质谱法检测易燃液体及其分类

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色谱 2019年第10期37卷 1129-1133页

作者：何坚刚万旺军吴刚王琛诸静袁从慧浙江省检验检疫科学技术研究院

建立了一种利用顶空-气相色谱-质谱进行易燃液体的检测和分类的有效方法。以凹版油墨为模型样品体系,利用顶空-气相色谱-质谱鉴定了样品中的易挥发组分。考察了平衡温度、平衡时间和组分含量等特性参数。利用外标法测定了组分含量,结果... 详细信息

建立了一种利用顶空-气相色谱-质谱进行易燃液体的检测和分类的有效方法。以凹版油墨为模型样品体系,利用顶空-气相色谱-质谱鉴定了样品中的易挥发组分。考察了平衡温度、平衡时间和组分含量等特性参数。利用外标法测定了组分含量,结果显示该方法的相对标准偏差为0.88%~2.88%,加标回收率为92.8%~103.1%。采用该方法对多种实际样品进行了定性和定量分析,并用混合溶剂闪点预测模型计算了样品的闪点,与闪点实测值进行了比较。结果表明,该方法可用于易燃液体实际样品闪点的预测,实现化学品的分类,闪点预测值与实测值最大偏差仅为3.2℃。该方法为易燃液体实际样品的分类提供了一种新颖、高效和便捷的技术。

关键词：顶空-气相色谱-质谱闪点分类易燃液体