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利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

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复旦学报（医学版） 2001年第4期28卷 334-336,339页

作者：韩力薇覃文新王晨万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤... 详细信息

目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组 ;③HC3898全长cDNA转染SMMC 772 1细胞能显著抑制集落的形成 ;④注射转染HC3898基因的SMMC 772 1细胞组平均瘤重小于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组的瘤重 ,抑瘤率为 5 0 % ;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体 ,瘤块的组织DNA经 1.5 %琼脂糖电泳分析 ,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论　HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因 ,转染SMMC 772 1肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法。

关键词：集落形成成瘤凋亡新基因 HCC 肿瘤

对七例原发性肝细胞癌及其部旁组织及血清中HBVX基因产物...

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中华医学杂志 1989年第12期69卷 701-703页

作者：连兆瑞万大方

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第五讲消化道癌的分子生物学

中华消化杂志 1994年第5期14卷 292-294页

作者：万大方顾健人上海市肿瘤研究所

消化道癌的分子生物学万大方，顾健人人体肿瘤是由多病因参与并经历多阶段的发病和演进的过程。分子生物学的发展从分子水平揭示了肿瘤病因的作用机制。肿瘤的本质是一种分子病，是某些癌基因和抗癌基因异常改变的结果。一、癌基因与抗... 详细信息

消化道癌的分子生物学万大方，顾健人人体肿瘤是由多病因参与并经历多阶段的发病和演进的过程。分子生物学的发展从分子水平揭示了肿瘤病因的作用机制。肿瘤的本质是一种分子病，是某些癌基因和抗癌基因异常改变的结果。一、癌基因与抗癌基因的基本概念细胞内有二大类调控...

关键词：消化道癌顾健人调控细胞分裂调节控制癌基因人肝癌肝癌细胞分子生物学

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噬菌体DNA的快速抽提

生物化学与生物物理进展 1998年第2期25卷 186-187页

作者：覃文新万大方赵新泰蒋惠秋顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室

介绍一种噬菌体ＤＮＡ的快速抽提方法．用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒，然后经ＤＥＡＥ纤维素纯化处理和酚抽提．与传统的噬菌体ＤＮＡ纯化方法相比，改进后的方法方便、快速、经济，可获得高纯度的噬菌体ＤＮＡ．

关键词：噬菌体 DNA 抽提聚乙二醇

人新基因ASB-8 SOCS盒缺失突变体抑制肺癌细胞生长

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第6期35卷 548-553页

作者：刘永忠李锦军张锋锐沈雁姚明万大方顾健人上海200233 中国科学院上海生物工程研究中心上海交通大学肿瘤研究所、癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032 上海交通大学肿瘤研究所、癌基因及相关基因国家重点实验室

ASB 8是新近发现的含锚蛋白重复序列和细胞因子信号抑制物盒蛋白质家族新成员 (humanankyrinre peatandSOCSboxcontainingproteinfamily ,ASBfamily)。研究观察了人ASB 8在肺癌中的表达及对肿瘤细胞生长的影响。利用制备的ASB 8多克隆... 详细信息

ASB 8是新近发现的含锚蛋白重复序列和细胞因子信号抑制物盒蛋白质家族新成员 (humanankyrinre peatandSOCSboxcontainingproteinfamily ,ASBfamily)。研究观察了人ASB 8在肺癌中的表达及对肿瘤细胞生长的影响。利用制备的ASB 8多克隆抗体和免疫组化技术 ,分析了人ASB 8在肺癌组织中的表达 ;构建ASB 8及其SOCS盒缺失突变体 (ASB 8ΔSB)的真核表达载体 ,转染至人肺腺癌细胞系SPC A1中并检测外源基因的表达 ;通过体外细胞生长曲线、裸鼠体内成瘤试验 ,观察ASB 8及其缺失突变体对SPC A1细胞生长的影响。免疫组化结果表明 :ASB 8蛋白在肺癌组织中高表达 ,阳性率为 96 .8% (30 / 31) ,而在癌旁肺和正常肺组织低表达或不表达 ,弱阳性率仅为 2 5 .8% (8/ 31) ;转染ASB 8ΔSB的SPC A1肺癌细胞的增殖速度显著慢于对照组细胞 (P <0 .0 1) ,而转染ASB 8的肺癌细胞没有明显的生长特性改变 ;ASB 8SOCS盒缺失突变体对SPC A1的体内生长及肿瘤形成有一定的抑制作用 (P <0 .0 1)。ASB 8基因可能是一种与人肺癌发生发展相关的新基因。

关键词： ASB-8基因锚蛋白重复序列 SOCS盒肺癌

YAC修饰和原生质体融合法转移进哺乳动物细胞

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 99-101页

作者：任功一赵新泰万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室

应用ＤＮＡ同源重组的方法对酵母人工染色体（ＹＡＣ）进行修饰，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ等方法证实ｎｅｏ基因整合于ＹＡＣ上。通过ＰＥＧ介导的原生质体融合法将一个３３０ｋｂ的ＹＡＣ导入Ｌ９２９细胞，得到Ｇ４１８抗性克隆。

关键词： YAC转移 YAC修饰原生质体融合

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四环素调控基因表达系统的研究新进展

肿瘤 2003年第6期23卷 522-524页

作者：谢丽覃文新万大方上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

基因的表达调控特别是转录水平的调控，是一个非常复杂的过程，涉及到多个因素的相互作用，尤其是反式作用因子，体外对这些因子的调控研究时，往往由于它们对细胞的损害而得不到满意的结果。四环素（tetracycline，Tet）调控的基因表... 详细信息

基因的表达调控特别是转录水平的调控，是一个非常复杂的过程，涉及到多个因素的相互作用，尤其是反式作用因子，体外对这些因子的调控研究时，往往由于它们对细胞的损害而得不到满意的结果。四环素（tetracycline，Tet）调控的基因表达系统是近年来发展的一种真核生物体外表达系统，它利用四环素及其衍生物对所感兴趣的基因进行诱导表达，这种诱导表达具有严密、高效、可控性强、表达泄露小等优点，已被广泛应用于各种细胞系、植物、酵母、线虫、小鼠、大鼠及人的细胞。

关键词：四环素调控基因表达系统研究进展肿瘤

正常肝与肝癌细胞表达差异的cDNA克隆的研究

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中华医学杂志 1995年第10期75卷 606-608页

作者：万大方张学理周筏梅顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室

采用信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）差异显示技术（ｍＲＮＡＤｉｆｆｒｅｎｔｉａｌＤｉｓｐｌａｙｍＲＮＡＤＤ），寻找人正常肝与肝癌细胞表达差异的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆。人正常肝组织及人肝癌细胞株（Ｈｅｐ３Ｂ）ｍＲＮＡ... 详细信息

采用信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）差异显示技术（ｍＲＮＡＤｉｆｆｒｅｎｔｉａｌＤｉｓｐｌａｙｍＲＮＡＤＤ），寻找人正常肝与肝癌细胞表达差异的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆。人正常肝组织及人肝癌细胞株（Ｈｅｐ３Ｂ）ｍＲＮＡ用３＇端二个引物分别与五种不同５＇端引物进行逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），以３５Ｓ－α（ｄＡＴＰ）参入产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及放射自显影。获得一批表达差异的ｃＤＮＡ克隆。选择其中３１个克隆进行部分ＤＮＡ序列分析，除一个为已知序列外其余３０个克隆为ＧｅｎｅＢａｎｋ中无匹配序列。经斑点杂交证明二个克隆在肝癌中高表达，一个克隆在正常肝中高表达。目前正在对有意义的克隆做进一步论证。

关键词：肝肿瘤信使核糖核酸 mRNA

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高效PCR产物T-A克隆法及影响因素分析

肿瘤 2000年第4期20卷 293-294页

作者：孙奋勇万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032