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小鼠胚胎干细胞中RNA干涉现象

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 238-246页

作者：孟国良汤富酬张俊争赵文宁尚克刚丁明孝薛友纺北京大学生命科学学院北京大学生命科学学院北京100871

报道了不同品系小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )系MESPU13、B3和R1中存在的RNA干涉 (RNAi)现象。应用脂质体法 ,将转录绿色荧光蛋白 (GFP)基因双链RNA(dsRNA)的载体 (pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞 ,dsRNA的瞬时表达可引起ES细胞中的RNAi效应 ,... 详细信息

报道了不同品系小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )系MESPU13、B3和R1中存在的RNA干涉 (RNAi)现象。应用脂质体法 ,将转录绿色荧光蛋白 (GFP)基因双链RNA(dsRNA)的载体 (pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞 ,dsRNA的瞬时表达可引起ES细胞中的RNAi效应 ,即质粒转录的GFP基因的dsRNA能够显著降低ES细胞内相应的外源GFP基因的表达 ;同时 ,用电穿孔转染法将线性化的pdsGFP puro导入ES细胞中 ,筛选后 ,在 3 0 %左右的抗性克隆中GFP表达量明显降低 ,少数细胞内的干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。在此基础上 ,构建了可转录ES细胞特异标记基因OCT 4基因片断dsRNA的载体 ,经基因打靶和抗性筛选得到了稳定整合的ES细胞克隆 ,随机扩增了 5 1个克隆 ,并对其中的 48个阳性克隆进行了PCR半定量检测 ,结果显示 :在 11个ES细胞克隆中具有显著的RNAi效应 ,干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。这一结果表明 ,应用RNAi在不同品系ES细胞中研究哺乳动物及人的基因功能是可行的

关键词： RNA干涉 ES细胞双链RNA 反义RNA

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关于细胞生物学教材建设的几点思考

高校生物学教学研究（电子版） 2022年第2期12卷 3-7页

作者：丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

翟中和院士领衔主编的《细胞生物学》教材从第1版开始编写至今已有30年了。其间本书不断再版,最新的第5版于2020年面世,并荣获首届全国教材建设奖高等教育类全国优秀教材一等奖。回顾30年教材建设历程,其编写思路主要有3个方面:第一是... 详细信息

翟中和院士领衔主编的《细胞生物学》教材从第1版开始编写至今已有30年了。其间本书不断再版,最新的第5版于2020年面世,并荣获首届全国教材建设奖高等教育类全国优秀教材一等奖。回顾30年教材建设历程,其编写思路主要有3个方面:第一是兼顾基础性与前沿性,第二是注重基本概念与实验技术,第三是力求图文并茂。希望点滴体会能够对当下教材的编写有所裨益,共同推进新时代教学改革与教材建设。

关键词：细胞生物学教材建设基础性与前沿性基本概念与实验技术图文并茂

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猪瘟病毒的分子生物学研究进展

微生物学通报 1998年第1期25卷 57-59页

作者：王镇丁明孝北京大学生命科学学院细胞与遗传学系北京100871

猪瘟病毒(Oassicalswinefevervirus,CSFV;或称Hogcholeravirus,HCV),属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Peshvirus)[’1。CSFV

关键词：猪瘟病毒分子生物学基因组结构蛋白

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细胞质基质

生物学通报 1994年第8期29卷 9-11页

作者：丁明孝北京大学生命科学院

细胞质中除了细胞器和膜围绕的细胞结构以外的胶状物质算细胞质基质或胞质溶胶，细胞质基质是由骨架纤维贯穿在粘稠的蛋白质胶体中，形成动态的且很可能是高度有组织的结构，它不仅是蛋白质合成以及很多中间代谢进行的场所，而且细胞内... 详细信息

细胞质中除了细胞器和膜围绕的细胞结构以外的胶状物质算细胞质基质或胞质溶胶，细胞质基质是由骨架纤维贯穿在粘稠的蛋白质胶体中，形成动态的且很可能是高度有组织的结构，它不仅是蛋白质合成以及很多中间代谢进行的场所，而且细胞内物质、能量和信息转运与传递以及很多主要生命活动都是通过细胞质基质完成的。

关键词：细胞质基质胞质溶胶细胞骨架

应用免疫金银技术检测猪瘟病毒兔化弱毒株感染细胞

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微生物学通报 1998年第6期25卷 356-359页

作者：王镇张海丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫... 详细信息

在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株（CSFVC株）感染细胞的检测，获得较为满意的实验结果。免疫金银染色技术的应用为研究CSFV在细胞中增殖的规律提供更为灵敏的检测手段，并且可望为猪瘟疫苗生产中的滴度测定提供一种简便有效的手段。

关键词：免疫金银染色 IGSS 猪瘟病毒兔化弱毒株 CSFV

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组蛋白H2A与染色质的动态结合

北京大学学报（自然科学版） 2003年第2期39卷 182-186页

作者：郭焱孙玉慧魏朝亮丁明孝陈建国北京大学生命科学学院细胞生物学及遗传学系北京100871

在真核细胞中 ,核小体的核心结构组蛋白被DNA紧密缠绕 ,但是这种紧密的结合有时也可能变得松散 ,以利于其他蛋白与DNA的结合。将组蛋白H2A与绿色荧光蛋白的融合表达载体和核仁纤维蛋白 (fibrillarin)与红色荧光蛋白的融合表达载体共转染... 详细信息

在真核细胞中 ,核小体的核心结构组蛋白被DNA紧密缠绕 ,但是这种紧密的结合有时也可能变得松散 ,以利于其他蛋白与DNA的结合。将组蛋白H2A与绿色荧光蛋白的融合表达载体和核仁纤维蛋白 (fibrillarin)与红色荧光蛋白的融合表达载体共转染COS 7细胞 ,利用荧光漂白恢复(FRAP)技术研究了H2A在细胞核内的动态变化。结果显示 ,在少数间期细胞的核仁区有组蛋白聚集现象 ,且此区域内H2A的运动速度显著地高于非核仁区的H2A ,推测该现象仅出现于细胞周期的某个时期。

关键词：组蛋白核仁荧光漂白恢复

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电镜技术解析出30nm染色质的双螺旋结构

电子显微学报 2014年第3期33卷 I0003-I0005页

作者：丁明孝

2014年4月25日，中国科学院生物物理研究所朱平研究员和李国红研究员课题组在美国Sci—ence杂志上，以研究论文（ResearchArticle）形式发表了题为“Cryo—EM study of the chromatin fiber reveals a double helix twisted by tetranucleosomal units”的学术论文，解析了30nm染色质纤维的三维结构，提出了“左手双螺旋结构”模型。这一重大发现，受到国内外学者的密切关注。

关键词：双螺旋结构染色质电镜技术中国科学院生物物理研究所析出 helix 研究论文学术论文

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人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题

生物工程学报 2002年第2期18卷 131-135页

作者：孟国良尚克刚丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可... 详细信息

人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨 ;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用 ;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法 ;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法 ,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析。

关键词：人胚胎干细胞人胚胎生殖细胞多能性分化端粒酶

猪瘟病毒弱毒株感染对体外培养细胞增殖的促进作用

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微生物学通报 2000年第2期27卷 79-84页

作者：王镇陆宇丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）能在多种体外培养细胞中增殖，却不使细胞产生病变（ＣＰＥ）。使用原代细胞增殖ＣＳＦＶ弱毒疫苗。结果显示：病毒的增殖能够增加原代牛睾丸细胞的传代次数和维持时间。因此，ＣＳＦＶ疫苗生产上能够在接毒后多次... 详细信息

猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）能在多种体外培养细胞中增殖，却不使细胞产生病变（ＣＰＥ）。使用原代细胞增殖ＣＳＦＶ弱毒疫苗。结果显示：病毒的增殖能够增加原代牛睾丸细胞的传代次数和维持时间。因此，ＣＳＦＶ疫苗生产上能够在接毒后多次收获病毒。此外，ＣＳＦＶ弱毒株还能够刺激体外培养的兔巨噬细胞增殖，使形成致密的单细胞层。使用传代细胞ＰＫ１５增殖病毒，经流式细胞术检测发现ＣＳＦＶ弱毒的增殖不仅不改变ＰＫ１５细胞的增殖周期，并且能够影响Ｇ４１８对ＰＫ１５细胞增殖的抑制作用，促进其宿主细胞的增殖。ＣＳＦＶ对体外培养细胞的增殖有促进作用，然而感染猪对猪机体的损伤却很严重。实验结果显示ＣＳＦＶ与其宿主细胞间相互作用的复杂性。

关键词：猪瘟病毒增殖宿主细胞相互作用