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利用肠道菌表达dsEcR和dsMet防治蚊虫的研究

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利用肠道菌表达dsEcR和dsMet防治蚊虫的研究

作者：丁金金华东师范大学

学位级别：硕士

蚊是双翅目的一种吸血昆虫,能够传播疟原虫、登革病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒等多种病原体,这些蚊媒传染病在全世界范围内造成众多病患死亡,对公共卫生安全和经济发展也带了巨大的负担。人类与蚊虫的斗争历史已经延续了数千年,但是都... 详细信息

蚊是双翅目的一种吸血昆虫,能够传播疟原虫、登革病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒等多种病原体,这些蚊媒传染病在全世界范围内造成众多病患死亡,对公共卫生安全和经济发展也带了巨大的负担。人类与蚊虫的斗争历史已经延续了数千年,但是都没能找到有效遏制疾病传播的方法。近代以来,化学杀虫剂如双对氯苯基三氯乙烷(双对氯苯基三氯乙烷,DDT)的研发带来了消灭蚊虫的希望。但是随着化学杀虫剂的广泛使用,蚊虫的抗药性与日俱增,并且化学试剂对生态环境造成了严重的破坏。因此,亟需开发环境友好型的防治新技术。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种转录后水平抑制基因表达的方法,其操作简单,对靶基因作用的特异性强,一经发现就得到了快速发展。因此,由生物大分子双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)所介导的RNAi被作为一种防治蚊虫或控制疾病的新策略。已有研究将几丁质酶、ATP酶等相关基因作为RNAi的靶基因,使用大肠杆菌、酵母、微藻等微生物来生产dsRNA,虽取得了良好的作用效果,但是这些微生物无法在宿主体内长期生存定植,大大限制了效果的持续性,提高了防治成本。本研究以蜕皮激素受体(Ecdysone receptor,Ec R)和Methoprene-tolerant(Met)作为靶基因,利用RNAi技术对斯氏按蚊(Anopheles stephensi)的幼虫进行生长发育干扰,并通过分离筛选获得了斯氏按蚊肠道中的一种共生菌——Serratia fonticola,对其进行遗传改造使之高效产生并积累dsRNA,进而定植到蚊虫肠道中发挥RNAi作用。研究成果如下:1.dsMet或dsEcR影响斯氏按蚊生长发育作为保幼激素(juvenile hormone,JH)和蜕皮激素(ecdysone,20E)的关键受体基因,Ec R和Met基因在昆虫的不同发育阶段发挥着重要的作用,其表达受阻使得JH和20E的作用失调可能导致个体生长迟缓,蜕皮或化蛹失败,甚至死亡。本研究针对Ec R和Met基因CDS区特定片段进行dsRNA的设计,首先通过显微注射在成虫中检测其作用效率,通过荧光定量分析dsRNA可有效降低靶标基因的转录水平。之后通过浸泡法将dsRNA作用于幼虫,一方面观察拍摄幼虫的形体发育进程,发现幼虫的生长发育异常迟缓,化蛹时间延迟且化蛹困难;另一方面对幼虫的存活率进行记录,与ds GFP处理幼虫相比,dsMet或dsEcR处理幼虫的存活率大大降低。2.工程菌影响斯氏按蚊生长发育对斯氏按蚊的肠道共生菌进行分离培养和鉴定,选择了一种能够在蚊的种群中水平或垂直传播的沙雷氏菌,对其进行RNaseⅢ敲除处理成为能够表达并积累dsRNA的适宜载体。此外,对表达dsRNA的质粒进行启动子改造,从诱导型表达的T7启动子更换为组成型表达的T5启动子,转入菌体后不需人为干扰即可进行dsRNA的表达。由此获得了能够自发表达dsRNA的工程菌。将工程菌以饲料的形式饲喂幼虫,使之在幼虫的肠道中定植并分泌dsRNA,对幼虫的生长状况和存活率等指标进行记录。幼虫在摄入工程菌后生长逐渐迟缓,体长维持在2龄或3龄的平均长度便不再增加,后期存活率急剧下降,少数存活的幼虫难以化蛹或蛹发育不良。这表明遗传改造的工程菌能够按照预期的设想对斯氏按蚊的生长发育起到显著的抑制作用。此外,在成蚊中进行工程菌的饲喂,对蚊的生存率及雌蚊的血餐、产卵等生殖相关指标进行记录,发现短期内工程菌对于蚊的正常存活没有影响,且雌蚊能够正常吸血并完成产卵等行为。综上所述,本研究利用RNAi技术,对斯氏按蚊发育通路的相关基因进行了干扰,在幼虫中实现了良好的致死效果,说明以Ec R和Met基因作为靶基因的有效性。并且本研究通过对斯氏按蚊肠道共生菌进行遗传改造,获得了能够在蚊虫肠道中定植持续表达dsRNA的新型工程菌,对于幼虫的生长发育起到了显著的抑制效果。本研究提供了一种肠道共生微生物介导的RNAi方法来抑制宿主蚊虫的基因表达,这为病媒传播疾病的控制和蚊虫防治提供了新的思路。

关键词：斯氏按蚊发育 dsRNA RNAi 肠道共生菌

小组工作介入“老漂族”社区融入实务研究——基于迁入地广州市H社区调查

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小组工作介入“老漂族”社区融入实务研究——基于迁入地广州市H...

作者：丁金金海南热带海洋学院

学位级别：硕士

改革开放以来我国的城市化进程加快,南北地区经济区域划分明显,更多的就业机会、薪资待遇、教育福利影响着一批青壮年“南漂”广州。“南漂”群体因忙碌的工作、高额的保姆费用、不够稳定的托儿机构等生活问题,将父母请来照顾第三代孙辈... 详细信息

改革开放以来我国的城市化进程加快,南北地区经济区域划分明显,更多的就业机会、薪资待遇、教育福利影响着一批青壮年“南漂”广州。“南漂”群体因忙碌的工作、高额的保姆费用、不够稳定的托儿机构等生活问题,将父母请来照顾第三代孙辈,或是因丧偶独居、思念儿女、身体健康等主客观因素,老年人自愿或者被迫从家乡来到城市社区,我们定义为“老漂族”。“老漂族”群体离开了长期居住的生活环境,迁入陌生的城市定居,因不懂当地语言、不了解当地风土习俗、不明白各项福利政策以及与同辈群体交流面较窄、思念家乡的其他亲人、在新社区产生的孤独感等问题,导致出现了的社区融入难的困境,这些问题同时也影响着社会的稳定与和谐。本研究运用问卷调查法、访谈法对H社区老漂族社区融入需求进行调查,在小组动力学、优势视角理论的支持下,作者有计划地设计开展“夕阳友初识”“甜蜜的困扰”“幸福一家亲”“乐活志愿行”“此心安处是吾乡”六次小组实务活动,并引导六名小组成员填写社交回避与社交苦恼(SAD)量表,通过前测后测分析此案例开展较为成功。提出对小组工作介入H社区老漂族融入的六方面建议,一是坚持群体需求导向,创设交流互动空间;二是挖掘老人优势潜力,合理配置专业社工;三是改善社区融入环境,提高融入适应能力;四是注重家庭系统作用,搭建社工介入桥梁;五是引导参与社区事务,树立志愿服务意识;六是加深服务优化力度,注入多方社会力量。“老漂族”群体的社区融入是一个长久性、动态性的过程,在今后的实务过程中可以逐步探索运用个案工作方法、小组工作方法、社区工作方法相结合的方式针对性解决融入难的痛点问题,发挥更具专业性的社会工作。

关键词：老漂族社区融入小组工作

海南民族社会工作介入落笔村传承黎族非物质文化

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三角洲 2022年第19期 132-134页

作者：丁金金海南热带海洋学院

中国是一个统一的多民族国家，其中少数民族黎族，历史久远。根据史料记载，黎族在海南的生存繁衍可以追溯到七千年至三千年前的新石器时代中晚期，经过几千年的文化积淀，形成了极珍贵的文化财富。在民族敏感视角下，通过个案、小组、...

中国是一个统一的多民族国家，其中少数民族黎族，历史久远。根据史料记载，黎族在海南的生存繁衍可以追溯到七千年至三千年前的新石器时代中晚期，经过几千年的文化积淀，形成了极珍贵的文化财富。在民族敏感视角下，通过个案、小组、社区的社会工作研究方法，开展海南民族社会工作，分析当前黎族文化传承所面临的困境，促进黎族的文化传承与发展，也为少数民族的文化传承与发展提供新路径。

关键词：

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金融科技对上市中小企业债务融资的影响研究

商场现代化 2023年第11期 168-170页

作者：宋华丁金金安徽大学经济学院

为研究金融科技对上市中小企业债务融资的影响,选取创业板上市中小企业2011—2020年数据,通过构建固定效应模型,利用多元回归分析方法得出以下结论:金融科技不仅可以直接降低上市中小企业债务融资难度,还可以通过提高企业内部控制质量... 详细信息

为研究金融科技对上市中小企业债务融资的影响,选取创业板上市中小企业2011—2020年数据,通过构建固定效应模型,利用多元回归分析方法得出以下结论:金融科技不仅可以直接降低上市中小企业债务融资难度,还可以通过提高企业内部控制质量间接发挥作用,但是人口老龄化因素对该机制起负向调节作用;在不同科技创新和金融创新的耦合度的地区,金融科技的作用效果也有所不同。

关键词：金融科技上市中小企业债务融资

早发型伴脑干和脊髓受累及乳酸升高的脑白质病1例

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中华实用儿科临床杂志 2022年第7期37卷 546-549页

作者：赵盼丁金金田培超王越樊彩芳麦子荆郑州大学第一附属医院儿科郑州450052

回顾性分析2020年6月于郑州大学第一附属医院确诊的1例婴儿期起病的伴脑干和脊髓受累及乳酸升高的脑白质病(LBSL)患儿的临床资料。患儿,女,1岁2个月,因"发育落后10个月,间断抽搐1个月"就诊;体格检查:四肢肌力Ⅲ级,肌张力稍高,双侧膝腱... 详细信息

回顾性分析2020年6月于郑州大学第一附属医院确诊的1例婴儿期起病的伴脑干和脊髓受累及乳酸升高的脑白质病(LBSL)患儿的临床资料。患儿,女,1岁2个月,因"发育落后10个月,间断抽搐1个月"就诊;体格检查:四肢肌力Ⅲ级,肌张力稍高,双侧膝腱反射活跃,双侧跟腱反射正常,双侧巴氏征阳性;头颅磁共振成像(MRI)示双侧大脑半球萎缩并弥漫性异常信号;全外显子基因检测结果显示患儿DARS2基因发现2处杂合变异。中国人群尚未见早发型LBSL基因变异患儿的报道,国外文献共检索到6篇相关病例报道,患儿均有精神运动发育障碍及其他脑病表现,均发现头部影像学受累及DARS2基因变异。因此,对发育落后、癫痫及头颅MRI示双侧大脑半球弥漫性异常信号的患儿,建议行基因检测明确诊断,指导产前诊断及遗传咨询。

关键词：脑白质病脑干和脊髓受累乳酸增高早发型 DARS2基因

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语文教学中信息技术的应用策略

作文 2022年第Z4期 78-79页

作者：丁金金河南省信阳市平桥区电化教育馆

随着新课改进程的日益深化，初中语文教学开始广泛应用信息技术，教育的细化推动着教育改革的逐步完善。语文学科教学中，文字讲述占主要部分，教师单方面讲解，学生处于被动学习状态，这导致课堂气氛较为压抑，部分学生无法紧跟教师的...

随着新课改进程的日益深化，初中语文教学开始广泛应用信息技术，教育的细化推动着教育改革的逐步完善。语文学科教学中，文字讲述占主要部分，教师单方面讲解，学生处于被动学习状态，这导致课堂气氛较为压抑，部分学生无法紧跟教师的教学进度。在社会信息技术飞速发展的今天，语文教学必须紧跟信息化时代的进程，将信息技术深入至初中语文教学内，进一步提升教学质量，构建良好的语文教学机制，使学生在多样化的学习环境中，通过视、听、实践结合的方式掌握教学内容。

关键词：

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语文教学中信息技术的应用策略

作文（高中版） 2022年第7期 78-79页

作者：丁金金河南省信阳市平桥区电化教育馆

随着新课改进程的日益深化,初中语文教学开始广泛应用信息技术,教育的细化推动着教育改革的逐步完善。语文学科教学中,文字讲述占主要部分,教师单方面讲解,学生处于被动学习状态,这导致课堂气氛较为压抑,部分学生无法紧跟教师的教学进... 详细信息

随着新课改进程的日益深化,初中语文教学开始广泛应用信息技术,教育的细化推动着教育改革的逐步完善。语文学科教学中,文字讲述占主要部分,教师单方面讲解,学生处于被动学习状态,这导致课堂气氛较为压抑,部分学生无法紧跟教师的教学进度。在社会信息技术飞速发展的今天,语文教学必须紧跟信息化时代的进程,将信息技术深入至初中语文教学内,进一步提升教学质量,构建良好的语文教学机制,使学生在多样化的学习环境中,通过视、听、实践结合的方式掌握教学内容。

关键词：初中语文教学被动学习状态提升教学质量语文学科教学信息技术课堂气氛教学内容教学进度

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发热感染相关性癫痫综合征3例

中华实用儿科临床杂志 2022年第2期37卷 137-139页

作者：丁金金赵盼王越史丹丹刘念麦子荆王怀立田培超郑州大学第一附属医院儿科郑州450052

目的探讨发热感染相关性癫痫综合征的临床特点及诊治方法。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2019年5月至6月收治的3例发热感染相关性癫痫综合征患儿的资料,结合相关文献总结其临床特点、诊治方法及预后特点。结果3例发热感染相关性... 详细信息

目的探讨发热感染相关性癫痫综合征的临床特点及诊治方法。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2019年5月至6月收治的3例发热感染相关性癫痫综合征患儿的资料,结合相关文献总结其临床特点、诊治方法及预后特点。结果3例发热感染相关性癫痫综合征患儿发病年龄为6~9岁,发热至首次抽搐时间间隔为4~7 d,于24 h内进展为癫痫持续状态,癫痫发作以多灶性发作为主,脑脊液实验室检查无异常,脑电图可见弥漫性慢波活动为背景、颞区为主的癫痫波发放,2例急性期头颅磁共振成像可见脑水肿征象。3例患儿均对多种(4~5种)抗癫痫药物耐药,接受大剂量麻醉药物治疗可有效终止癫痫持续状态。1年后随访,3例均演变为难治性癫痫,其中2例伴认知障碍,1例伴运动障碍。结论发热感染相关性癫痫综合征常见于既往体健的学龄期儿童,可由发热诱导,其癫痫发作呈爆发性、难治性,缺乏特异性实验室指标,大剂量麻醉药物可有效终止癫痫持续状态,大多预后不良。

关键词：癫痫持续状态难治性癫痫发热感染相关性癫痫综合征儿童

儿童髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病的临床特点分析

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儿童髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病的临床特点分析

作者：丁金金郑州大学

学位级别：硕士

背景髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrocytes glycoprotein,MOG）是一种表达于中枢神经系统少突胶质细胞膜表面的蛋白。MOG抗体最初被认为是多发性硬化（multiple sclerosis,MS）的特异性抗体,但随着研究进展,MOG抗体在其他... 详细信息

背景髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrocytes glycoprotein,MOG）是一种表达于中枢神经系统少突胶质细胞膜表面的蛋白。MOG抗体最初被认为是多发性硬化（multiple sclerosis,MS）的特异性抗体,但随着研究进展,MOG抗体在其他脱髓鞘疾病中被检测出来,包括急性播散性脑脊髓炎（acute disseminating encephalomyelitis,ADEM）、横贯性脊髓炎（transverse myelitis,TM）、视神经炎（optic neuritis,ON）、视神经脊髓炎谱系疾病（neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD）、临床孤立综合征（clinically isolated syndrome,CIS）、皮质脑炎等。由于MOG抗体阳性的脱髓鞘疾病似乎具有相似的临床特点,所以多数人建议称这类疾病为MOG抗体相关疾病（MOG antibody-associated disorders,MOGAD）。与成人相较,儿童MOGAD发病率更高,然而关于儿童MOGAD的研究相对较少。本研究旨在分析儿童MOGAD临床特点,以期加深临床医师对儿童MOGAD的认识,为以后的诊断、治疗提供参考依据。目的探讨儿童髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病的临床特点。方法1.病例资料:收集2017年8月至2020年8月郑州大学第一附属医院收治的26例MOGAD患儿的临床资料,回顾性分析、总结其临床特点。2.统计学方法:采用SPSS23.0统计学软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示,不符合正态分布的计量资料以中位数表示,计数资料以频数和率（%）表示。采用两独立样本Mann-Whitney U检验及多组独立样本Kruskal-Wallis检验进行计量资料的差异性分析,采用Fisher确切概率法进行计数资料的差异性分析,P＜0.05定义为差异有统计学意义。结果1.一般情况:26例MOGAD患儿,平均年龄为（7.5±3.46）岁,其中14例（54%）为男性,12例（46%）为女性,男女比例为1.17:1。有14例（54%）诊断为ADEM,6例（23%）诊断为ON,5例（19%）诊断为NMOSD,1例（4%）诊断为脊髓炎。ADEM中位年龄为5岁,非ADEM（ON、NMOSD、脊髓炎）中位年龄为8岁,两组之间年龄有显著差异（P=0.041）。2.临床表现:首发症状以脑病（39%）、视觉障碍（33%）最常见;在整个病程中以双侧视觉障碍（28%）、运动障碍（21%）常见,头痛呕吐（18%）、意识障碍（15%）次之,感觉障碍（5%）、面瘫（5%）较少见。3.脑脊液检查:急性期所有患儿脑脊液白细胞中位数为33（2-70）×106/L,单核细胞比例平均为（77.7±19.14）%,脑脊液总蛋白仅6例轻度增高,范围为（417-691）mg/L。ADEM、ON、NMOSD、脊髓炎四种临床表型间脑脊液细胞数、单核细胞比例及总蛋白均无显著差异（分别为P=0.151,P=0.064,P=0.468）。4.血清MOG抗体检测:所有患儿血清MOG抗体均阳性,抗体滴度范围为1:10-1:320。在7例复发患儿中,抗体滴度在1:100及以上的有4例（57%）,在19例单相病程的患儿中,抗体滴度在1:100及以上的有7例（42%）。5.MRI检查:26例MOGAD患儿,急性期行头+脊髓MRI检查共39次,颅脑受累有31次（79%）,脊髓受累有24次（62%）。颅脑以白质（62%）受累最常见,丘脑、基底节（46%）次之;脊髓MRI显示颈髓受累最常见（56%）,胸髓次之（41%）,腰髓少见（5%）,无脊髓圆锥受累。其中ADEM患儿行磁共振检查共23次,头颅MRI显示白质受累有20次（87%）,丘脑、基底节受累有17次（74%）,颅脑病变累及超过3个解剖部位的有16次（70%）,有14次（61%）颅脑病变呈边界模糊、大病灶（直径≥2cm）的特点。6.治疗:在26例患儿中,所有患儿在首次急性发作时均给予甲泼尼龙10-25mg/Kg/d冲击治疗3-5天,后改为泼尼松1-2mg/kg 口服,总疗程3-6个月,其中5例联合IVIG2g/Kg,治疗后所有患儿临床症状均缓解。26例患儿中有9例（73%）例呈单相病程,7例（27%）复发,2例在第3次脱髓鞘事件发作时给予吗替麦考酚酯治疗,至末次随访时其中1例再次复发,1例未再复发;1例在第3次脱髓鞘事件发作时给予他克莫司治疗,未再复发。7.预后:随访时间中位数为22（6-44）个月,首次临床发作时EDSS评分中位数为3.5（2-6）分,末次随访时EDSS评分中位数为0（0-2）分,两次评分有显著差异（P＜0.05）。21例（81%）痊愈;4例（15%）好转,1例（4%）预后较差,为ADEM患儿,表现为难治性癫痫。结论1

关键词：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病儿童临床特点