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一个纯合家族性高胆固醇血症家系低密度脂蛋白受体基因突变的检测

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中华检验医学杂志 2008年第7期31卷 774-779页

作者：丁军发郑芳周新程小欢马俊婕陈永梅武汉大学中南医院基因诊断中心 430071

目的检测家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia，FH）患者低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor，LDLR）的基因突变。方法提取家系中，临床通过典型特征和血脂检测诊断为家族性高胆固醇血症患者的基因组DN... 详细信息

目的检测家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia，FH）患者低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor，LDLR）的基因突变。方法提取家系中，临床通过典型特征和血脂检测诊断为家族性高胆固醇血症患者的基因组DNA，首先检测载脂蛋白B100（apoB100）基因R3500Q突变，以排除家族性apoB100缺陷症（Familial defective apoB100，FDB）。然后用降落聚合酶链反应（TOUCH-DOWN PCR）扩增该基因的启动子和全部18个外显子，再用单链构象多态性（SSCP）方法分析PCR产物，并对电泳结果异常者进行DNA测序分析。用ANTHEPROT 5．0软件对突变LDLR进行二级结构分析，然后对突变LDLR进行SWISS MODEL在线三级结构预测。结果通过SSCP和DNA测序发现该家系患者13号外显子存在A606T的纯合突变，采用ANTHEPROT 5．0软件的GORⅠ法对突变型和野生型蛋白质进行二级结构分析，可见突变蛋白的突变区域部分螺旋结构被转角结构和无规卷曲取代，其二级结构发生了改变。突变LDLR三级结构预测未发现主链结构的变化。结论结果表明，LDLR基因A606T的突变可能是此高胆固醇血症家系的致病原因所在。

关键词：高胆固醇血症,家族性受体,LDL 纯合子突变

检测α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A多态性的快速方法

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检测α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A多态性的快速方法

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：马俊婕郑芳周新陈咏梅丁军发武汉大学中南医院基因诊断中心

目的建立一种检测α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A多态性的快速可靠方法。方法我们针对UTR 2660G/A这一多态性位点设计了特异性的扩增引物,应用PCR-RSP(PCR- restriction site polymorphism)方法在80例正常对照中进行相关分析。结果... 详细信息

目的建立一种检测α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A多态性的快速可靠方法。方法我们针对UTR 2660G/A这一多态性位点设计了特异性的扩增引物,应用PCR-RSP(PCR- restriction site polymorphism)方法在80例正常对照中进行相关分析。结果在中国汉族人群中,只有一种杂合基因型存在于α2-肾上腺素能受体基因2660G/A位点。结论这一方法在检测α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A的多态性上代表了一种简便,经济和省时的技术。它为我们将来在疾病中对α2-肾上腺素能受体基因UTR 2660G/A的多态性的研究提供了一种有用的方法。

关键词： PCR-RSP 多态性 α2-肾上腺素能受体基因

a2-肾上腺素能受体基因的mRNA非翻译区2660G/A多态性在中国汉族正常人群中的分布研究

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a2-肾上腺素能受体基因的mRNA非翻译区2660G/A多态性在中国汉族正...

湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会

作者：马俊婕郑芳陈永梅丁军发张海燕武汉大学医学院第二临床学院

目的研究a2-肾上腺素能受体基因的 mRNA 非翻译区2660G/A 多态性在中国汉族正常人群中的分布。方法从临床体检病人中随机抽取200份正常人抗凝血,采用改良 NaI 法提取外周血白细胞 DNA。针对此位点设计引物用 PCR 扩增该片段,然后用限制... 详细信息

目的研究a2-肾上腺素能受体基因的 mRNA 非翻译区2660G/A 多态性在中国汉族正常人群中的分布。方法从临床体检病人中随机抽取200份正常人抗凝血,采用改良 NaI 法提取外周血白细胞 DNA。针对此位点设计引物用 PCR 扩增该片段,然后用限制性片段长度多态性(RFLP)方法分析。最后采用 SPSS 13.5统计学分析软件对所得结果进行分析。结果 a2-肾上腺素能受体基因的 mRNA 非翻译区2660G/A 多态性在中国正常汉族人群中的分布不存在统计学差异。结论由于 a2-肾上腺素能受体基因的 mRNA 非翻译区2660G/A 多态性在中国正常汉族人群中分布无差异,所以可选择正常人群用于该多态性在疾病中的相关性研究。

关键词： a2-肾上腺素能受体基因多态性限制性片段长度多态性

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低密度脂蛋白受体的基因突变检测与功能分析

低密度脂蛋白受体的基因突变检测与功能分析

湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会

作者：程小欢郑芳周新熊陈岭丁军发陈咏梅武汉大学中南医院基因诊断中心

目的检测家族性高胆固醇血症(Familial Hypercholesterolemia ,FH)患者低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDLR)的基因突变,并对淋巴细胞表面 LDLR 功能进行检测。方法以一家系中四例临床诊断为家族性高胆固醇血症患... 详细信息

目的检测家族性高胆固醇血症(Familial Hypercholesterolemia ,FH)患者低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDLR)的基因突变,并对淋巴细胞表面 LDLR 功能进行检测。方法以一家系中四例临床诊断为家族性高胆固醇血症患者的基因组 DNA 为模板,首先检测载脂蛋白 ApoB100基因 R3500Q突变,以排除家族性 ApoB100缺陷症 (Familial defective apolipoprotein B-100,FDB)。然后用降落 PCR 方法,扩增 LDLR 基因的启动子和外显子片段,用单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP) 方法进行分析,对可疑外显子的 PCR 产物进行 T/A 克隆,测序分析,并检索 FH 突变数据库。同时,用人淋巴细胞与荧光探针 Dil 标记的 LDL 发生结合反应,再通过流式细胞仪检测, 显示具有功能性 LDLR 的淋巴细胞比例。结果该家系患者10号外显子均出现杂合突变, 第462位密码子由 TGG 突变为 TAG,导致在462位提前出现终止密码子(W462X)。具有功能性 LDLR 的淋巴细胞占总淋巴细胞比例患者为63.7%,健康对照者为77.3%,患者淋巴细胞 LDLR 活性约为健康对照者的82.4%,出现一定程度的降低。结论本研究利用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法筛查到一个低密度脂蛋白受体基因的突变位点,结合淋巴细胞摄取 LDL 功能的测定结果,提示该突变是导致本 FH 家系患者患病的一个主要原因。

关键词：家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体流式细胞仪

家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体的基因突变检测

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家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体的基因突变检测

湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会

作者：丁军发郑芳周新程小欢马俊婕陈咏梅武汉大学中南医院基因诊断中心

目的检测家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDLR)的基因突变。方法以一家系中临床诊断为家族性高胆固醇血症患者的两姐妹基因组 DNA 为模板,首先检测 ApoB... 详细信息

目的检测家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDLR)的基因突变。方法以一家系中临床诊断为家族性高胆固醇血症患者的两姐妹基因组 DNA 为模板,首先检测 ApoB100基因 R3500Q 突变,以排除家族性 ApoB100缺陷症,然后用降落聚合酶链反应(Touch-down PCR) 扩增该基因的启动子和18个外显子片段,再用单链构象多态性(SSCP)方法分析 PCR 产物,并对电泳结果异常者进行 DNA 测序分析,并检索 FH 数据库。结果发现该家系患者 13号外显子存在 A606T 的纯合突变,属于第5类突变:再循环缺陷型,即本型受体能够结合 LDL 也能内移入细胞,但在内体内不能与 LDL 分离,参加下一轮的循环。结论本研究利用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法筛查到低密度脂蛋白受体的一个突变位点(A606T),此位点的突变可能是本家系 FH 患者的致病原因,可通过 LDLR 的功能检测来进一步验证。

关键词：家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体聚合酶链反应-单链构象多态性

超速离心—ALBK法测定血清低密度脂蛋白胆固醇

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超速离心—ALBK法测定血清低密度脂蛋白胆固醇

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：陈永梅郑芳周新马俊杰郭书忍丁军发武汉大学中南医院基因诊断中心

目的建立新的预期用作参考方法的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)准确测定方法,用于对现有常规方法进行评价、对胆固醇标准参考物定值、研制定值质控血清等。方法首先用经典和常见脂蛋白分类方法即密度梯度超速离心法分离LDL-C:用固体溴化钠... 详细信息

目的建立新的预期用作参考方法的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)准确测定方法,用于对现有常规方法进行评价、对胆固醇标准参考物定值、研制定值质控血清等。方法首先用经典和常见脂蛋白分类方法即密度梯度超速离心法分离LDL-C:用固体溴化钠调整血清密度至1.400g/ml.另外分别将Nacl NaBr加入含0.01%EDTA-NaDDH2O中配成密度分别为1.006g/ml和1.063g/ml的梯度密度液。采用Type 25转头,4℃,53000rpm/min,离心7小时(美国Beckman L8-M超速离心机),超速分离低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。再透析纯化LDL.结合国际上公认的胆固醇测定之参考方法ALBK法,通过用碱性乙醇液来皂化和去蛋白从而水解胆固醇酯.通过正己烷和乙醇水溶液之间的分溶分配充分抽提胆固醇.真空干燥箱用于干燥胆固醇结晶及正己烷抽提液。干燥之胆固醇与醋酸-醋酸酐-硫酸混合液反应显色后,在620nm处具有紫外吸收特性。利用标准比较法C样=(A样×C样)÷A样来重复计算C样以检测该方法的精密度。结果经超速离心法成功分离出LDL和HDL透析纯化后结合AK法对一批血清样品重复测定20次后,计算得总变异系数CV值为3.5%～5%。结论超速离心结合AK法测定LDL-C所用脂蛋白分离采用脂蛋白定义法,AK法操作步骤中有皂化正己烷抽提及溶剂蒸发等步骤,起到充分抽提及浓缩胆固醇的作用,因此该方法特异性高.操作简便,精密度良好.可望用作LDL-C的参考方法。

关键词：低密度脂蛋白胆固醇密度梯度超速离心 AK法

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两个家族性高胆固醇血症家系的基因诊断

两个家族性高胆固醇血症家系的基因诊断

遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：郑芳程小欢丁军发周新熊陈岭马俊婕陈永梅武汉大学中南医院基因诊断中心

以两家系中临床诊断为家族性高胆固醇血症的患者的基因组 DNA 为模板,首先采用 PCR 结合限制性内切酶技术 (PCR-RFLP),检测载脂蛋白 ApoB100基因 R3500Q 突变,以捧除家族性 ApoB100缺陷症。然后用降落 PCR 方法,对启动子和18个外显子片...

以两家系中临床诊断为家族性高胆固醇血症的患者的基因组 DNA 为模板,首先采用 PCR 结合限制性内切酶技术 (PCR-RFLP),检测载脂蛋白 ApoB100基因 R3500Q 突变,以捧除家族性 ApoB100缺陷症。然后用降落 PCR 方法,对启动子和18个外显子片段进行扩增,用单链构象多态性方法分析,对可疑外显子的 PCR 产物直接进行 T/A 克隆进行核苷酸序列分析,并检索 FH 突变数据库。一号家系中四位患者10号外显子均出现杂合突变,第462位密码子由 TGG 突变

关键词：

巧构倍(半)角,妙求线段比——多方法破解一道线段比值问题

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数理天地（初中版） 2025年第1期 30-31页

作者：丁军祥甘肃省平凉市崆峒区白水镇白水初级中学 744029

线段比值问题是初中数学平面几何板块的重要问题之一,考查学生对于平面几何问题常用方法的理解程度和应用能力.解答此类问题学生需要较强的逻辑推理能力和几何构造能力,要善于在基本比值模型下探究具体问题的解法.本文结合一道典型例题... 详细信息

线段比值问题是初中数学平面几何板块的重要问题之一,考查学生对于平面几何问题常用方法的理解程度和应用能力.解答此类问题学生需要较强的逻辑推理能力和几何构造能力,要善于在基本比值模型下探究具体问题的解法.本文结合一道典型例题探究此类问题的多种解法,以供读者参考.

关键词：线段比值初中数学解题研究

学科点建设与课程建设相结合深化马克思主义理论研究与教学--南开大学国外马克思主义研究博士点学科带头人丁军教授访谈

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社会科学家 2009年第12期24卷 3-5页

作者：丁军王承就南开大学马克思主义教育学院广西大学党委宣传部

王承就（以下简称王）：丁老师。您“‘三位一体’的教学模式‘加、减、乘、除’的教学效果”的教学经验体会论文荻天津市2007年优秀思政研究成果一等奖，并在2007年教育部社科司举办的高校思想政治理论课骨干教师研修班上作经验介绍。... 详细信息

王承就（以下简称王）：丁老师。您“‘三位一体’的教学模式‘加、减、乘、除’的教学效果”的教学经验体会论文荻天津市2007年优秀思政研究成果一等奖，并在2007年教育部社科司举办的高校思想政治理论课骨干教师研修班上作经验介绍。用“加、减、乘、除”来总结思想政治理论课的教学效果确实富有创见，您能否介绍一下？

关键词：马克思主义理论研究教学模式马克思主义研究学科点建设学科带头人课程建设南开大学思想政治理论课