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抗猪脂肪细胞膜单链抗体抗体库的构建及表达

抗猪脂肪细胞膜单链抗体抗体库的构建及表达

作者：丁淑燕山东农业大学

学位级别：硕士

为研究、大量制备高亲和力抗猪脂肪细胞膜抗体,本实验从分子生物学和基因工程抗体技术的角度出发,首先构建出抗猪脂肪细胞膜单链抗体,然后将单链抗体与噬菌体载体pCANTAB5E连接,连接产物转入感受态大肠杆菌TG1,构建出抗猪脂肪细胞膜抗体... 详细信息

为研究、大量制备高亲和力抗猪脂肪细胞膜抗体,本实验从分子生物学和基因工程抗体技术的角度出发,首先构建出抗猪脂肪细胞膜单链抗体,然后将单链抗体与噬菌体载体pCANTAB5E连接,连接产物转入感受态大肠杆菌TG1,构建出抗猪脂肪细胞膜抗体库,经过淘选使得抗猪脂肪细胞膜抗体得以富集。ELISA检测鉴定富集效果,选择阳性克隆进行酶切鉴定。挑取阳性克隆在大肠杆菌HB2151中表达,并对表达产物进行鉴定。本研究做了以下几方面的内容:1 构建抗猪脂肪细胞膜抗体库在本实验室其他人员所构建的抗猪脂肪细胞膜单链抗体(Single chain Fv, ScFv)的基础上,用SfiI和NotI将ScFv的两端酶切,克隆入同样用SfiI和NotI酶切的噬菌体载体pCANTAB5E,CaCl2转化法将连接好的载体转入感受态大肠杆菌TG1,构建抗猪脂肪细胞膜噬菌体抗体库。2 对所构建的抗体库进行筛选抗体库经辅助噬菌体援救后,用特异性抗原脂肪细胞对其进行筛选,每轮筛选过后取噬菌体抗体库少量感染的E. Coli TG1,涂板培养计算抗体滴度。筛选4轮使抗猪脂肪细胞膜抗体得以富集。制备重组噬菌体抗体,用ELISA检测。筛选出的抗体库阳性克隆在大肠杆菌中进行表达 4轮筛选过后的抗体库在SOBAG培养后挑取单菌落制备重组噬菌体,ELISA法进行检测。产生的抗体的阳性克隆用大肠杆菌HB2151在IPTG的诱导下进行

关键词：猪,脂肪细胞膜,单链抗体,噬菌体展示技术,噬菌体抗体库技术

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抗绿脓杆菌外毒素A酶标抗体的制备及其应用

中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 67-70页

作者：高玲美牛钟相李雅林丁淑燕山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA) ,再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔 ,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG) ;用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体 (IgG) ,制成酶标抗体 ,经检验 ,酶标抗体结合物中的... 详细信息

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA) ,再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔 ,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG) ;用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体 (IgG) ,制成酶标抗体 ,经检验 ,酶标抗体结合物中的HRP浓度和Ab(IgG)浓度分别是 0 0 6 0 8mg/mL和 0 336mg/mL ;HRP/Ab(IgG)克分子比值为1 72 4 % ;酶 (HRP)结合率是 11 15 %。利用该酶标抗体以ELISA夹心法对羊体内抗PEA抗体含量进行了检测 ,结果证明 ,用酶标抗体ELISA法比用平板凝集实验法检测的抗体效价平均高出二个滴度 ,表明制备的PEA酶标抗体具有灵敏度高。

关键词：绿脓杆菌外毒素A 酶标抗体

以“非暴力沟通”为技巧提升教师沟通能力的实践研究

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大众心理学 2018年第12期 21-22页

作者：丁淑燕上海莘松中学

现代学校正在悄无声息地进行着变革,教育理念、教育方式、教育语言、教育技巧都在为适应这个新时代变化着,而学校教育中教师和学生最基本的交流沟通方式也面临质的变革。笔者所在的学校在教师专业培训方面特别引入了一种全新的沟通技巧... 详细信息

现代学校正在悄无声息地进行着变革,教育理念、教育方式、教育语言、教育技巧都在为适应这个新时代变化着,而学校教育中教师和学生最基本的交流沟通方式也面临质的变革。笔者所在的学校在教师专业培训方面特别引入了一种全新的沟通技巧——非暴力沟通,引发了一次沟通方式的全新体验,有效提升了教师的沟通能力,建立了良好的师生互动关系,营造了温馨和谐的校园氛围。

关键词：沟通能力非暴力教师实践研究师生互动关系学校教育教育理念教育方式

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兴国红鲤精液超低温冷冻保存及效果分析

江苏农业科学 2016年第2期44卷 277-279页

作者：丁淑燕严维辉郝忱葛家春江苏省淡水水产研究所江苏南京210017

对兴国红鲤精液的超低温冷冻保存技术进行了研究。以解冻后精子的寿命和运动力为参数,分别探讨了不同组合的稀释液、抗冻剂以及冷冻程序对兴国红鲤精液进行超低温冷冻保存的保护效果。试验结果表明,选用Ringer液为稀释液,8%DMSO为抗冻剂... 详细信息

对兴国红鲤精液的超低温冷冻保存技术进行了研究。以解冻后精子的寿命和运动力为参数,分别探讨了不同组合的稀释液、抗冻剂以及冷冻程序对兴国红鲤精液进行超低温冷冻保存的保护效果。试验结果表明,选用Ringer液为稀释液,8%DMSO为抗冻剂,按照程序-80℃平衡15 min,后保存于-196℃液氮中,37℃水浴100 s解冻,精液解冻激活后镜检,精子活力达到(83±9.6)%,寿命在(86.25±24.7)s,接近鲜精的水平。本研究结果为保护淡水鱼类的种质资源提供了理论基础。

关键词：兴国红鲤精液超低温保存

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的形态和顶体反应的研究

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南京大学学报（自然科学版） 2007年第2期43卷 139-144页

作者：夏爱军丁淑燕潘建林黄亚红严维辉葛家春江苏省淡水水产研究所南京210017 南京大学生命科学学院南京210093

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子产生顶体反应的最佳条件.结果表明:从雌性中华绒螯蟹纳精囊中获得的精子,在pH值为6.0,CaCl2浓度为0.2%的人工海水中,用离子载体A23187(40μg/mL)诱导70min,可以得到最... 详细信息

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子产生顶体反应的最佳条件.结果表明:从雌性中华绒螯蟹纳精囊中获得的精子,在pH值为6.0,CaCl2浓度为0.2%的人工海水中,用离子载体A23187(40μg/mL)诱导70min,可以得到最大的精子顶体反应率(72%).在此基础上用光镜观察了顶体反应过程中精子显微结构的变化,并采用天然海水配制的台盼蓝染色液和曙红B染色液对中华绒螯蟹精子的形态进行观察,确定中华绒螯蟹精子的顶体反应过程大致可分为4个阶段:第一阶段为辐射臂收缩,头帽鼓起;第二阶段为顶体囊外翻;第三阶段为顶体管前伸;第四阶段为顶体丝形成.

关键词：中华绒螫蟹精子顶体反应

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抗猪脂肪细胞膜抗体库的构建

中国畜牧杂志 2005年第9期41卷 27-29页

作者：丁淑燕苗向阳朱瑞良邵建军中国农科院畜牧研究所北京100094 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

通过免疫方法降低猪脂肪含量、提高胴体品质成为人们研究的一个新课题,噬菌体展示技术的完善与发展为实现这一研究目的提供了条件,成为制备高亲和性抗体的有力工具。用猪脂肪细胞免疫小鼠,提取mRNA,反转录成cDNA。通过PCR扩增出重链可... 详细信息

通过免疫方法降低猪脂肪含量、提高胴体品质成为人们研究的一个新课题,噬菌体展示技术的完善与发展为实现这一研究目的提供了条件,成为制备高亲和性抗体的有力工具。用猪脂肪细胞免疫小鼠,提取mRNA,反转录成cDNA。通过PCR扩增出重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL,再用编码(Gly4Ser)3的Linker将VH、VL连接在一起,克隆入pCANTAB5E中,转化大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染,构建噬菌体抗体库并进行筛选。

关键词：畜牧兽医科学基础学科猪脂肪细胞膜抗体库噬菌体展示技术

博乐市地税局认真落实就业税收优惠政策 002

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博尔塔拉报(汉)

作者：丁淑燕

本报博乐2月1日讯通讯员丁淑燕报道博乐市地税局根据最新出台的就业税收优惠政策，加强领导、周密部署，认真落实。据了解，2011年1月1日起实施新的支持和促进就业的税收优惠政策，其最大亮点在于不仅着重支持自主创业，还扩大了享...

本报博乐2月1日讯通讯员丁淑燕报道博乐市地税局根据最新出台的就业税收优惠政策，加强领导、周密部署，认真落实。据了解，2011年1月1日起实施新的支持和促进就业的税收优惠政策，其最大亮点在于不仅着重支持自主创业，还扩大了享受自主创业税收优惠政策的人员范?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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噬菌体抗体库技术

中国兽医杂志 2006年第4期42卷 26-28页

作者：丁淑燕苗向阳朱瑞良高玲美邵建军中国农业科学院畜牧研究所北京海淀100094 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

噬菌体抗体是表面表达有单链抗体(Singlechain Fv,ScFv)或抗体Fab段的噬菌体,用基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来,组装到表达载体内并表达到噬菌体表面成为噬菌体抗体的群体,即为噬菌体抗体库.该技术是丝状噬菌体展示(phage d... 详细信息

噬菌体抗体是表面表达有单链抗体(Singlechain Fv,ScFv)或抗体Fab段的噬菌体,用基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来,组装到表达载体内并表达到噬菌体表面成为噬菌体抗体的群体,即为噬菌体抗体库.该技术是丝状噬菌体展示(phage display)与抗体组合文库技术相结合而成.其基本路线为用PCR方法扩增抗体全套可变区基因,重组到噬菌体载体中,并通过与丝状噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白,把Fab段或ScFv表达到噬菌体表面.通过'吸附-洗脱-扩增'的富集过程,从中筛选出特异性抗体的可变区基因.

关键词：噬菌体抗体库技术基因克隆技术可变区基因丝状噬菌体 Fab段噬菌体展示 PCR方法特异性抗体单链抗体表面表达

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市地税局车船税月收入再创新高 002