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Effects of Erlong Zuoci Pill (耳聋左慈丸) and Its Disassembled Prescriptions on Gentamicin-induced Ototoxicity Model in vitro

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Chinese Journal of Integrative Medicine 2010年第3期16卷 258-263页

作者：董杨曹碧茵王静丁大连韩志芬施建蓉 Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Hearing Research Lab 215 Parker HallSUNY University at BuffaloBuffaloNY 14214USA

Objective：To study the effects of Erlong Zuoci Pill（耳聋左慈丸,ELZCP）and its disassembled prescriptions on gentamicin（GM）-induced ototoxicity model in vitro.Methods：After the spiral organ of cochleae of newborn mice（postnatal days：2-3）cultured for 24 h,GM alone or combined with water extracting-alcohol precipitating solution of ELZCP or with its disassembled prescriptions was added.Hair cells were observed under a fluorescence microscope after TRITC-phalloidin staining,and the cochlear hair cell loss rate was calculated by counting the whole cochlear hair cells and analyzed by whole cochlear hair cells analyzing software.Results： GM induced cochlear outer hair cells（OHCs）and inner hair cells（IHCs）injuries in a dose-dependent manner, and they were significantly different as compared with those in the normal control group（P〈0.05,P〈0.01）. ELZCP at the concentration of 0.003-3 mg/mL could decrease the hair cells loss induced by the 0.3 mmol/L GM （P〈0.05,P〈0.01）,the effects was in a dose-dependent manner,and the concentration of 0.3 mg/mL showed the optimal protective effect.For the ELZCP disassembled prescriptions,Liuwei-Dihuang could decrease OHC loss rate than that in the 0.3 mmol/L GM model group（P〈0.05）,but the OHC loss rate was still higher than that in the ELZCP group（P〈0.01）,which indicated that the protective effect of hair cells by Liuwei-Dihuang was not better than that of ELZCP.Poria decreased OHC loss rate from 72.1%±3.7%to 58.8%±8.2%（P〈0.05）. Conclusions：ELZCP could play a role in antagonizing the injury of cochlear hair cells induced by GM ototoxicity, and its disassembled prescriptions,Liuwei-Dihuang was the main component to protect the cochlear hair cells from GM-induced ototoxicity,and Magnetitum combined with Radix Bupleurui could strengthen the action of the whole prescription; Poria could reduce GM-induced OHC loss.

关键词： Eriong Zuoci Pill gentamicin ototoxicity hair cell cochlear culture disassembled prescriptions

弱冲击波对豚鼠耳蜗表面结构损伤的扫描电镜观察

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中华创伤杂志 1991年第5期7卷 135-138页

作者：高文元丁大连第二军医大学海医系上海仁济医院耳科实验室

豚鼠暴露157,160,163和166dB SPL峰值的冲击波10发,暴露后0.5h,8d和30d分别进行皮层声诱发电位测试和耳蜗扫描电镜观察。结果表明,暴露后阈移随峰值增大而严重,但不完全呈线性关系。随峰值不同,静纤毛损伤程度,类型,范围也不同。第3排... 详细信息

豚鼠暴露157,160,163和166dB SPL峰值的冲击波10发,暴露后0.5h,8d和30d分别进行皮层声诱发电位测试和耳蜗扫描电镜观察。结果表明,暴露后阈移随峰值增大而严重,但不完全呈线性关系。随峰值不同,静纤毛损伤程度,类型,范围也不同。第3排外毛细胞静纤毛头部弯曲和分离是可逆性病变,内毛细胞和第1排外毛细胞静纤毛紊乱,倒伏,折断和融合则和永久性阈移有关。

关键词：冲击波耳蜗静纤毛阈移

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卡铂引起的灰鼠耳蜗内毛细胞缺损模式

临床耳鼻咽喉科杂志 2005年第10期19卷 457-460页

作者：杨军丁大连吴皓王家东上海第二医科大学附属新华医院耳鼻咽喉-头颈外科上海200092 美国纽约布法罗大学听力与耳聋中心上海第二医科大学附属仁济医院耳鼻咽喉科

目的:研究卡铂损害灰鼠耳蜗内毛细胞(IHCs)的模式,即IHCs何时出现缺损、给药后不同时间基底膜上IHCs缺损的范围、基底膜上IHCs最大缺损部位以及致绝大部分IHCs缺损所需时间等。方法:对成年灰鼠采用一次性卡铂腹腔注射(100mg/kg),给药后... 详细信息

目的:研究卡铂损害灰鼠耳蜗内毛细胞(IHCs)的模式,即IHCs何时出现缺损、给药后不同时间基底膜上IHCs缺损的范围、基底膜上IHCs最大缺损部位以及致绝大部分IHCs缺损所需时间等。方法:对成年灰鼠采用一次性卡铂腹腔注射(100mg/kg),给药后不同时间处死动物,常规制备耳蜗铺片和耳蜗图,以定量观察灰鼠耳蜗毛细胞的缺损情况。结果:注射卡铂后从24h～3个月,灰鼠的外毛细胞基本无缺损。IHCs损伤模式的特征:①注射卡铂后24h耳蜗毛细胞完整无损,IHCs从注药后第3天开始出现缺损;②从注射卡铂后3d到3个月期间,IHCs的最大缺损率均出现在第1回和第2回交界处;③IHCs缺损从第1回和第2回交界处开始,范围逐渐向底回和顶回扩展,与顶回相比,底回的IHCs缺损出现早且更严重;④至注射后3个月基底膜上IHCs的缺损呈平坦型。结论:100mg/kg卡铂腹腔注射对各回IHCs的破坏是不均等的,对卡铂的敏感度不一致可能造成了各回IHCs缺损在时间上的差异。

关键词：卡铂耳蜗内毛细胞

重组腺病毒对体外培养耳蜗Corti器的转染特性

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第42期11卷 8453-8456页

作者：王苹杜波丁大连杜宝东吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科吉林省长春市130021

目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显。通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性。方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校... 详细信息

目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显。通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性。方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校听力耳聋研究中心完成。①实验材料:Fisher大鼠来源于布法罗大学的实验动物中心。AdV/EGFP是Buffalo大学Dr.Lee惠赠。②实验方法:选取出生3d的大鼠分离获取耳蜗组织。使用携带报告基因-EGFP的重组腺病毒(AdV/EGFP),以1×107,1×108,1×109,2×109VP/mL作用耳蜗,于感染后6,12,24,48h和3d,固定组织,观察感染特性。分离出生3d的大鼠耳蜗Corti器,基底膜分离后,立即进入2mL滴度为1×109VP/mL,含2mmol/L的庆大霉素病毒溶液,作用3h后平铺到胶粒上,加入含2mmol/L庆大霉素的生长培养基,作用24h后收获样品。③实验评估:采用TRITC-labeledphaloidin组织化学染色,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP和TRIC在耳蜗细胞中的表达定位。结果:①重组腺病毒可转染离体培养耳蜗组织中的各种类型细胞,外沟细胞感染率最高,其次为齿间细胞。仅有很少部分的毛细胞和螺旋神经元被感染。②在病毒滴度在107～109VP/mL的范围内,重组腺病毒感染耳蜗具有剂量依赖性,但大于这个滴度并不会增加感染效率,而且高浓度的重组病毒可造成毛细胞和外沟细胞破坏。③EGFP最早于感染后6h出现,48h达到高峰,外源基因高表达至少可维持7d。④庆大霉素损伤所有的毛细胞后,重组腺病毒能够感染多数的Deiters’细胞,齿间细胞的感染效率高于腺病毒对正常耳蜗组织的感染。结论:重组腺病毒转染效率在耳蜗各种类型细胞明显不同,重组腺病毒优先感染耳蜗支持细胞。

关键词：内耳,重组腺病毒,基因转染组织工程细胞工程

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听毛细胞表皮板的光镜与电镜联合观察

听力学及言语疾病杂志 1994年第1期 28-29+31页

作者：丁大连赵纪余上海第二医科大学附属仁济医院

本文采用光镜与扫描电镜联合观察豚鼠听毛细胞表皮板结构，以确定毛细胞表皮板的较早期病变和清晰显示毛细胞表皮板的亚显微结构，从而提供了内耳病理实验依据。

关键词：耳蜗基底膜光镜与电镜

不同种属实验动物耳蜗毛细胞年龄相关性缺失的不同模式

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同方期刊数据库

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中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2023年第4期29卷 7-13页

作者：丁大连李鹏亓卫东张建辉蒋海燕宣伟军纽约州立大学布法罗大学纽约布法罗14214 中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科广东广州510230 成都市第三人民医院耳鼻咽喉头颈外科四川成都610014 广西中医药大学第一临床医学院耳鼻咽喉头颈外科广西南宁530023 复旦大学附属华山医院耳鼻咽喉头颈外科上海200040

目的展示自然衰老和耳聋相关基因遗传缺陷之间耳蜗毛细胞缺失的不同模式。方法用不同龄的长尾猴、南美栗鼠、豚鼠、Sprague-Dawley大鼠、CBA/CaJ小鼠、C57BL/6J小鼠、A/J小鼠、DBA/2J小鼠和侏儒灰色突变纯合子(dwg/dwg)小鼠作为受试对... 详细信息

目的展示自然衰老和耳聋相关基因遗传缺陷之间耳蜗毛细胞缺失的不同模式。方法用不同龄的长尾猴、南美栗鼠、豚鼠、Sprague-Dawley大鼠、CBA/CaJ小鼠、C57BL/6J小鼠、A/J小鼠、DBA/2J小鼠和侏儒灰色突变纯合子(dwg/dwg)小鼠作为受试对象。所有测试动物的耳蜗基底膜都被制作成平坦的耳蜗基底膜铺片。沿着耳蜗基底膜的全长,基底膜上所有的内外毛细胞都被完整计数,毛细胞的计数结果被输入到耳蜗图软件并自动生成每组实验条件的平均耳蜗图。结果在天然衰老的动物中,耳蜗毛细胞的缺失总是发生在老年阶段。与此不同的是,在耳聋相关基因缺陷的动物中,耳蜗毛细胞的缺失却是发生在青年阶段甚至幼年阶段。发生在天然老化动物的耳蜗毛细胞缺失总是呈均匀分布或从耳蜗的顶回向底回扩展。但是,发生在具有耳聋相关基因遗传缺陷动物的耳蜗毛细胞缺失却通常表现为从耳蜗的底回向顶回扩展。结论本实验观察结果表明,发生在天然衰老的不具备耳聋相关基因缺陷动物身上的年龄相关性耳蜗毛细胞缺失反映的是真正由衰老引起的耳蜗退化性病变,而发生在伴有耳聋相关基因遗传缺陷的年幼动物身上的年龄相关性耳蜗毛细胞缺失可能与耳聋相关基因的遗传缺陷有关。

关键词：耳聋耳蜗毛细胞图毛细胞缺失年龄相关性耳蜗毛细胞缺失耳聋相关基因缺陷

老龄小鼠耳蜗mtDNA3867bp大片缺失(英文)

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Chinese Medical Journal 2002年第9期115卷 1390-1393,155页

作者：张欣欣韩东一丁大连戴朴杨伟炎姜泗长 Richard J.Salvi 北京中国人民解放军总医院耳鼻咽喉科北京100853 美国纽约洲Buffalo大学听力及聋病康复中心

目的　探讨老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失情况 ,明确老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失的位置。方法　应用套式PCR和DNA测序技术对不同月龄 12 9/CD1杂交小鼠耳蜗 31个 (2月龄 7个 ,7- 10月龄 16个 ,17- 19月龄 8个 )进行定性及定量检测。结果　 1 小鼠耳... 详细信息

目的　探讨老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失情况 ,明确老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失的位置。方法　应用套式PCR和DNA测序技术对不同月龄 12 9/CD1杂交小鼠耳蜗 31个 (2月龄 7个 ,7- 10月龄 16个 ,17- 19月龄 8个 )进行定性及定量检测。结果　 1 小鼠耳蜗mtDNA386 7bp大片缺失 ,缺失发生在nt910 3-nt12 970之间 ,其两侧nt90 89-nt910 3和nt12 95 6-nt12 970为核苷酸完全相同的 15bp重复序列。 2 随着小鼠月龄的增加 ,耳蜗mtDNA386 7bp缺失发生率有明显增加的趋势 ,2月龄小鼠未发现缺失 (0 /7) ;17- 19月龄小鼠 (7/8)明显高于 7- 10月龄小鼠 (4/16 ) (P <0 0 1)。 3 缺失mtDNA/总mtDNA比值 ,17- 19月龄小鼠明显高于 7- 10月龄小鼠 (P <0 0 1)。结论　老龄小鼠耳蜗出现mtDNA386

关键词： mtDNA3867bp基因老年性聋基因缺乏

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实验动物前庭感觉毛细胞的定量观察

中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2022年第6期28卷 11-18页

作者：丁大连李鹏亓卫东张建辉纽约州立大学布法罗大学纽约布法罗14214 中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科广东广州510230 成都市第三人民医院耳鼻咽喉头颈外科四川成都610014 复旦大学附属华山医院耳鼻咽喉头颈外科上海200040

目的测量常用实验动物内耳前庭感觉区的实际面积和量化分析前庭各个感觉区的毛细胞总数或密度。方法①制作CBA/CaJ小鼠、裸鼠、SD大鼠、豚鼠、南美栗鼠、新西兰白兔和非洲黑长尾猴的球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片及壶腹嵴铺片,所有铺片样品... 详细信息

目的测量常用实验动物内耳前庭感觉区的实际面积和量化分析前庭各个感觉区的毛细胞总数或密度。方法①制作CBA/CaJ小鼠、裸鼠、SD大鼠、豚鼠、南美栗鼠、新西兰白兔和非洲黑长尾猴的球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片及壶腹嵴铺片,所有铺片样品来自每种受试动物的6个颞骨,在放大100倍的光学显微镜下拍摄2个囊斑铺片的整体照片;②应用Image J软件的图像测量程序,测量了上述7种常用实验动物球囊斑和椭圆囊斑的实际面积;③用网格将球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片照片上的前庭感觉区划分为一个个方块区域。在放大400倍的光学显微镜下准确计数每个方格内的毛细胞数量,然后将每个方格的毛细胞计数结果相加以获得每种受试动物球囊斑和椭圆囊斑上的毛细胞总数;④应用前庭小视野定量观察技术计算出前庭各个感觉区小视野范围内的毛细胞密度。结果①从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑面积依次为(0.193±0.009)、(0.216±0.008)、(0.323±0.010)、(0.528±0.035)、(0.687±0.065)、(1.237±0.075)、(1.371±0.032)mm 2;椭圆囊斑的面积依次为(0.193±0.020)、(0.208±0.013)、(0.321±0.011)、(0.526±0.034)、(0.795±0.017)、(1.224±0.082)、(1.388±0.048)mm 2;②从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑毛细胞的总数依次为(2476.3±64.4)、(2389.8±47.8)、(3135.3±191.6)、(4882.2±208.7)、(6128.5±242.9)、(10572.2±464.4)、(10992.7±397.4)个;椭圆囊斑毛细胞的总数依次为(2491.4±54.8)、(2368.0±46.1)、(3218.8±82.9)、(4925.3±271.1)、(7794.0±386.1)、(11347.4±435.7)、(11114.5±410.6)个;③从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的球囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为101.0±5.79(微纹区)/120.8±4.15(周边区),95.5±3.91(微纹区)/109.2±5.26(周边区),78.4±6.54(微纹区)/94.8±4.38(周边区),60.0±4.74(微纹区)/84.6±2.61(周边区),57.2±3.83(微纹区)/80.0±3.54(周边区),53.8±4.21(微纹区)/68.0±4.18(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的椭圆囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为103.8±5.02(微纹区)/119.2±3.70(周边区),91.2±2.49(微纹区)/106.4±4.16(周边区),74.1±3.54(微纹区)/90.8±3.56(周边区),60.4±4.98(微纹区)/81.6±2.07(周边区),57.8±1.92(微纹区)/77.8±3.70(周边区),54.0±2.74(微纹区)/66.4±2.51(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的壶腹嵴毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为112.4±6.38,105.5±3.51,95.2±3.42,84.0±7.16,78.2±2.86,70.8±2.39。可见由于体型较小动物毛细胞的细胞体比体型较大动物毛细胞的细胞体小,因而体型较小动物的前庭毛细胞密度高于体型较大动物的前庭毛细胞密度。另外,每种实验动物球囊斑和椭圆囊斑微纹区的毛细胞密度相似,周边区的毛细胞密度也大致相同,但是同种实验动物囊斑微纹区的毛细胞密度却低于周边区的毛细胞密度。此外,壶腹嵴毛细胞的密度与球囊斑和椭圆囊斑周边区的毛细胞密度几乎相同。鉴于某些损害因素往往具有选择性破坏囊斑微纹区毛细胞的表现,因此囊斑微纹区的毛细胞密度应该与囊斑周边区的毛细胞密度区分开来进行统计,必要时甚至需要把Ⅰ型毛细胞和Ⅱ型毛细胞也区分开来分别予以病理学改变的定量评估。结论本研究采用的前庭测量方法和获得的前庭各个感觉区的测量数据和毛细胞总数及毛细胞密度,为前庭病理学研究的定量分析提供了有益的参考经验和必要的参考数据。

关键词：前庭球囊斑椭圆囊斑壶腹嵴毛细胞

灰鼠畸变产物耳声发射改变和外毛细胞缺失程度的相关分析

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第2期44卷 145-149页

作者：于栋祯丁大连殷善开 Richard J Salvi 上海交通大学附属第六人民医院耳鼻咽喉科上海交通大学(医学院)耳鼻咽喉科研究所 200233 纽约州立大学布法罗分校听力和耳聋中心

目的探讨灰鼠畸变产物耳声发射（DPOAE）幅值的降低与外毛细胞缺失率之间的关系。方法联合应用顺铂和利尿酸钠，建立灰鼠耳蜗毛细胞损伤模型。12只灰鼠在静脉注射利尿酸钠（40mg／kg）同时，腹腔注射顺铂（0．2mg/kg），分别于用药前和... 详细信息

目的探讨灰鼠畸变产物耳声发射（DPOAE）幅值的降低与外毛细胞缺失率之间的关系。方法联合应用顺铂和利尿酸钠，建立灰鼠耳蜗毛细胞损伤模型。12只灰鼠在静脉注射利尿酸钠（40mg／kg）同时，腹腔注射顺铂（0．2mg/kg），分别于用药前和用药后的1周、2周及3周在清醒状态下检测动物DPOAE，并在施行最后1次DPOAE检测后处死动物。常规制备灰鼠耳蜗基底膜铺片并进行全耳蜗毛细胞计数。计算用药前和处死前DPOAE幅值的改变程度，通过Person相关分析对DPOAE幅值的降低与外毛细胞缺失程度之间的相关性进行分析。结果顺铂和利尿酸钠引起灰鼠耳蜗外毛细胞缺失的特点是病变始发于基底膜的底回并逐渐向顶回发展，外毛细胞的缺损程度沿着基底膜从底回向顶回逐渐减轻，而不同频率DPOAE幅值降低的程度亦遵循从高频向低频发展的规律，各频率DPOAE在注射顺铂和利尿酸钠后的幅值改变与基底膜上相应部位的外毛细胞缺损程度存在一定的对应关系（r=0．796，P〈0．05）。外毛细胞每损失1％，可引起约0．24dB的DPOAE幅值降低。结论在灰鼠耳蜗损伤模型中，从DPOAE幅值的变化可以大致评估耳蜗外毛细胞的缺失程度。

关键词：毛细胞外耳声发射自发性顺铂依他尼酸毛丝鼠属