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中国农学通报 2009年第20期25卷 12-15页

作者：马艳平张杰马丽娜陈豪泰丁耀忠刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率为特征的猪病毒性传染病。其发生与流行给养猪业造成巨大的经济损失,现已成为危害养猪业较严重的病毒性疾病之一。及时、准确地检测出该病以便采取相应... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率为特征的猪病毒性传染病。其发生与流行给养猪业造成巨大的经济损失,现已成为危害养猪业较严重的病毒性疾病之一。及时、准确地检测出该病以便采取相应的措施,是成功防制该病的关键。此文就从血清学、病原学、分子生物学等方面阐明了猪繁殖与呼吸障碍综合征的检测技术,从而为兽医临床诊断与治疗提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病原学血清学分子生物学

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传感器在公共卫生监测中的研究应用

现代仪器 2009年第2期15卷 1-3页

作者：丁耀忠张杰魏刚刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046 兰州交通大学博文学院兰州730010

传感器作为一种高新技术的检测手段迅猛发展而引起国内外广泛关注,并被列为重点研究和发展的新技术,在多领域拓展的潜力和前景被人们所看好。因具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等... 详细信息

传感器作为一种高新技术的检测手段迅猛发展而引起国内外广泛关注,并被列为重点研究和发展的新技术,在多领域拓展的潜力和前景被人们所看好。因具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域相继得到开发和运用。本文就传感器在公共卫生监测中的研究应用进行综述,并就其发展进行展望。

关键词：传感器公共卫生监测研究应用

C型口蹄疫病毒VPI基因的克隆及真核表达载体的构建

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安徽农业科学 2009年第10期37卷 4416-4419页

作者：杨生海殷宏张杰刘永生张继乐曾巧英陈豪泰马丽娜马艳平丁耀忠甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

应用PT-PCR扩增C型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体中,并对克隆载体和VP1基因进行序列分析。将VP1基因和选择标记基因——二氢叶酸还原酶(dhfr)基因插入真核表达载体pCI-neo中,对所构建的重组真核表达载体进行PCR扩增、... 详细信息

应用PT-PCR扩增C型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体中,并对克隆载体和VP1基因进行序列分析。将VP1基因和选择标记基因——二氢叶酸还原酶(dhfr)基因插入真核表达载体pCI-neo中,对所构建的重组真核表达载体进行PCR扩增、酶切鉴定和序列分析。结果表明,VP1基因与GenBank中标准毒株(登录号EU553893)VP1的序列同源性为92.8%,VP1基因的真核表达载体pCI-VP1-D构建成功。

关键词： C型口蹄疫病毒 VPI基因真核表达载体

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口蹄疫及检测技术进展

中国农学通报 2009年第9期25卷 6-10页

作者：丁耀忠张杰马丽娜陈豪泰马艳平刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

口蹄疫包括七个主要的血清型,被国际兽疫局(OIE)定为一类传染病,中国农业部也将其列为一类传染病。因为近年频繁爆发,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因,其生态学和公共卫生学意义... 详细信息

口蹄疫包括七个主要的血清型,被国际兽疫局(OIE)定为一类传染病,中国农业部也将其列为一类传染病。因为近年频繁爆发,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因,其生态学和公共卫生学意义有极其重要的作用,通过对口蹄疫的感染机制和各种诊断与防制措施进行概述,从而阐述目前口蹄疫的诊断技术进展状况和进展。

关键词：口蹄疫检测技术生物传感器基因芯片

猪细小病毒AV30 VP2基因在昆虫细胞中表达及其免疫原性鉴定

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中国兽医科学 2020年第7期50卷 852-860页

作者：李茜代军飞丁耀忠 ASHENAFI Kiros Wubshe 李国秀马炳张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

本研究选用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统构建含有猪细小病毒AV30未优化、优化后衣壳蛋白VP2基因的重组杆状病毒,感染sf9、HF细胞表达VP2蛋白。首先,扩增PPV AV30得到VP2基因,测序后由公司根据昆虫细胞嗜性进行基因优化。同时构建并... 详细信息

本研究选用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统构建含有猪细小病毒AV30未优化、优化后衣壳蛋白VP2基因的重组杆状病毒,感染sf9、HF细胞表达VP2蛋白。首先,扩增PPV AV30得到VP2基因,测序后由公司根据昆虫细胞嗜性进行基因优化。同时构建并收获未优化、优化重组杆状病毒r BacVP2。其感染HF细胞后,进行Western-blot及IFA实验分析表明,未优化、优化VP2蛋白在昆虫细胞中正确表达,分子质量约为64 ku,并具有良好的反应原性。电镜观察,未优化、优化VP2蛋白均自我组装成VLP,与PPV AV30病毒粒子大小形状相似。最后,用VP2-VLP免疫BALB/c小鼠,能刺激小鼠产生抗PPV的特异性抗体。免疫后的小鼠脾脏淋巴细胞在PPV AV30病毒的刺激后,出现显著的增殖情况,同时产生了Th1和Th2型相关细胞因子。本研究成功构建了VP2-VLP,并在小鼠实验中显示了良好的免疫效果,为以VP2为表位载体的嵌合型病毒样颗粒疫苗进一步研制奠定了基础。

关键词：猪细小病毒 VP2基因昆虫杆状系统 VLP 免疫原性

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猪链球菌病与诊断技术研究进展

江西农业学报 2009年第5期21卷 121-123,127页

作者：丁小龙丁耀忠程芳珍张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特股份有限公司甘肃兰州730046

猪链球菌病是由多种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患传染病,综述了猪链球菌病的感染因子及其诊断技术的研究进展。

关键词：猪链球菌病诊断技术基因芯片

从“消灭哲学”“哲学的终结”到科学世界观的转换——马克思恩格斯对思辨哲学的批判逻辑

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中国人民大学学报 2024年第3期38卷 146-157页

作者：沈江平丁耀鹏中国人民大学马克思主义学院 21世纪中国马克思主义研究协同创新中心

马克思“消灭哲学”论断和恩格斯“哲学的终结”论断共同彰显针对德国思辨哲学的批判态度。马克思基于西方哲学实践论转向的理论倾向、青年时代对哲学功能的认知变化以及对哲学和革命关系深入思索的三重意蕴提出“消灭哲学”命题,反映... 详细信息

马克思“消灭哲学”论断和恩格斯“哲学的终结”论断共同彰显针对德国思辨哲学的批判态度。马克思基于西方哲学实践论转向的理论倾向、青年时代对哲学功能的认知变化以及对哲学和革命关系深入思索的三重意蕴提出“消灭哲学”命题,反映其源于对德国盛行的观念论哲学的批判立场。恩格斯延展了马克思的批判理路,以“哲学的终结”论断为核心,批判对象和批判旨趣与“消灭哲学”一脉相承。以集中表述费尔巴哈理论定位为特征的批判结构的扩展,标识批判逻辑的具体推进,旨在重申和创新唯物史观基本原理的理论批判的深化是其逻辑完成和理论升华。科学世界观的形成立足于哲学批判的思想基础,哲学批判逻辑转化为科学世界观则是其终极理论归宿。从“消灭哲学”到“哲学的终结”的批判逻辑同科学世界观创立路径的同质演进则映现二者是同一问题的两面。质言之,“批判意识”是推动批判逻辑向科学世界观转化的理论先导,“体系批判”是关键载体,哲学批判和阶级革命相衔接的结构则牵涉到理论和实践互动中向科学世界观转化的内在路径。

关键词：消灭哲学哲学的终结思辨哲学批判逻辑

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2017年第9期30卷 948-953页

作者：欧云文王勤马炳马小元代军飞贾宁丁耀忠张永光张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 开江县畜牧食品局动物疫病预防控制中心四川达州635000 达州职业技术学院四川达州635000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

目的原核表达美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus,NA-PRRSV)N蛋白,并制备多克隆抗体。方法以NA-PRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增N蛋白编码片段,克隆入原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒pET30a-NA-PRRSV-N,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h。采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达的重组蛋白,复性后的重组N蛋白与弗氏佐剂混合乳化,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,制备兔抗NA-PRRSV-N蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验检测多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测血清抗体效价。结果经PCR、双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET30a-NA-PRRSV-N构建正确;重组N蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为24 000,纯度可达95%以上,可与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体能够识别重组N蛋白和全病毒抗原,抗体效价>1∶25 600,显著高于商品化疫苗组。结论成功在大肠埃希菌中表达了NA-PRRSV N蛋白,并制备了其多克隆抗体,为NA-PRRSV检测方法的建立奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型 N蛋白原核细胞基因表达多克隆抗体

新城疫病毒Roakin株HN基因的克隆及真核表达载体的构建

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西北农业学报 2009年第2期18卷 19-23,37页

作者：张继乐陈豪泰丁耀忠孙德惠马丽娜张杰金雷高云英刘永生西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

克隆新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Roakin株HN基因,并构建真核表达载体。应用RT-PCR扩增出NDV Roakin株HN基因,将其克隆入pMD18-T载体,并进行了测序鉴定和HN基因的序列分析。然后分别将NDV的HN基因和选择标记基因—二氢叶酸... 详细信息

克隆新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Roakin株HN基因,并构建真核表达载体。应用RT-PCR扩增出NDV Roakin株HN基因,将其克隆入pMD18-T载体,并进行了测序鉴定和HN基因的序列分析。然后分别将NDV的HN基因和选择标记基因—二氢叶酸还原酶(dhfr)基因插入到真核表达载体pCI-neo中,通过PCR扩增、酶切分析和测序分析等鉴定所构建的重组真核表达载体。RT-PCR扩增的NDVRoakin株HN序列与GenBank中标准毒株(登录号AY289000)HN序列同源性为99.8%,构建了HN基因的真核表达质粒pCI-HN-D。成功构建了含有NDV Roakin株HN基因和dhfr基因的真核表达载体。

关键词：新城疫病毒 HN基因 dhfr基因真核表达载体