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钼离子在雌激素受体测定中的作用

中国肿瘤临床 1989年第1期16卷 7-9页

作者：丁秀敏何振祥张克勤天津市肿瘤研究所

本文初步报道DCC和SDG2种检测体系中钼酸钠对人乳癌组织和兔子宫组织中的雌激素受体测定结果的影响作用。实验结果表明,钼有稳定雌激素受体的作用,使雌激素受体的水平增加,在有钼的情况下,受体的沉降系数为9-10S,但钼对Cytosol中的蛋白... 详细信息

本文初步报道DCC和SDG2种检测体系中钼酸钠对人乳癌组织和兔子宫组织中的雌激素受体测定结果的影响作用。实验结果表明,钼有稳定雌激素受体的作用,使雌激素受体的水平增加,在有钼的情况下,受体的沉降系数为9-10S,但钼对Cytosol中的蛋白测定有干扰作用,使测定值偏低。

关键词：雌激素受体钼离子乳腺癌

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纳豆芽胞杆菌中MenA的异源过表达

纳豆芽胞杆菌中MenA的异源过表达

作者：丁秀敏安徽工程大学

学位级别：硕士

维生素K2(VK2,MK-n)又叫甲萘醌,是人体新陈代谢中不可缺少的脂溶性维生素,具有多种重要的生理功能。纳豆芽胞杆菌作为生产VK2的主要菌种,其VK2产量较高,是美国FDA公认的益生菌。有研究表明,在大肠杆菌中将VK2合成关键酶1,4-二羟基-2-萘... 详细信息

维生素K2(VK2,MK-n)又叫甲萘醌,是人体新陈代谢中不可缺少的脂溶性维生素,具有多种重要的生理功能。纳豆芽胞杆菌作为生产VK2的主要菌种,其VK2产量较高,是美国FDA公认的益生菌。有研究表明,在大肠杆菌中将VK2合成关键酶1,4-二羟基-2-萘甲酸聚异戊二烯转移酶(EcMenA)进行过表达,可以显著提高VK2的产量。而纳豆芽胞杆菌中1,4-二羟基-2-萘甲酸聚异戊二烯转移酶(BsnMenA)在天然生物体中丰度较低,目前仍较少被研究报道,因此对于BsnMenA的晶体结构以及具体催化过程还不清楚。本课题对BsnMenA分别进行了生物信息学预测分析,亚细胞定位实验以及在大肠杆菌中克隆与表达的研究,这为后期开展BsnMenA的深入研究奠定理论基础。主要研究内容和结果如下:(1)通过生物信息学软件对BsnMenA的系统进化关系、基本性质、跨膜结构、亲疏水性、结构域的预测与motifs搜索、空间结构等进行预测分析。系统进化树显示,芽胞杆菌属中的MenA高度相似,亲缘关系较近,但与大肠杆菌等其它科中的MenA亲缘关系较远。从理化性质及亚细胞定位预测,初步确定BsnMenA属于膜结合型蛋白质。结构域与motifs搜索预测显示,BsnMenA的34-278氨基酸组成典型的UbiA结构功能域,其中74-84和204-212分别存在NxxxDxxxxxD和NNxxDxxxD的Asp-rich motifs结构。同源序列比对发现BsnMenA中第74、204、205天冬酰胺和208、84、78、212天冬氨酸是其关键氨基酸位点。通过折叠识别建模法,模拟出BsnMenA的三维空间结构,是由9个跨膜螺旋组成的一个活性中心腔,这与匹配度最高的嗜热系古生细菌中的4-羟苯甲酸-聚异戊二烯转移酶(ApUbiA)极其相似,由于BsnMenA与ApUbiA空间结构高度相似,因此推导出BsnMenA的催化功能有关的保守结构域位点及其催化机制。(2)为了进一步探究BsnMenA在大肠杆菌中的亚细胞定位情况,本章节通过重叠 PCR扩增法,成功构建了重组菌BL21/pET28a-menA-egfp(MEP28)和BL21/pET28a-egfp-menA(EMP28),随后对这两株重组菌以及阳性对照BL21/pET28a-egfp(EP28)和阴性对照BL21/pET28a(P28),以相同的培养条件下进行发酵和诱导表达,诱导条件为IPTG浓度0.2 mM,诱导温度28℃,摇瓶转速150 rpm,并采取实时取样的方式。将诱导发酵结束后的样品用激光共聚焦荧光显微镜观察,显示结果为:当诱导时间为20 min时,重组菌MEP28和EMP28的细胞膜上均有明显可见荧光,而阳性对照EP28整个细胞布满荧光,阴性对照P28则未见明显的荧光。该实验不仅再次验证BsnMenA是膜蛋白,而且充分说明膜蛋白menA以及egfp在大肠杆菌中可以表达并且正确折叠。(3)为了深入研究BsnMenA在大肠杆菌中的克隆与过表达情况。首先,经PCR扩增得到的menA分别与pET22b(+)和pET28a(+)连接,并转入大肠杆菌JM109中,得到重组菌JM109/pET28a-menA和JM109/pET22b-menA,将发酵后提取重组质粒转入BL21(DE3)中,得到重组菌BL21/pET28a-menA(MP28)和BL21/pET22b-menA(MP22)。其次,以LB培养基为发酵培养基时,将MP22、MP28以及阴性对照BL21/pET22b(P22)和BL21/pET28a(P28)在IPTG终浓度分别为0.2 mM和0.8 mM条件下,进行低温诱导表达,通过制备BsnMenA的粗提样品并进行SDS-PAGE检测,均无明显可见蛋白条带。再次,以含有0.5%葡萄糖的LB培养基为发酵培养基时,将MP22、MP28、P22和P28在0.5 mM的IPTG中,进行低温诱导表达,SDS-PAGE检测发现MP22在38 KD处有明显可见蛋白条带,而在MP28的蛋白电泳图中却未见明显条带。通过本实验,发现MP22在0.5%葡萄糖的LB培养基中具有过表达BsnMenA的潜力,并且初步建立了适合BsnMenA异源过表达的方法。为后期对MP22进行系统性发酵条件优化、BsnMenA纯品的获得以及酶学性质的研究奠定一定的理论基础。

关键词：纳豆芽胞杆菌异戊烯转移酶MenA 生物信息学分析亚细胞定位异源过表达

癌胚抗原(CEA)在乳腺癌组织中的分布与雌激素受体关系的初步研究

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中国肿瘤临床 1992年第1期19卷 28-30页

作者：丁秀敏何振祥张克勤戴荣增天津市肿瘤研究所

本文分析了11例正常乳腺组织,17例乳腺良性肿瘤组织及96例乳腺癌组织中的CEA水平的分布,以及与乳腺癌组织中雌激素受体(ER)状态的关系。CEA水平≤5μg/mg蛋白为阴性,>此值为阳性。正常和良性乳腺肿瘤中CEA阳性率为17％,而乳腺癌组织中... 详细信息

本文分析了11例正常乳腺组织,17例乳腺良性肿瘤组织及96例乳腺癌组织中的CEA水平的分布,以及与乳腺癌组织中雌激素受体(ER)状态的关系。CEA水平≤5μg/mg蛋白为阴性,>此值为阳性。正常和良性乳腺肿瘤中CEA阳性率为17％,而乳腺癌组织中为52％,两组比较有统计学意义(P<0.01)。本文还表明,乳腺癌组织中CEA和ER水平之间无相关性。另外,在不同组织学类型的乳腺癌中,CEA阳性率差别也不显著。

关键词：乳腺癌癌胚抗原雌激素受体

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乳头汗腺瘤样腺瘤1例及文献复习

临床与实验病理学杂志 2005年第5期21卷 563-566页

作者：范宇傅西林丁秀敏天津医科大学附属肿瘤医院乳腺癌研究室天津300060

目的探讨乳头汗腺瘤样腺瘤的临床病理和免疫表型特点及诊断与治疗。方法通过HE及免疫组化染色观察1例乳头汗腺瘤样腺瘤,并结合文献讨论。结果肿瘤发生于乳头,由上皮细胞形成的不规则巢、小条索或小管在致密的纤维间质及平滑肌之间呈浸... 详细信息

目的探讨乳头汗腺瘤样腺瘤的临床病理和免疫表型特点及诊断与治疗。方法通过HE及免疫组化染色观察1例乳头汗腺瘤样腺瘤,并结合文献讨论。结果肿瘤发生于乳头,由上皮细胞形成的不规则巢、小条索或小管在致密的纤维间质及平滑肌之间呈浸润性生长,其中可见“蝌蚪状”细胞巢及角化囊肿,病变边界不清。免疫表型:CK阳性,p63、SMA部分阳性,ER、PR及GCDFP-15均阴性。结论乳头汗腺瘤样腺瘤是一种呈局部浸润性生长的非常罕见的乳头部良性肿瘤,局部切除后可复发,但不转移。组织学上主要应与乳头管腺瘤、导管内乳头状瘤伴鳞化及管状癌鉴别。适当的治疗应该包括肿瘤及其周边充分的正常组织完整切除,且标本切缘阴性。

关键词：乳腺肿瘤乳头汗腺瘤样腺瘤免疫组织化学

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三苯氧胺抑制实验的建立及临床意义

中国肿瘤临床 1996年第4期23卷 257-259页

作者：何振祥丁秀敏庞雁张克勤石磊垣天津市肿瘤研究所

应用三苯氧胺（ＴＡＭ）抑制实验对３９例乳腺癌ＥＲ（＋）病人进行了检测。其中２４例ＴＡＭ抑制实验有不同程度的抑制阻断，抑制率从１０％～１００％。其余１５例ＥＲ（＋）者，而ＴＡＭ抑制率为零。不同组织学类型ＴＡＭ抑制率实验... 详细信息

应用三苯氧胺（ＴＡＭ）抑制实验对３９例乳腺癌ＥＲ（＋）病人进行了检测。其中２４例ＴＡＭ抑制实验有不同程度的抑制阻断，抑制率从１０％～１００％。其余１５例ＥＲ（＋）者，而ＴＡＭ抑制率为零。不同组织学类型ＴＡＭ抑制率实验似有差异，髓样癌的阳性检出率较浸润性导管癌高。从理论上讲，ＴＡＭ在部分ＥＲ（＋）病人体内，并不能阻断Ｅ２与受体结合，因而对ＴＡＭ抑制实验阴性的病人，ＴＡＭ不能起到治疗效果。因此建议进行激素受体测定时，加测ＴＡＭ抑制实验，以指导临床用药。

关键词：乳腺癌雌激素受体三苯氧胺药物疗法

212例乳腺癌雌激素受体水平与临床病理的关系分析

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中国肿瘤临床 1996年第5期23卷 364-365页

作者：曹飞麟周涛方志沂丁秀敏浙江省台州医院天津市肿瘤医院

２１２例乳腺癌雌激素受体水平与临床病理的关系分析曹飞麟，周涛，方志沂，丁秀敏浙江省台州医院（台州市３１７０００）乳腺癌的治疗和预后与乳腺癌组织中的雌激素受体（ＥＲ）水平有密切关系。现收集浙江省台州医院和天津市肿瘤医院... 详细信息

２１２例乳腺癌雌激素受体水平与临床病理的关系分析曹飞麟，周涛，方志沂，丁秀敏浙江省台州医院（台州市３１７０００）乳腺癌的治疗和预后与乳腺癌组织中的雌激素受体（ＥＲ）水平有密切关系。现收集浙江省台州医院和天津市肿瘤医院１９８６年１月至１９８７年１２月经...

关键词：乳腺癌雌激素受体病理预后

乳腺癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）的研究

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中国肿瘤临床 1995年第12期22卷 872-875页

作者：丁秀敏何振祥郎义方石磊垣天津市肿瘤研究所天津市肿瘤医院乳腺科

用￣（１２５）Ｉ标记的表皮生长因子（￣（１２５）Ｉ－ＥＧＦ）作为配基，用标准的ＥＧＦ作为竞争剂，采用单点饱和分析法测定了３６例乳腺癌组织中的ＥＧＦＲ含量，范围在１～１２２ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白之间，以１０ｆｍｏｌ／ｍｇ... 详细信息

用￣（１２５）Ｉ标记的表皮生长因子（￣（１２５）Ｉ－ＥＧＦ）作为配基，用标准的ＥＧＦ作为竞争剂，采用单点饱和分析法测定了３６例乳腺癌组织中的ＥＧＦＲ含量，范围在１～１２２ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白之间，以１０ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白以上为阳性，乳腺癌阳性率为３８％。按乳腺癌临床分期的结果表明，临床分期越高，阳性率也越高。有淋巴结转移者较无淋巴结转移的病人阳性率有增高趋势。证明表皮生长因子受体与乳腺癌的恶性程度有关，但癌各组织学类型之间阳性率未见差别。

关键词：乳腺癌表皮生长因子受体

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乳腺浸润性筛状癌1例

临床与实验病理学杂志 2005年第2期21卷 244-245页

作者：郎荣刚傅西林付丽丁秀敏天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理科天津300060

患者女性,58岁.13年前发现左乳外上象限无痛性肿块,直径约2 cm,近1年因外伤后肿物生长迅速并破溃,近2个月乳头糜烂,于2003年11月3日收入院.无肿瘤家族史及乳腺疾病史.体检:左乳可触及肿物10 cm×10 cm×5 cm,几乎占据全乳,质地硬、边界... 详细信息

患者女性,58岁.13年前发现左乳外上象限无痛性肿块,直径约2 cm,近1年因外伤后肿物生长迅速并破溃,近2个月乳头糜烂,于2003年11月3日收入院.无肿瘤家族史及乳腺疾病史.体检:左乳可触及肿物10 cm×10 cm×5 cm,几乎占据全乳,质地硬、边界不清,肿物与胸大小肌固定.乳腺外上象限见7 cm×7.5 cm的皮肤破溃,内上象限见7 cm×3 cm的皮肤粘连,无疼痛和压痛,无皮肤水肿.……

关键词：乳腺肿瘤浸润性筛状癌病例报道

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乳腺组织中SIgA含量测定的临床意义

中国肿瘤临床 1990年第4期17卷 226-228页

作者：陈玲丁秀敏何振祥张克勤刘洪■ 天津市肿瘤研究所

本文介绍了用免疫单向琼脂扩散方法,检测良、恶性乳腺组织胞液中的SIgA含量。结果,SIgA(μg/ml)含量:正常乳腺组织为9.4;良性乳腺组织为7.8,两者无显著意义(P\0.05)。恶性乳腺组织为3.4;与正常乳腺组织和良性乳腺组织相比均有非常显著... 详细信息

本文介绍了用免疫单向琼脂扩散方法,检测良、恶性乳腺组织胞液中的SIgA含量。结果,SIgA(μg/ml)含量:正常乳腺组织为9.4;良性乳腺组织为7.8,两者无显著意义(P\0.05)。恶性乳腺组织为3.4;与正常乳腺组织和良性乳腺组织相比均有非常显著性差别(P<0.01)。文章比较了术前化疗与未用化疗患者和同一标本正常组织与癌组织SIgA的含量,均有显著意义(P<0.01)。本文讨论了乳腺组织中SIgA含量对指导乳腺癌患者术后免疫治疗中的作用。

关键词：乳腺癌乳腺组织 SIgA 测定